犬融合干扰素制造技术

本发明专利技术关于一种犬融合干扰素，包含一犬干扰素以及一犬免疫球蛋白Fc片段。该犬干扰素以及该犬免疫球蛋白Fc片段进一步可由一连接子所连接。本发明专利技术并关于一种编码该犬融合干扰素的多核苷酸以及该犬融合干扰素的用途。

【技术实现步骤摘要】
犬融合干扰素
本专利技术关于动物保健领域，特别是关于一种具有抗病毒活性的犬融合干扰素。
技术介绍
干扰素最早是在1957年由英国学者Alick Isaacs和Jean Lindenmann在进行流感病毒试验中所发现，当细胞遭受病毒感染后，会立即制造一种细胞激素，诱发邻近细胞产生抗病毒蛋白，干扰病毒的复制。该细胞激素随后被命名为干扰素(Interfeixm，IFN)。干扰素为一种醣蛋白，主要有干扰素α、β、Y三种，可经由不同的病原进行诱发产生，例如:病毒、细菌、立克次体、原虫及双股核苷酸等；诱发后的干扰素不会与病原直接作用，而是经由诱导产生抗病毒蛋白以达到抗病毒的功能，这些抗病毒蛋白包括依赖双股RNA 的蛋白激活酶(dsRNA-dependent protein kinase,PKR)、Mx 蛋白(Mx protein)及 2’，5’ -寡腺苷酸合成酶(2，，5，Oligoadenylate synthetase/RNase L, 0AS)等。其中 PKR 为一种蛋白质激酶，可使eIF2磷酸化，使宿主细胞停止转译病毒蛋白；Mx蛋白则是一种三磷酸鸟苷酸水解酶(GTPase)，可与病毒蛋白结合而干扰病毒的复制及蛋白质的运输；而OAS则可将病毒的双股RNA进行水解。另一方面，干扰素也会诱导邻近细胞产生抗病毒蛋白阻碍病毒感染其他细胞，并让细胞建立抗病毒状态，达成干扰病毒感染的效用。除了具有抗病毒作用外，干扰素还具有抗肿瘤、促进细胞分化和免疫调节等功用。目前市面上的干扰素制剂，多为针对人类所开发设计，例如:用来治疗人类B型与C型肝炎等病毒性疾病以及卡波西氏瘤(Kaposi’ s sarcoma, KS)、黑色素肿瘤(malignantmelanoma)等肿瘤疾病上的干扰素。近年来,受到高龄化、少子化的社会趋势所影响，宠物数量越来越多，也连带带动许多宠物相关行业的发展，其中最普遍的宠物-狗，也逐渐在人类工作上扮演重要角色，根据美国宠物商品制造协会(APPMA)调查显示，美国宠物相关行业的产值在2009年已达520亿美元，其中宠物医疗约占40% (约208亿美元)，宠物药品约占24% (约124.8亿美元)，而在宠物药品中，抗生素制剂及皮肤照护用品约占70 %，其余30 %则为疫苗及治疗性药物，其中治疗性药物种类少但是价格高，是一个极具有发展潜力的市场。本专利技术即是针对犬只开发专用之干扰素作为治疗性药物。
技术实现思路
本专利技术于第一部分中提供一种犬融合干扰素。由于干扰素属于小分子蛋白质，在体内半衰期短(约2~8小时)且不稳定，因此本专利技术所提供的犬融合干扰素是将犬干扰素蛋白与半衰期较长的犬免疫球蛋白IgG Fe片段融合，而形成较稳定的犬融合干扰素。于一较佳实施例中，该犬干扰素蛋白以及该犬免疫球蛋白IgG Fe片段是以由甘胺酸(Glycine，G)及丝胺酸(Serine, S)组成的连接子(linker)所连接起来的。于一实施例中，该犬干扰素蛋白为犬干扰素α 2,具有 如SEQ ID No:2所示之胺基酸序列；该犬免疫球蛋白IgG Fe片段具有如SEQ ID No:4所示之胺基酸序列；而该连接子具有如SEQ ID No:6所示之胺基酸序列；该犬融合干扰素具有如SEQ ID No:8所示之胺基酸序列。本专利技术于第二部分中提供一种编码上述犬融合干扰素的多核苷酸。本专利技术所提供之犬融合干扰素是藉由基因转殖技术而得。首先将编码犬干扰素蛋白的DNA序列，以及编码犬免疫球蛋白IgG Fe片段的DNA序列选殖到表现载体系统中，形成含有编码犬融合干扰素之DNA序列的质体，再将该质体转殖到表现系统中，经诱导蛋白质表现后而得到犬融合干扰素。于一较佳实施例中，除了将编码犬干扰素蛋白的DNA序列以及编码犬免疫球蛋白IgG Fe片段的DNA序列选殖到表现载体系统中，并将编码由甘胺酸及丝胺酸组成的连接子(linker)的DNA序列选殖到该表现载体系统中，以连接该编码犬干扰素蛋白的DNA序列以及编码犬免疫球蛋白IgG Fe片段的DNA序列。