本发明专利技术涉及一类小分子化合物灵菌红素（Prodiginine，PG）抑制BmNPV的作用，以及在防控家蚕核型多角体病毒病中的应用。细胞试验显示，PG在0.01-0.8μg/L浓度范围内可干扰BmNPV在细胞中的增殖，阻止病毒多角体形成；在1-300μg/L浓度范围内可选择性的导致感染BmNPV的家蚕细胞死亡，其死亡率超过97%；PG在上述使用范围内对家蚕正常细胞不表现出毒性。个体试验显示，灵菌红素在浓度范围1-10mg/只经口添饲家蚕，能使核型多角体病毒病病蚕停止进食并提前死亡，易于淘汰染病病蚕，同时对健康个体不表现出毒性。利用灵菌红素抑制BmNPV增殖及多角体的形成，同时具有加速核型多角体病毒病病蚕死亡的作用，防止并有效控制家蚕核型多角体病毒病的扩散。
【技术实现步骤摘要】
灵菌红素在防控家蚕核型多角体病毒病中的应用
本专利技术涉及兽用药物领域，具体涉及灵菌红素在防控家蚕核型多角体病毒病中的应用。
技术介绍
养蚕业作为我国传统养殖业，是多个地区农民的重要经济收入来源。2011年，我国蚕茧产量为63.74万吨，产值为218.7亿元，丝绸工业产值为2037.9亿元。家蚕密集饲养易感病，蚕病每年给养蚕业带来的损失约占蚕业生产总产值的20%，其中病毒性蚕病占总损失的八成左右，尤其以家香核型多角体病毒mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV)造成的血液型脓病危害最为严重。基于14个省91个县1782个农户的调查显示，家蚕核型多角体病毒病近年来发生范围广，其中86.92%的农户在养蚕过程中曾遭遇此病并造成大量减收(李建琴等.蚕业科学，2013，39 (2):355-364)，甚至导致部分农户或一定养蚕区域绝产。BmNPV属杆状病毒科，核型多角体病毒(NPV)属，其整个生活史可分为出芽型病毒(BV)和包涵型病毒(0DV)，在感染末期的细胞核中可观察到包被ODV的多角体形成。不同于其它类型的动物病毒，NPV通过宿主细胞微丝骨架在细胞内或细胞间进行快速移动，病毒接种Ih便可从细胞膜进入细胞核内，起始病毒基因的表达。其次，NPV采取不重复感染的策略进行快速传播，即有大量病毒感染同一个宿主细胞时，绝大部分病毒通过直接出芽的方式在细胞间大量扩散，转而感染相邻细胞(Ohkawa等.Journal of Cell Biology, 2010,190 (2): 187-195)。此外，NPV还能通过昆虫的血淋巴以及气管系统在宿主各组织间迅速传播。自然情况下，家蚕通过食下病毒多角体发生感染。NPV高效而迅速的感染特性使家蚕食入病毒多角体后在较短的时间内即可发展为全身感染。BmNPV增殖极快，具有当龄感染当龄发病的特征，家蚕感染后体内形成大量多角体，血液呈乳白色浓汁状，死亡时体壁破裂污染蚕座并成为传染源。由于BmNPV传染性极强，密集饲养过程中因为各种原因导致家蚕感染BmNPV，即使同一蚕座内仅有少量个体感染也容易引起大面积流行。如何去除传染源是家蚕核型多角体病毒病防控中最关键最棘手的问题。目前的应对措施主要是养蚕期间的体外消毒。但实际饲养过程中发生BmNPV感染后则无有效方法抑制病毒多角体形成，或有目的地淘汰患病个体。灵菌红素(Prodigiosin,PG)是一类天然红色素的总称,属于沙雷氏菌等微生物产生的次生代谢产物，具有抗菌、抗肿瘤、抗原虫、免疫调节等多种生物学活性。但灵菌红素对病毒BmNPV的抑制作用即对家蚕核型多角体病毒病的防控作用尚无研究报道。
技术实现思路
本专利技术提供灵菌红素在防控家蚕核型多角体病毒病中的应用及使用方法。 本专利技术的目的第一是将小分子化合物灵菌红素作为家蚕核型多角体病毒的抑制剂。所述的家蚕核型多角体病毒抑制剂包括含有灵菌红素的固态或液态制剂。本专利技术涉及的灵菌红素在体外实验中，其浓度范围0.01-0.8 μ g/L可干扰BmNPV在细胞中的正常增殖，阻止病毒多角体形成，多角体形成率低于1%。本专利技术涉及的灵菌红素在体外实验中，其浓度范围1-300 μ g/L可选择性的导致感染BmNPV的家蚕细胞死亡，其死亡率超过97%，但对正常细胞不表现出毒性。本专利技术的目的第二是提供灵菌红素防控家蚕核型多角体病毒病的方法，应用方法包括步骤:将所述的灵菌红素与清水混合后均匀喷洒于桑叶或饲料上添饲家蚕，用量为1-10 g灵菌红素添饲1000只家蚕。动物实验发现，灵菌红素在浓度范围1-10 mg/只经口添饲家蚕，能使核型多角体病毒病病蚕停止进食并提前死亡，同时对健康家蚕不表现出毒性。