一种皂苷分离纯化方法技术

一种皂苷分离纯化方法，其特征在于：采用二维制备液相色谱从皂苷提取物中分离纯化皂苷单体，第一维采用反相色谱柱，流动相组成为乙腈、甲醇或乙醇中的一种或两种与水混合，洗脱方式为线性梯度或台阶梯度；第二维采用亲水色谱柱，流动相组成为甲醇、乙醇或水中的一种或两种与乙腈混合，采用等度洗脱方式。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了。采用二维制备液相色谱从皂苷提取物中高效分离纯化皂苷单体，第一维采用反相色谱柱，第二维采用亲水色谱柱。流动相组成为乙腈、甲醇、乙醇或水，无缓冲盐添加，便于样品制备后处理。采用线性梯度、台阶梯度或等度洗脱方式。选取三七叶水提物第一维制备所得三个有代表性的馏分，通过第二维亲水色谱制备获得八个皂苷单体，其中包括两对同分异构体和一个新皂苷。该方法可以实现皂苷的目标制备，可获取批量的已知活性皂苷，同时富集分离微量皂苷，从而不断丰富皂苷库，为皂苷类化合物的活性研究和单一成分的新药开发提供物质基础。【专利说明】
本专利技术涉及皂苷类化合物的分离纯化，具体地说是一种通过二维制备色谱分离技术从皂苷提取物中分离制备皂苷单体，包括常量已知皂苷、皂苷异构体和微量新皂苷等的方法。
技术介绍
阜苷(Saponins)是苷元(Sapogenins)为三職(Triterpenoids)或螺旋留烧类(SpiiOstane)化合物的一类糖苷。皂苷根据苷元连接糖链数目的不同，可分为单糖链皂苷、双糖链皂苷及三糖链皂苷。在皂苷的化学结构中，由于苷元具有不同程度的亲脂性，糖链具有较强的亲水性，使皂苷成为一种表面活性剂，用力振摇其水溶液可产生持久性泡沫。皂苷类化合物除具有表面活性、溶血、毒鱼等特性外，还具有多种生理功能，是许多中药的主要活性成分。皂苷的生物活性除与苷元有关外，与糖链的结构也关系密切。S.G.Sparg、王楠、张云峰和张存莉等分别对皂苷类化合物具有的生物活性进行了综述，这些活性主要包括防治心血管系统疾病、抗癌、降血糖、降血脂、保肝、抗炎、抗过敏、抗微生物、抗衰老、抗生育等(S.G.Sparg, Μ.E.Light, J.van Staden, Biological activities anddistribution of plant saponins, Journal of Ethnopharmacology 94 (2004)219-243 ；王楠.皂苷生物活性的研究进展，医学研究生学报，2007，20(2):211-214;张云峰，魏东，邓雁如，等.三萜皂苷的生物活性研究新进展，中成药，2006，28 (9):1349-1353 ;张存莉，吴战库，马惠玲，等.留体皂苷的生物活性研究进展，西北林学院学报，2003，18(2):95-100.)。适应中药现代化的需要，为了揭示以皂苷类化合物为主要活性成分的中药治疗疾病的物质基础，科研人员开展了大量有关皂苷类化合物的分离纯化工作。采用的方法主要是使用甲醇或稀乙醇作提取溶剂，提取液回收溶剂后，用水稀释，经正丁醇萃取或大孔树脂纯化，得粗皂苷，最后用硅胶柱色谱进行分离或高效液相制备，得到单体，常用的洗脱剂有不同比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂和水饱和的正丁醇。该方法主要存在以下问题:一是，皂苷类化合物极性较强，在正相洗脱液中的溶解性较差，导致其在硅胶柱分离时易产生拖尾和死吸附等问题；二是，皂苷类化合物一般只在紫外末端有吸收，这给制备高效液相色谱在线检测带来不便；三是，大量结构相似或同分异构体皂苷类化合物的聚类存在，对常规C18制备色谱的分离能力是一种挑战；四是，皂苷类化合物在水中浓缩时会产生大量泡沫，给反相色谱柱后样品处理带来不便；五是，化合物制备可控性差，无法实现有效的目标制备，导致大量已知化合物的重复获得，造成人力、物力的极大浪费；六是，色谱分离模式僵化，分离选择性差，使得发现新化合物的困难越来越大。五加科人参属中三种重要植物-人参(Panax ginseng C.A.Mey)、三七(PanaxNotoginseng(Burk.)F.H.Chen)和西洋参(Panaxquinquefolium L.)中已发现的人参阜苷有100多种。主要包括达玛烧型的 原人参二醇型(Protopanaxadiol)和原人参三醇型(Protopanaxatriol )、齐墩果烧型(Oleanane)以及奥克梯隆醇型(Ocotillol)阜苷。反相C18梯度洗脱是人参皂苷常用的分析方法，但分析时间一般较长。鉴于HILIC与RP分离机理完全不同，有研究报道采用HILIC分离模式等度洗脱分析人参皂苷类化合物，可有效缩短分析时间(Da Wei Louj Yoshihiro Saitoj Pawel K，Zarzyckij MitsuhiroOgawa, Kiyokatsu JinnojIsocratic separation of ginsenosides byhigh-performanceliquid chromatography on a diol column at subambienttemperatures,Anal.Bioanal.Chem.(2006) 385:96-104.；N.S.Quimingj N.L.Denolaj A.B.Solievj Y.Saitoj K.Jinnoj High performance Iiquidchromatographic separation and quantitativeanalysis of ginsenosidesusing a polyvinyl alcohol-bonded stationary phase, Chromatographia2007, 66, July (N0.1/2).；Noel S.Quimingj Nerissa L.Denolaj AzamjonB.SolievjYoshihiro SaitojKiyokatsu Jinnoj Retention behavior ofginsenosideson a poly (vinyl alcohol)-bonded stationary phase inhydrophilic interactionchromatography, Anal.Bioanal.Chem.(2007) 389:1477-1488.)。因目前商品化的亲水色谱分离材料种类很有限，将其用于皂苷类化合物的制备还鲜有报道。此外，有研究报道釆用高速逆流色谱(HSCCC)技术分离制备人参皂苷类化合物(Qizhen Du, GeroldJerzcj Reiner Waibelbj Peter Winterhaltercj Isolation ofdammarane saponins fromPanax notoginseng by high—speedcounter—current chromatography, J.Chromatogr.A 1008 (2003) 173-180.；Young Wan Ha，Soon Sung Limj In Jin Haj Yun-CheolNa，Jung-Ju Seo，Heungsop Shin,Sung Ho Son,Yeong Shik Kimj Preparativeisolation of four ginsenosides from Korean red ginseng(steam-treated Panaxginseng C.A.Meyer)，by high-speedcounter-current chromatography本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种皂苷分离纯化方法，其特征在于：采用二维制备液相色谱从皂苷提取物中分离纯化皂苷单体，第一维采用反相色谱柱，流动相组成为乙腈、甲醇或乙醇中的一种或两种与水混合，洗脱方式为线性梯度或台阶梯度；第二维采用亲水色谱柱，流动相组成为甲醇、乙醇或水中的一种或两种与乙腈混合，采用等度洗脱方式。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：梁鑫淼，郭秀洁，张秀莉，郭志谋，丰加涛，肖远胜，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：