于一实施例中，该编码犬干扰素蛋白的DNA序列具有如SEQ ID No:1所示之序列，该编码犬免疫球蛋白IgG Fe片段的DNA序列具有如SEQ ID No:3所示之序列，而该编码由甘胺酸及丝胺酸组成的连接子(linker)的DNA序列具有如SEQ ID No:5所示之序列；该编码犬融合干扰素的DNA序列具有如SEQ ID No:7所示之序列。该表现载体可为原核生物表现载体或真核生物表现载体。该原核生物表现载体包含但不限于PET系列表现载体以及pGEX系列表现载体。该真核生物表现载体包含但不限于pcDNA系列表现载体。该表现系统可为原核生物表现系统(如:细菌)或真核生物表现系统(如:酵母菌、昆虫细胞、植物细胞和哺乳动物细胞等)。于一实施例中，该表现系统为大肠杆菌(Escherichia coli)。于另一实施例中，该表现系统为哺乳动物细胞。可用于本专利技术犬融合干扰素表现的哺乳动物细胞包含但不限于3T3细胞、中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamsterovary cells,CHO cells)、幼鼠肾细胞(baby hamster kidney cells,BHK cells)、人类子宫颈癌细胞(HeLa cells)，以及人类肝癌细胞0fepG2Cells)等。本专利技术于第三部分中提供一种犬融合干扰素在制备犬抗病毒药物中的用途。经试验证明，本专利技术所提供之犬融合干扰素具有诱导细胞产生抗病毒蛋白，以达到抗病毒的效果。于一实施例中，以本专利技术之犬融合干扰素(CIFNa 2-1gG Fe)诱导狗肾脏细胞(MDCK)产生抗病毒蛋白，并分别以西方墨点法以及即时定量PCR(real-time RT-PCR)分析抗病毒蛋白及其基因的表现量，结果显示，本专利技术之犬融合干扰素(CIFNa 2-1gG Fe)可诱导MDCK细胞产生抗病毒蛋白Mx蛋白，并诱导MDCK细胞增加抗病毒蛋白Mx蛋白、PKR蛋白、OAS蛋白的基因表现量。因此，本专利技术所提供之犬融合干扰素可诱导抗病毒蛋白的产生并用来制备犬抗病毒药物。 术语“预防、保护、对抗”意谓，相较于未使用本专利技术犬融合干扰素的动物或细胞样本，使用本专利技术犬融合干扰素的动物或细胞样本，具有较高的存活率，且该样本内的病毒数量较低。术语“治疗”意谓，预防或部分预防疾病、症状、病况，及/或部分或完全治愈或缓解疾病、症状、病况、或因疾病所造成的不利影响。术语“抑制”意谓，与基线相比，在质量或数量上的减少。例如，在本专利技术的背景下，抑制病毒的复制，是指与基线相比，病毒复制减少。同理，抑制病毒感染，是指与基线相比，减少病毒感染。本说明书中所述之所有技术性及科学术语，除非另外有所定义，皆为该所属领域具有通常技艺者可共同了解的意义。本专利技术以下面的实施例予以示范阐明，但本专利技术不受下述实施例所限制。【附图说明】图1:为以西方墨点法分析带有pET24a_CIFNa 2-1gG Fe质体的大肠杆菌所表现的犬融合干扰素(CIFNa 2-1gG Fe) ;M:蛋白质分子量标准(Protein Marker);第I道:以mouse anti 6x His抗体分析；第2道:以rabbit anti canine IFN抗体分析本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种犬融合干扰素，包含一犬干扰素以及一犬免疫球蛋白Fc片段。

【技术特征摘要】
1.一种犬融合干扰素，包含一犬干扰素以及一犬免疫球蛋白Fe片段。2.如权利要求1所述之犬融合干扰素，其特征在于，该犬干扰素以及该犬免疫球蛋白Fe片段是由一连接子所连接。3.如权利要求1或2所述之犬融合干扰素，其特征在于，该犬干扰素具有如SEQID No:2所示之序列。4.如权利要求1或2所述之犬融合干扰素，其特征在于，该犬免疫球蛋白Fe片段具有如SEQ ID No:4所示之序列。5.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭村勇，
申请(专利权)人：福又达生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：台湾;71