灵菌红素添饲核型多角体病毒病病蚕后，病蚕个体偏小，停止食桑直至死亡，显著区别于健康蚕体，易于淘汰。灵菌红素添饲健康家蚕后，对核型多角体病毒病具有预防作用。本专利技术的优点在于，利用灵菌红素抑制BmNPV增殖及多角体的形成，同时具有加速核型多角体病毒病病蚕死亡的作用，防止并有效控制家蚕核型多角体病毒病的扩散。【附图说明】图1为体外实验中，灵菌红素对正常家蚕细胞的安全浓度范围。当灵菌红素浓度为300 μ g/L时，细胞存活率约为94.38%。在小于300 μ g/L浓度范围内，灵菌红素对家蚕细胞不表现出毒性。图2为体外实验中，灵菌红素对BmNPV的抑制作用。A:正常家蚕细胞；B:感染BmNPV的家蚕细胞，细胞内出现大量多角体，5~6 d后细胞裂解，多角体释放；C:家蚕细胞感染BmNPV于24 h内用灵菌红素(0.1 μ g/L)处理，5~6 d后细胞内仍未见多角体产生，细胞生长良好。D:家蚕细胞感染BmNPV于24 h内用灵菌红素(I μ g/L)处理，超过97%感染细胞于处理后8 h内死亡。图3为体外实验中，灵菌红素对家蚕感染细胞存活率及多角体形成的影响。家蚕细胞感染BmNPV于24 h内用灵菌红素(Prodigiosin I μ g/L)处理或不处理(Control),细胞存活率(Cell viability)几乎为O ;相比之下，99%以上灵菌红素处理组细胞内未见有多角体(Polyhedron)形成，而不用灵菌红素处理的对照组，100%的细胞内均形成大量多角体。图4为体内实验中，添饲灵菌红素对核型多角体病毒病病蚕死亡时间的影响。Prodigiosin Treatment:试验组病蚕，感染 BmNPV 后，添饲灵菌红素！Negative Control:阴性对照组健康蚕，不感染BmNPV,只添饲灵菌红素！Positive Control:阳性对照组病蚕，只感染BmNPV，不添饲灵菌红素。87.96%试验组病蚕较阳性对照组病蚕提前2~3 d左右死亡，阴性对照组健康蚕则正常发育至上蔟。【具体实施方式】实施例一.灵菌红素的制备该实施例采用的细菌为粘质沙雷氏菌iSerratia fflarcescefls)、链霉菌iStreptomycessp.)、糖多抱菌(Saccharopo sp.)、交替假单胞菌(Pseudoal teromonas sp.)、马杜拉放线菌 (,Actinomadura sp.)。1.菌种活化 将保藏的粘质沙雷氏菌接种于LB固体培养基(1%蛋白胨，0.5%酵母膏，l%NaCl，2%琼脂；蒸馏水；pH 7.0)，30°C恒温培养48 h。同样条件下进行转接，使菌种活化。将保藏的链霉菌接种于琼脂平板(3%酵母膏，3%蛋白胨，0.5%葡萄糖，0.4%麦芽糖，0.2% MgSO4.7H20，2%琼脂；蒸馏水；pH 7.0), 30°C恒温培养48 h。同样条件下进行转接，使菌种活化。将保藏的糖多孢菌接种于琼脂平板(0.1%牛肉膏，1%葡萄糖，0.5%酵母膏，2%琼脂；蒸馏水；pH 7.0)，28°C恒温培养3 d。同样条件下进行转接，使菌种活化。将保藏的交替假单胞菌接种于琼脂平板(0.5%蛋白胨，0.1%酵母膏，0.001%FeSO4,1% NaCl, 0.25% MgSO4.7Η20，2% 琼脂；蒸馏水；ρΗ 6.5)，25°C恒温培养 3 d。同样条件下进行转接，使菌种活化。将保藏的马杜拉放线菌接种于琼脂平板(2%可溶性淀粉，0.2%酵母膏，0.1 KNO3,0.05% N本文档来自技高网...
【技术保护点】
灵菌红素在防控家蚕核型多角体病毒病中的应用。
【技术特征摘要】
1.灵菌红素在防控家蚕核型多角体病毒病中的应用。2.如权利要求1所述的灵菌红素在防控家蚕核型多角体病毒病中的应用，其特征在于，灵菌红素作为家蚕核型多角体病毒的抑制剂，该抑制剂为含有灵菌红素的液态制剂或固态制剂。3.如权利要求2所述的灵菌红素在防控家蚕核型多角体病毒病中的应用，其特征在于，所述的液态制剂辅料包括但不限于:二甲基亚砜，聚山梨酯，柠檬酸钠，甘...
【专利技术属性】
技术研发人员：周围，张琳，冯丽春，敖翔，李精华，万永继，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：
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