与微RNA-21、错配修复和结肠直肠癌相关的材料和方法技术

本发明专利技术公开了下列发现：miR-21靶向并且下调核心错配修复(MMR)识别蛋白复合物hMSH2和hMSH6。反义miR-21从而在本文中被证明为治疗剂。因此，在本发明专利技术中公开了组合物、试剂盒、疗法和其它方法，包括治疗/改善症状的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与微RNA-21、错配修复和结肠直肠癌相关的材料和方法专利技术人:CarloM.Croce, Nicola Valeri相关申请的交叉参考本申请要求2010年11月12日提交的美国临时申请号61/413，180的利益，将所述美国临时申请的公开内容通过引用并入本文。本申请要求__提交的PCT申请号_的利益，将所述PCT申请的公开内容通过引用并入本文。序列表本申请包括已以ASCII格式通过EFS-Web提交的并且通过引用整体并入本文的序列表。所述ASCII拷贝(2011年11月7日创建的)命名为53_52535_SEQ_LIST_0SURF11085.txt并且大小为3，139字节。专利
本专利技术总体上涉及分子生物学领域。更具体地，其涉及癌症相关技术。本专利技术的某些方面包括在miR-21相关的结肠直肠癌的诊断、治疗和预后中的应用。特别地，本文中论述了 miR21、错配修复和结肠直肠癌。 专利技术背景结肠直肠癌(CRC)是美国最常发生的癌症之一，预期201 ?年发生超过140，000例新病例和约50，000例死亡。基于5-氟尿嘧啶(5-FU)的化学疗法代表了在辅助以及转移情况下CRC治疗的黄金标准。然而，对嘧啶类似物治疗的原发性或获得性抗性代表了 CRC患者管理中的共同问题。这些观察突显了对抗性机制的更好理解以及更有效疗法的需要。微RNA是一类用作基因表达和细胞的动态平衡的转录后调节剂的小非编码RNA。miR-21的过表达是很多实体恶性肿瘤和恶性血液病(hematological malignancy)的共同特性。已在患有CRC的患者的血液和粪便样品中发现了 miR-21的过表达。此外，miR-21过表达与II期和III期CRC的5-FU辅助化学疗法的疗效不佳相关。错配修复(MMR)系统参与DNA损伤识别和修复。hMSH2和hMLHl用作核心MMR蛋白并且分别与蛋白质同源物hMSH3或hMSH6和hMLH3或hPMS2形成异二聚体。异二聚体形成是DNA损伤识别的基础并且代表了对于MMR蛋白同源物的稳定性至关重要的步骤。MMR蛋白的缺乏与临床试验中5-FU辅助化学疗法的减少的或不存在的益处相关。MMR受损似乎引起减少的5-FU代谢产物至DNA的掺入，从而导致5-FU治疗后减少的G2/M阻滞和细胞凋亡。miR-21的过表达与很多人肿瘤包括结肠直肠癌关联，其中其似乎调节肿瘤抑制基因、包括p21、PTEN、TGF β RII和Bax的表达。专利技术概述本专利技术证明了 miR-21靶向并且下调核心错配修复(MMR)识别蛋白复合物hMSH2和hMSH6。表达高水平的miR-21的结肠直肠肿瘤显示减少的hMSH2蛋白表达。过量产生miR-21的细胞显示作为核心MMR组分缺乏的特征的显著减少的5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的G2/M损伤停滞和细胞凋亡。此外，异种移植物研究证明miR-21过表达显著降低5-FU的疗效。本研究显示与miR-21过表达相关的MMR增变基因(mutator gene)下调可以是结肠直肠癌的疗效的重要临床指标。本专利技术提供了包含至少一种反义miRNA和至少一种另外的成分的物质组合物，其中反义miRNA是miR-21并且能够下调至少一种核心MMR蛋白，并且其中至少一种另外的成分用于治疗MMR相关疾病。优选地，所述至少一种另外的成分选自化疗药物、干细胞、AG1478、吉非替尼(Iressa)、埃罗替尼(Tarceva)、西妥昔单抗、帕尼单抗(panitumab)、扎鲁木单抗(zalutumamab)、尼妥珠单抗、马妥珠单抗和拉帕替尼。优选地,至少一种核心MMR蛋白选自 hMSHl、hMSH6 和 hMLHl。本专利技术从而提供了包含反义miR-21和5-氟尿嘧啶或其药学上可接受的制剂的物质组合物。还提供了物质组合物，其包含反义miR-21和增加人MutS同源物2的物质或其药学上可接受的制剂。还提供了包含反义miR-21和结肠直肠癌治疗化合物或其药学上可接受的制剂的物质组合物。还提供了包含有义或反义miR-21和嘧啶类似物的物质组合物。还提供了其中嘧啶类似物是5-氟尿嘧啶的物质组合物。本专利技术提供了包 括权利要求4的组合物的试剂盒。还提供了还包含用于鉴定hMSH2表达状态的物质的试剂盒。还提供了其中用于鉴定hMSH2表达状态的物质是抗体的试剂盒。还提供了还包含用于筛选测试化合物作为潜在结肠直肠癌治疗的说明书的试剂盒。本专利技术提供了影响至少一种人细胞的方法，包括向至少一种hMutSH2_表达不足的细胞引入减少表达不足的量的反义miR-21。还提供了其中至少一种hMutSH2表达不足的细胞为至少一种结肠直肠癌细胞的方法。还提供了其中至少一种hMutSH2表达不足的细胞体外存在的方法。还提供了其中至少一种hMutSH2表达不足的细胞原位存在的方法。