一种牛蛙抗菌肽CRC及其改造体、编码核酸和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种牛蛙抗菌肽CRC，其特征在于：所述牛蛙抗菌肽CRC由28个氨基酸残基组成，分子量3282.2Da，等电点10.32，其氨基酸序列为：Lys1Lys2Cys3Lys4Phe5Phe6Cys7Lys8Val9Lys10Lys11Lys12Ile13Lys14Ser15Ile16Gly17Phe18Gln19Ile20Pro21Ile22Val23Ser24Ile25Pro26Phe27Lys28，其中Cys3和Cys7之间形成一对分子内二硫键。本发明专利技术中的牛蛙抗菌肽CRC及其改造体多肽具有分子量小、人工合成简单、抗菌作用广谱高效、真核细胞毒性和溶血活性低、盐耐受性、热耐受性和热稳定性好，具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
—种牛蛙抗菌肽CRC及其改造体、编码核酸和应用
本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种牛蛙抗菌肽CRC及其改造体、编码核酸和应用。
技术介绍
近年来，随着传统抗生素的大规模和不恰当使用，微生物对传统抗生素产生了越来越强的耐受性。医学界对微生物耐药性的应对手段是使用对耐药微生物尚未使用过的新的或者替代性的抗生素。这就需要持续开发新的抗微生物剂。抗菌肽是一种小分子多肽，对细菌、真菌、病毒和原虫等均具有杀灭作用。抗菌肽具有分子量小、结构简单、杀菌活性强、杀菌机制独特，不易引起耐药性等优点，因此具有很大的开发应用前景。目前已从不同的无尾目动物皮肤中分离到300多条不同的抗菌肽，并且其数目还在增加。本专利技术是提供一种从牛蛙体内发现的具有广谱高效的抗菌活性、极低的细胞毒性和溶血活性的新抗菌肽CRC，以及编码这条多肽的核酸序列，并提供一批具有抗菌活性的CRC改造体多肽，以及编码这些多肽的多核苷酸。
技术实现思路
本专利技术目的是:提供一种从牛蛙体内发现的具有广谱高效的抗菌活性、极低的细胞毒性和溶血活性的新抗菌肽CRC，以及编码这条多肽的核酸序列，并提供一批具有抗菌活性的CRC改造体多肽，以及编码这些多肽的多核苷酸。本专利技术的技术方案是:一种牛蛙抗菌肽CRC，其特征在于:所述牛蛙抗菌肽CRC由28个氨基酸残基组成，分子量3282.2Da，等电点10.32，其氨基酸序列为:LyslLys2Cys3Lys4Phe5Phe6Cys7Lys8Val9Lysi0LysllLysi2Ilei3Lysi4Ser15Ile16Gly17Phe18Gln19I Ie20Pro2111e22Val23Ser24I Ie25Pro26Phe27Lys28,其中 Cys3 和 Cys7 之间形成一对分子内二硫键。一种基于上述牛蛙抗菌肽CRC的具有抗微生物活性的改造体多肽，以牛蛙抗菌肽CRC的氨基酸序列为模板，通过设计改造获得的具有抗微生物活性的改造体多肽:包含以下氨基酸序列:Xl-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-Xll-X12-X13-X14-X15-1le16Gly17Phe18Gln19I I e20Pro21I I e22Val23Ser24Il e25Pro26Phe27Lys28，其中，Xl=Lys 或 Arg ；X2=Lys, Phe, He, Trp, Ser, Ala, Thr, Val, Leu 或 Gly;X3=Cys, Phe, He, Trp, Ser, Ala, Thr, Tyr, Val, Leu 或 Gly ；[0011 ] X4=Lys 或 Arg ；X5=Phe, Ala, Gly 或 Val;X6=Phe, lie, Trp, Val 或 Leu;X7=Cys, Ser, Lys, Arg, Ala 或 Gly ；X8=Lys 或 Arg ；X9=Val, Phej Trpj Leu 或 lie;XlO=Valj Phej Trpj Leu 或 lie;Xll=Lys, Arg 或 Gly ；X12=Lys, Arg 或 Gly ；X13=Phe，He, Trpj Serj Ala, Thr，Val, Leu 或 lie ；X14=Gly, Lysj Argj Ala 或 Ser ；X15=Ser, Lysj Argj Gly 或 Ala。优选的:优选所述X2 = Phe，Ile，Trp，Leu 或 Gly;X3=Cys, Phej He, Ala，Trpj Leuj Val 或 Gly ；X7=Cys, Lys 或 Arg ;X13=Phe，Trpj Leu 或 Ile ；X15=Lys或Arg。其中所述氨基酸序列至少包含SEQ IDN0:2的I到15位氨基酸，且片段长度不低于15个氨基酸残基。本专利技术的多肽的氨基酸可以是D或L-氨基酸。氨基酸可以是天然的或合成的。也包括已知的异构体(结构的、立体的、构象的和构型的)和上述氨基酸的结构类似物，和天然(翻译后修饰)或化学修饰的氨基酸，所述天然或化学修饰包括但不仅限于磷酸化、糖基化、羟基化和/或酰胺化。与牛蛙抗菌肽CRC相比，优选的改造体多肽具有分子量更小、合成成本更低、稳定性更高、毒性更低等优势。