一种检测LBP基因标签单核甘酸多态性位点的方法及试剂盒技术

本发明专利技术属于分子生物学领域，具体涉及检测LBP基因标签单核甘酸多态性位点的方法及试剂盒，该方法包括步骤：1）设计特异性扩增引物和测序引物；2）用特异性扩增引物对待测标本的DNA进行PCR扩增；3）用焦磷酸测序法进行测序。本发明专利技术的方法及试剂盒能够实现快速、简便、准确、高效、实用、经济的检测LBP基因标签SNP基因型，能够满足临床检验实际工作的需要，利于LBP基因标签SNP检测预测疾病的发生、发展风险。

【技术实现步骤摘要】
—种检测LBP基因标签单核甘酸多态性位点的方法及试剂jm
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及适用于PCR扩增结合焦磷酸测序技术检测LBP基因标签单核甘酸多态性位点的方法及试剂盒。
技术介绍
1986年Tobias首次从兔血清中分离、纯化出脂多糖结合蛋白(Lipopolysaccharide binding protein, LBP)，LBP 属于 I 型急性期反应蛋白，人 LBP 蛋白由481个氨基酸组成，并且有分泌性蛋白典型的25个氨基酸组成的信号肽。LBP蛋白相对分子质量为60ku，蛋白质部分是由一条50ku的单链多肽组成，其血浆浓度为2~7mg/L，在LPS诱导急性反应后，血浆LBP浓度可明显提高。LBP主要在肝脏合成，有研究表明，肺、肠、肾、脾等肝外组织也合成LBP，其中肺是肝外组织LBP mRNA表达量最多的器官。在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者的支气管肺泡灌洗液中，LBP浓度是正常人的64倍。LBP不仅是一种血浆蛋白，还可作为ー种跨膜蛋白。这种膜结合LBP本身可嵌入单核细胞的胞膜中，同时促进脂多糖(LPS)嵌入其中，抗LBP单克隆抗体并不抑制LBP的嵌入，本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测LBP基因标签单核甘酸多态性位点的方法，其特征在于：包括以下步骤：1）特异性引物的设计根据被证实的LBP基因标签单核甘酸多态性位点，设计特异性扩增引物和测序引物，其中，所述特异性扩增引物中的一条用生物素标记；2）PCR扩增以待测标本的DNA为模板，用步骤1）所述的特异性扩增引物进行PCR反应，得PCR扩增物；3）焦磷酸测序将步骤2）所得PCR扩增物采用碱变性使其分开成单链，取其中被生物素标记的单链PCR扩增产物纯化后，与步骤1）所述测序引物进行杂交反应，并分析结果以判断所述待测标本的靶单核甘酸是否具备多态性。

【技术特征摘要】
1.检测LBP基因标签单核甘酸多态性位点的方法，其特征在于:包括以下步骤: 1)特异性引物的设计 根据被证实的LBP基因标签单核甘酸多态性位点，设计特异性扩增引物和测序引物，其中，所述特异性扩增引物中的一条用生物素标记； 2)PCR扩增 以待测标本的DNA为模板，用步骤I)所述的特异性扩增引物进行PCR反应，得PCR扩增物； 3)焦磷酸测序 将步骤2)所得PCR扩增物采用碱变性使其分开成单链，取其中被生物素标记的单链PCR扩增产物纯化后，与步骤I)所述测序引物进行杂交反应，并分析结果以判断所述待测标本的靶单核甘酸是否具备多态性。2.根据权利要求1所述的检测LBP基因标签单核甘酸多态性位点的方法，其特征在于:所述LBP基因标签单核甘酸多态性位点包括:rsl780623、rsl 1536972和rs2232618中的一个或多个。3.根据权利要求2所述的检测LBP基因标签单核甘酸多态性位点的方法，其特征在于:所述rsl780623位点的上游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，下游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，测序引物如SEQ ID NO:3所示；所述rsll536972位点的上游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，下游扩增引物的核苷酸序列如SEQ IDNO:5所示，测序引物如SEQ ID NO:6所示；所述rs2232618位点的上游扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，下`...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾灵，蒋建新，张安强，王海燕，杜娟，顾玮，岳彩黎，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第三附属医院，
类型：发明
国别省市：