微生物菌体的运输方法技术

本发明专利技术提供在能够密闭的容器内保存具有腈水合酶活性的微生物菌体的方法、以及使用该容器运输的方法；前述方法的特征在于，使填充有包含前述微生物菌体的悬浮液的前述容器内的气相部分占容器内部总容积的2%以上且20%以下。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种方法，其在将具有腈水合酶活性的微生物菌体填充至密闭容器中运输时,通过使密闭容器内部的气相部分占总容积的20%以下，由此在使腈水合酶活性保持稳定的状态下进行运输。
技术介绍
微生物产生的酶作为化学转化反应的催化剂而用于多种场合。尤其是，通过利用具有腈基的水合或水解能力的腈水合酶、腈水解酶等，能够廉价地制造化学工业上重要的酰胺、羧酸、α-羟基羧酸等。进一步，通过利用具有光学特异性水合或光学特异性水解能力的上述酶，制造作为医药、农药的重要制造原料的光学活性羧酸、氨基酸、α -羟基羧酸等也变得可能。将微生物酶作为催化剂的化学转化反应中，需要将培养以及收集的微生物菌体的酶的活性稳定地维持至使用时为止。即，必须维持酶的活性，以避免由于保管或者运输时杂菌混入、腐败、或者溶菌导致微生物酶的催化能力丧失或者降低。此处，通常通过在稳定剂、代谢抑制剂、高浓度盐类的存在下进行保存，抑制微生物菌体保存时的微生物酶的失活、腐败和溶菌，从而应用于化学转化反应。不添加上述稳定剂等的情况下，边通过冻结、冷藏或者通气搅拌维持酶的活性边进行保管或者运输。专利文献I (日本特开2004-305066号公报)中公开有通过添加腈类、酰胺类、羧酸类等稳定剂的微生物菌体的保存方法；专利文献2 (日本特开2005-295815号公报)中公开有通过添加叠氮化合物等代谢抑制剂的微生物菌体的保存方法；专利文献3 (日本特开2001-149065号公报)中公开有通过将微生物菌体的培养液成分添加至悬浮液中的微生物菌体的保存方法。另外，专利文献4 (日本专利第3163224号)中公开有通过添加高浓度无机盐类的保存方法。进一步，对于通过冷冻而进行保存的方法，已知有专利文献5 (日本特开2003-219870号公报)，对于通过通气搅拌而进行保存的方法，已知有专利文献6 (日本特开 2003-144144 号公报)。现有技术文献专利文献专利文献1:日本特开2004-305066号公报专利文献2:日本特开2005-295815号公报专利文献3:日本特开2001-149065号公报专利文献4:日本专利第3163224号专利文献5:日本特开2003-219870号公报专利文献6:日本特开2003-144144号公报
技术实现思路
专利技术要解决的问题到目前为止已知的保存方法中，使用稳定剂等添加剂的方法由于在后面的工序中需要将添加剂等进行分离，因此有对制品的品质产生影响的担心，且制造方法变得麻烦。以将菌体冷冻的方法保存的微生物菌体的悬浮液存在冷冻、融解操作麻烦等处理性的问题，另外有伴随着该操作酶活性丧失或者降低的担心。另外，从防止杂菌的増殖和菌体细胞的稳定化的观点出发，优选冷藏下保存，但需要保持低温的设备、电力，因此在冷却成本方面的负担重。将微生物菌体保存在高浓度无机盐类水溶液中的方法，需要在使用时将菌体充分地洗涤，存在添加的无机盐类、废水处理花费成本的缺点。也报告有通过通气搅拌等使微生物菌体的酶活性被维持在一定程度，然而根据酶的不同，该效果并不相同，此外通气和搅拌还需要动力，在成本方面的负担也重。因此，在现有技术的基础上，期望进一步稳定地保存具有腈水合酶活性的菌体的方法。 用于解决问题的方案本专利技术人等对于将由培养、收集而得到的微生物菌体的悬浮液廉价并且稳定地运输的条件进行深入了研究，结果发现，通过将运输中使用的容器内部的气相设为20%以下，能够稳定地将具有腈水合酶活性的菌体保存和运输，至此完成本专利技术。即，本专利技术为在能够密闭的容器内保存具有腈水合酶活性的微生物菌体的方法，其特征在于，使填充有包含前述微生物菌体的悬浮液的前述容器内的气相部分占容器内部总容积的2%以上且20%以下。另外，本专利技术为一种使用能够密闭的容器运输具有腈水合酶活性的微生物菌体的方法，其特征在于，使填充有包含前述微生物菌体的悬浮液的前述容器内的气相部分占容器内部总容积的2%以上且20%以下。