含有aFGF的植物油体凝胶剂制造技术

油体的凝胶基质，它是由下述组份重量%组成：羧乙基纤维素????????1%—5%甘油?????????????????5%—40%尼泊金甲酯???????????0.01%—0.1%尼泊金丙酯???????????0.01%—0.1%补加注射用水至?????????100%。

【技术实现步骤摘要】
含有aFGF的植物油体凝胶剂
本专利技术生物
，具体涉及油体的凝胶基质、含有aFGF的植物油体和含有aFGF的植物油体凝胶剂及其制备方法。
技术介绍
油体是由单层的磷脂膜，内包含TAG，表面上镶嵌油体蛋白、钙结合蛋白、固醇结合蛋白组成的。储存在油体中的TAG是为种子萌发提供能量的。油体蛋白，是油体中主要的膜蛋白。它是碱性的疏水蛋白，由三个部分组成：亲脂的N端和C端，和中间的疏水区域。N端和C端则镶嵌在油体表面，暴露在细胞质中。中间的疏水区域是通过磷脂膜进入到油体内部。因此它会产生电阻和静电排斥，使油体能够独立存在。油体蛋白具有表面活性剂，使其不能与油体结合。油体的这种非结合性非常适合用作乳化剂。比起来自矿物的乳化剂更加环保和可再生。油体自身的乳化剂可以在生产食品、饲料、药物、个人护理产品和工业产品等中得到广泛的应用。在食品和饲料的生产中，从向日葵等植物中获得的油体乳化剂较其他植物更经济健康，因为它富含不饱和脂肪酸和维他命E。它们可以被用来生产沙拉酱、冰淇林、鱼饲料、宠物食品和牲畜饲料等产品。油体在药物中应用包括治疗、诊断和传递三个方面。在疫苗生产中,油体乳化剂可以作为佐料，用于生产治疗皮肤病类药物和口服药中的成分。在这些产品中，油体可以携带药品直接作用于患处。在个人护理产品中，油体应用更为广泛，如护肤品和药用护肤品中的乳霜、化妆水、化妆品、头发护理产品等；浴室中的香皂、洗露等产品。在工业应用中，油体乳化剂可被应用于生产润滑油、油漆、涂料、油墨、抛光、薄膜、纸浆、橡胶等产品。在这些应用中，油体的纯度不做严格的要求。1962年动物生理学家winten通过猪体组织研究发现，聚乙烯薄膜覆盖的伤口的愈合率是暴露伤口的2倍，同时还发表了具有突破性的研究，水疮如果不予刺破，能促进上皮表皮细胞移动，有利于伤口的迅速愈合。1974年诞生了第一块先进敷料，并提出伤口湿性愈合的理论。湿性愈合在伤口愈合进程中，可缩短伤口的治疗时间；减少换药次数，节省敷料；减轻伤口的疼痛，并且降低了费用，同时减少护理工作量。人酸性成纤维细胞生长因子是一种现代生物制品，它是人体内存在的内源性生物活性物质，它对多种软组织和神经系统的损伤具有快速修复作用，同时它又是一种神经营养因子。因此对各种创伤、烧烫伤、溃疡、神经损伤等多种疾病具有良好的治疗作用。目前，美国CardioVascularBioTherapeutics（CVBT）公司应用aFGF治疗糖尿足已进入一期临床试验已完成，已进入二期临床试验阶段。aFGF原液在室温条件下保存，随着时间的延长，其活性会逐渐降低。为了尽量延长原液的生物活性，目前外用重组人碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、外用人酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）等均制成冻干剂型，达到了延长期生物活性的目的，即有效期得以延长，药效得以保证，具有安全性高、无毒、携带方便的特点，但是，冻干剂型外用药在使用时，需首先将其稀释后，再用棉球蘸湿在患处涂抹擦拭，使用不方便。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于生产油体凝胶剂的，油体的凝胶基质。油体的凝胶基质，它是由下述组成份重量%组成：羧乙基纤维素1%—5%甘油5%—40%尼泊金甲酯0.01%—0.1%尼泊金丙酯0.01%—0.1%补加注射用水至100%所述的重量%为：羧乙基纤维素3%—4%甘油20%—30%尼泊金甲酯0.03%—0.05%尼泊金丙酯0.03%—0.05%补加注射用水至100%所述的重量%为：羧乙基纤维素1.2%甘油20%尼泊金甲酯0.05%尼泊金丙酯0.05%补加注射用水至100%本专利技术第二个目的是提供一种含有aFGF的植物油体。含有aFGF的植物油体，它是将人aFGF的核苷酸序列连接到油体表达载体p1390ONE的油体蛋白核苷酸序列的3’端，获得重组质粒p1390ONE-aFGF，转入油料作物中，栽培转基因油料作物品种，提取的种子油体；所述的油料作物为红花、花生或大豆；所述的人aFGF的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.1所示。本专利技术的第三个目的是提供一种油体凝胶剂，植物油体凝胶剂，它是包括上述的油体的凝胶基质70-90%和植物油体10-30%；本专利技术的第四个目的是提供含有aFGF的植物油体凝胶剂。含有aFGF的植物油体凝胶剂，它包括上述的油体的凝胶剂，且所述的植物油体为含有aFGF的植物油体；所述的含有aFGF的植物油体凝胶剂，还包括人血白蛋白0.05-0.2%、肝素0.001-0.003%；优选为人血白蛋白0.1%、肝素0.002%本专利技术提供了油体的凝胶基质，它是由以下述组份按重量%组成：羧乙基纤维素1%—5%、甘油5%—40%、尼泊金甲酯0.01%—0.1%、尼泊金丙酯0.01%—0.1%、加注射用水至100%；它可以混入30%的植物油体，制成的植物油体凝胶剂，37℃保存12个月，凝胶剂无霉变现象，其外观、pH等理化指标均未发生变化；本专利技术还提供了含有aFGF的植物油体，它是将人aFGF的核苷酸序列连接到油体表达载体p1390ONE的油体蛋白核苷酸序列的3’端，转入油料作物油体中表达了aFGF，提取油体，与油体的凝胶基质混合，制得的含有aFGF的植物油体凝胶剂，4℃保存12个月，aFGF活性无明显变化。附图说明图1含有aFGF的植物油体的活性测定结果具体实施方式：实施例1红花aFGF转基因种子的获得按中国专利ZL200610171662.0，公告号CN100575488C，说明书实施例2方法构建油体表达载体p1390ONE；按照植物偏好的密码子人工合成人aFGF的核苷酸序列（如序列表SEQIDNO.1所示），以人工合成的人aFGF的核苷酸序列为模板，用引物：P1：CAAGCTTGCTAACTACAAGAAGCCAAAGP2：GGAATTCTTAATCAGAAGAAACTGGCAATG扩增，将PCR产物aFGF经HindⅢ及EcoRⅠ双酶切后连接到pUC19上得到pUCaFGF。用KpnⅠ和SpeⅠ双酶切质粒pUCaFGF和油体表达载体p1390ONE后,将人工合成人aFGF的核苷酸序列连到油体表达载体p1390ONE上；获得重组质粒p1390ONE-aFGF；p1390ONE-aFGF转入农杆菌，农杆菌侵染转化愈伤组织；筛选转基因抗性愈伤组织，得到抗性植物转化苗，载培，获得红花aFGF转基因种子。实施例2红花油体的提取取红花种子30g，在无菌环境下，灭菌纯水洗涤3次，加入5倍体积的缓冲液Ⅰ（0.1MTris-KOHpH7.0,10mMKCl，1mMMgCl2,1mMEDTA,O.6M蔗糖）破碎、匀浆，三层纱布过滤后，6000g4℃离心20分钟；上层固体物质用含有0.6M蔗糖的缓冲液Ⅰ重悬，缓慢加入等体积含0.1M蔗糖的缓冲液Ⅰ，15000g、4℃离心20分钟，重复1次；上层固体物质用含有0.1M蔗糖的缓冲液Ⅰ重悬，15000g、4℃离心20分钟，重复1次。上层固体物质用不含蔗糖的缓冲液Ⅰ充分重悬，15000g、4℃离心20分钟，重复2次。得到的上层片状物即为油体，4℃备用。实施例3含有aFGF红花油体的活性测定NIH3T3细胞株用完全培养基于37℃,5%CO2培养，细胞处于对数生长期，用于生物学活性测定。消化收集细胞，用完全培养液配成5.0×104-本文档来自技高网...