一种牛蛙抗菌肽CRC的编码基因，该牛蛙抗菌肽CRC前体的编码基因由677个核苷酸组成，其5’端至3’端序列为SEQIDN0:1所示的核苷酸序列:atgaagatctggcagtgtgtggtatggctctgtgcgatcacattggaggtggctcactct 60cagtctccggatcgggaaggatggatcagagaggccctggatctctacaaccagagagaa 120gatggagagttcctcttcaaactcctgtctgagctccccggccccctcctggaggaggag 180ggagactctccagcaatcggtttcttgataaaggagacggactgccccaaatctgaggag 240attgacttggagcgatgtgactacagcaaagacggggaggtgaaggtctgcgctctgcac 300caggaggaacaggatgtgaagtgcgtcagcctgaccgagaattcacgtagcaagcgttcc 360agcaaaaagaaaaagtgcaaattcttctgcaaagtgaaaaagaagatcaaatctatcggc 420ttccagatccctatcgtcagtatcccgtttaaatgatacgtcgcgcccgccaacgctccc 480cccgtgtgcaccgcgcaatctccgcttcatcagaaatattctctatcctggatacattgt 540atactgtgtgtgtgtaattgtatcggatgatctgcagatgacgctttttatttgcttcca 600acatttctgcagatgaatccaaataaaattatatcccgaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa 660编码牛蛙抗菌肽CRC为第370-453位核苷酸。一种用于抗菌的组合物，其中该组合物包含一种或多种牛蛙抗菌肽CRC或改造体多肽。含有牛蛙抗菌肽CRC或改造体多肽的组合物可以用作药物、杀菌剂、抗微生物制剂、动物饲料、化妆品和防腐保鲜等领域。本专利技术的牛蛙抗菌肽CRC的编码基因，可以应用于多肽重组表达、转基因动物、植物、植物部分或植物细胞中。本专利技术的优点是:本专利技术中的牛蛙抗菌肽CRC及其改造体多肽具有分子量小、人工合成简单、抗菌作用广谱高效、真核细胞毒性和溶血活性低、盐耐受性、热耐受性和热稳定性好，具有广泛的应用前景。【具体实施方式】实施例1:牛蛙抗菌肽CRC编码基因克隆:1)牛蛙肺总RNA提取:①取200mg牛蛙肺组织，放入研钵中加入液氮研磨成粉末，转移到EP管中，加入Iml总RNA提取缓冲液(Trizol，美国Life公司产品)，充分混匀，而后于4°C，12000rpm离心 IOmin0②离心取上清，加入0.2ml氯仿溶液，剧烈混匀，室温放置10分钟，而后以4°C，12000rpm离心10分钟，弃除沉淀。③本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牛蛙抗菌肽CRC，其特征在于：所述牛蛙抗菌肽CRC由28个氨基酸残基组成，分子量3282.2Da，等电点10.32，其氨基酸序列为：Lys1Lys2Cys3Lys4Phe5Phe6Cys7Lys8Val9Lys10Lys11Lys12Ile13Lys14Ser15Ile16Gly17Phe18Gln19Ile20Pro21Ile22Val23Ser24Ile25Pro26Phe27Lys28，其中Cys3和Cys7之间形成一对分子内二硫键。

【技术特征摘要】
1.一种牛蛙抗菌肽CRC，其特征在于:所述牛蛙抗菌肽CRC由28个氨基酸残基组成，分子量3282.2Da，等电点10.32，其氨基酸序列为:LyslLys2Cys3Lys4Phe5Phe6Cys7Lys8Val9Lysi0LysllLysi2Ilei3LysMseri5Ile16Gly17Phe18Gln19Ile2c1Pro21Ile22Val23Ser24Ile25Pro26Phe27Lys28,其中 Cys3 和 Cys7 之间形成一对分子内二硫键。2.一种基于权利要求1所述的牛蛙抗菌肽CRC的具有抗微生物活性的改造体多肽，其特征在于:包含以下氨基酸序列:X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-1le16Gly17Phe18Gln19Ile20Pro21Ile22Val23Ser24Ile25Pro26Phe27Lys28, 其中，Xl=Lys 或 Arg ；X2=Lys, Phe, He, Trp, Ser, Ala, Thr, Val, Leu 或 Gly;X3=Cys, Phe, He, Trp, Ser, Ala, Thr, Tyr, Val, Leu 或 Gly ；X4=Lys 或 Arg ；X5=Phe, Ala, Gly 或 Val;X6=Phe, He, Trp, Val 或 Leu;X7=Cys, Ser, Lys, Arg, Ala 或 Gly ；X8=Lys 或 Arg ；X9=Val, Phe...

【专利技术属性】
技术研发人员：王义鹏，于海宁，凌桂英，高久香，卫林，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：