还提供了其中至少一种hMutSH2表达不足的细胞体内存在的方法。还提供了导致至少一种hMutSH2表达不足的细胞的细胞凋亡的方法。还提供了其中至少一种hMutSH2表达不足的细胞是形成肿瘤的很多细胞的方法。还提供了其中肿瘤在引入反义miR-21后尺寸减小的方法。还提供了还包括将5-氟尿嘧啶引入至少一种hMutSH2表达不足的细胞的方法。还提供了还包括将5-氟尿嘧啶引入至少一种hMutSH2表达不足的细胞的方法。本专利技术提供了治疗具有原发性或获得性抗嘧啶类似物的结肠直肠癌的患者的方法，包括给患有原发性或获得性抗嘧啶类似物的结肠直肠癌的患者施用反义miR-21。还提供了其中患者具有下调的hMSH2的方法。还提供了还包括给患者施用另外的结肠直肠癌辅助或治疗的方法。还提供了还包括给患者施用5-氟尿嘧啶的方法。还提供了治疗患有II期或III期结肠直肠癌的患者的方法，包括给患有II期或III期结肠直肠癌的患者施用反义rniR-21。还提供了其中患者具有下调的hMSH2的方法。还提供了还包括给患者施用另外的结肠直肠癌辅助或治疗的方法。还提供了还包括给患者施用5-氟尿嘧啶的方法。本专利技术提供了治疗患有结肠直肠癌的患者的方法，包括:a.)鉴定结肠直肠癌患者是否具有减少的hMSH2表达，和b.)如果患者具有减少的hMSH2表达则利用反义miR-21治疗患者。本专利技术提供了治疗结肠直肠癌患者的方法，包括:a.)鉴定结肠直肠癌患者相较于对照是否具有减少的hMSH2表达，和b.)如果患者具有减少的hMSH2表达则利用反义miR-21治疗患者。本专利技术提供了治疗结肠直肠癌患者的方法，包括:a.)鉴定结肠直肠癌患者相较于对照是否具有减少的hMSH2表达，b.)鉴定结肠直肠癌患者相较于对照是否具有增加的miR-21表达，和c.)如果患者相较于对照具有增加的miR-21表达和减少的hMSH2表达，则利用反义miR-21治疗患者。本专利技术提供了鉴定有用的化合物的方法，包括a.)将测试化合物和反义和/或有义miR-21引入表达hMSH2的细胞，和b.)鉴定对于影响表达hMSH2的细胞是有用的测试化合物。本专利技术提供了鉴定癌细胞样品状态的方法，包括:a.)使细胞测试样品中的hMSH2和miR-21状态与对照关联，和b.)鉴定癌细胞样品状态。本专利技术提供了预测结肠直肠癌细胞样品状态的方法，包括:a.)使包含结肠直肠癌细胞的测试样品中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
物质组合物，其包含反义miR?21和5?氟尿嘧啶或其药学上可接受的制剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.11.12 US 61/413,1801.物质组合物，其包含反义rniR-21和5-氟尿嘧啶或其药学上可接受的制剂。2.物质组合物，其包含反义miR-21和增加至少一种人MMR蛋白表达的物质或其药学上可接受的制剂。3.物质组合物，其包含反义miR-21和增加人MutS同源物2的物质或其药学上可接受的制剂。4.物质组合物，其包含有义或反义miR-21和嘧啶类似物。5.权利要求4的物质组合物，其中所述嘧啶类似物为5-氟尿嘧啶。6.包含权利要求4的组合物的试剂盒。7.权利要求6的试剂盒，其还包括用于鉴定hMSH2的表达状态的物质。8.权利要求7的试剂盒，其中用于鉴定hMSH2的表达状态的物质是抗体。9.权利要求7的试剂盒，其还包括用于筛选作为潜在结肠直肠癌治疗的测试化合物的说明书。10.影响至少一种人细胞的方法，包括向至少一种hMutSH2表达不足的细胞引入减少表达不足的量的反义miR-21。11.权利要求10的方法，其中所述至少一种hMutSH2表达不足的细胞是至少一种结肠直肠癌细胞。12.权利要求10的方法，其中所述至少一种hMutSH2表达不足的细胞存在于体外。13.权利要求10的方法，其中所述至少一种hMutSH2表达不足的细胞存在于原位。14.权利要求11的方法,其中所述至少一种hMutSH2表达不足的细胞存在于体内。15.权利要求14的方法，其导致所述至少一种hMutSH2表达不足的细胞的细胞凋亡。16.权利要求15的方法，其中所述至少一种hMutSH2表达不足的细胞是形成肿瘤的很多细胞。17.权利要求16的方法，其中所述肿瘤在引入反义miR-21后尺寸减小。18.权利要求10的方法，其还包括向所述至少一种hMutSH2表达不足的细胞引入5-氟尿嘧啶。19.权利要求18的方法，其还包括向所述至少一种hMutSH2表达不足的细胞引入5-氟尿嘧啶。20.治疗患有原发性或获得性抗嘧啶类似物的结肠直肠癌的患者的方法，包括给患有原发性或获得性抗嘧啶类似物的结肠直肠癌的患者施用反义miR-21。21.权利要求20的方法，其中所述患者具有下调的hMSH2。22.权利要求20的方法，其还包括给所述患者施用另外的结肠直肠癌辅助或治疗。23.权利要求20的方法，其还包括给所述患者施用5-氟尿嘧啶。 23.治疗II期或III期结肠直肠...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·M·卡洛斯，N·瓦勒里，
申请(专利权)人：俄亥俄州立大学研究基金会，
类型：
国别省市：