【技术保护点】
油体的凝胶基质，它是由下述组份重量%组成：羧乙基纤维素????????1%—5%甘油?????????????????5%—40%尼泊金甲酯???????????0.01%—0.1%尼泊金丙酯???????????0.01%—0.1%补加注射用水至?????????100%。

【技术特征摘要】
2013.07.10 CN 201310287297.X1.含有aFGF的植物油体，它是将人aFGF的核苷酸序列连接到油体表达载体p1390ONE的油体蛋白核苷酸序列的3’端，获得重组质粒p1390ONE-aFGF，转入油料作物中，栽培转基因油料作物品种，提取的种子油体；所述的重组质粒p1390ONE-aFGF，是以如序列表SEQIDNO.1所示的人工合成人aFGF为模板，用引物：P1：CAAGCTTGCTAACTACAAGAAGCCAAAGP2：GGAATTCTTAATCAGAAGAAACTGGCAATG扩增，将PCR产物aFGF经HindⅢ及EcoRⅠ双酶切后连接到pUC19上得到pUCaFGF；用KpnⅠ和SpeⅠ双酶切质粒pUCaFGF和油体表达载体p1390ONE后,将人工合成人aFGF的核苷酸序列连到油体表达载体p1390ONE上。2.根据权利要求1所述的含有aFGF的植物油体，其特征在于：所述的油料作物为红花、花生或大豆。3.含有aFGF的植物油体凝胶剂，其特征在于：它包...

【专利技术属性】
技术研发人员：李校堃，李海燕，官丽莉，杨晶，王法微，姜潮，杜林娜，王艳芳，董园园，姚娜，刘秀明，王南，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：