本专利技术的方法中，优选将所述容器内的气相部分的比例设为5%以上且20%以下。另外，前述保存或运输的温度为例如冰点~35°C的温度。进一步，所述菌体悬浮液的分散介质为有机酸水溶液，作为有机酸可列举出例如丙烯酸。专利技术的效果根据本专利技术，通过按照使容器内部的气相部分为2%以上且20%以下的方式填充菌体悬浮液，由此能够在室温下、无搅拌的情况下在维持腈水合酶等的酶活性的状态下保存和运输大量的菌体。进一步，本专利技术提供能够将现有的保存方法中必需的劳动力、冷却成本大幅地削减，能够满足工业生产的微生物菌体的保存方法。【具体实施方式】本专利技术涉及在能够密闭的容器内保存具有腈水合酶活性的微生物菌体的方法、以及使用能够密闭的容器运输微生物菌体的方法。本专利技术的方法中，按照使容器内的气相部分为容器内部总容积的2%以上且20%以下的方式填充包含前述微生物菌体的悬浮液。需要说明的是，本说明书中引用的文献以及公开公报、专利公报等专利文献作为参照而引入本说明书中。另外，2011年I月14日申请的、作为本申请优先权基础的日本特愿2011-005780号(JP2011-005780)的权利要求书、说明书、附图以及说明书摘要所公开内容，其整体作为参照而引入本说明书中。本专利技术中，具有腈水合酶活性的微生物菌体具有生产目标酶催化剂并在菌体内蓄积或分泌于菌体外的性质。该微生物包含由自然界分离的微生物以及基因重组微生物。作为这样的微生物的代表例，可列举出例如:归属于具有腈水合酶活性的红球菌(Rhodococcus)属、戈登菌(Gordona)属、假单胞菌(Pseudomonas)属、假诺卡氏菌(Pseudonocardia)属、嗜热菌(Geobacillus)属的微生物菌体。进一步可列举出导入这些微生物的腈水合酶基因的重组微生物菌体。其中工业上优选红球菌属、戈兰登属以及导入这些微生物的腈水合酶基因的重组大肠杆菌以及重组红球菌属细菌。例如:作为红球菌属微生物的具体例，可列举出日本特公平6-55148号公报中记载的紫红红球菌J-1株(Rhodococcus rhodochrous J-1)。该株的保藏号为“FERM BP-1478”，于 1987 年 9 月 18 日保藏于独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(茨城县筑波市东I 丁目I番地I中央第6)(以下，本说明书中相同))。腈水合酶是指具有水解腈化合物并生成对应的酰胺化合物能力的酶。作为编码腈水解酶的核酸及其序列的例子，可列举出前述专利文献2所述的核酸及其序列。这样的核酸通过通常的分子生物学的手法能够导入至微生物细胞内(关于这些分子学的手法，参照以下:Sambrook, Fritsch and Maniatis, ”Molecular Cloning:A Laboratory Manual，，2ndEdition(1989), Cold Spring Harbor Laboratory Press)。本专利技术中，“能够密闭的容器”是指为了供于运输和/或保存，填充微生物悬浮液后能够密闭的容器。只要是运输时内容物不在容器内外进行移动的容器，无论怎样的形式都没有关系，为了用于工业目的，可以使用鼓形罐、储存器(container)、槽车等。对于所述容器的容量虽没有特别的限定，为了用于工业目的，优选本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在能够密闭的容器内保存具有腈水合酶活性的微生物菌体的方法，其特征在于，使填充有包含所述微生物菌体的悬浮液的所述容器内的气相部分占容器内部总容积的2%以上且20%以下。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.01.14 JP 2011-0057801.一种在能够密闭的容器内保存具有腈水合酶活性的微生物菌体的方法，其特征在于，使填充有包含所述微生物菌体的悬浮液的所述容器内的气相部分占容器内部总容积的2%以上且20%以下。2.一种使用能够密闭的容器运输具有腈水合酶活性的微生物菌体的方法，其特征在于，使填充有包含所述微生物菌体的悬浮液的...

【专利技术属性】
技术研发人员：竹内雅人，渡边文昭，
申请(专利权)人：三菱丽阳株式会社，
类型：
国别省市：