一种催化碳-氟和碳-氯键形成的卤化酶制造技术

技术编号：9854904 阅读：183 留言：0更新日期：2014-04-02 18:05

本发明专利技术属于基因工程技术领域，涉及通过基因重组技术获得具有催化C-F键和C-Cl键形成的卤化酶。以来源于巴西诺卡菌的卤化酶基因为原始基因，根据卤化酶基因在大肠杆菌体内表达的密码子偏好，进行优化，合成以大肠杆菌为表达宿主的优化卤化酶基因序列；将优化卤化酶基因序列重组到克隆载体pUC57simple，经NdeI和HindⅢ双酶切之后，连接到具有同样内切酶位点的表达载体pET28a(+)片段上，获得表达载体pWHU2401；将表达载体pWHU2401转化大肠杆菌感受态细胞，获得能够异源表达卤化酶的工程菌，放大发酵，纯化，从而获得卤化酶。本发明专利技术的卤化酶能够特异性合成5’-FDA，催化活性跟已知的卤化酶FlA活性相当。在加入L-氨基酸氧化酶时，该卤化酶也能催化形成5’-ClDA。