一种应用微生物细胞催化法制备羟基醛的方法技术

本发明专利技术涉及一种应用微生物细胞催化法制备羟基醛的方法，包括：S1，构建膜结合乙醛脱氢酶敲除的氧化葡萄糖酸杆菌工程菌；S2，制备所述氧化葡萄糖酸杆菌工程菌的静息细胞；S3，溶解于有机溶剂的底物二元伯醇被悬浮于水溶液中的所述静息细胞氧化为羟基醛。根据本发明专利技术的方法，可以利用静息细胞作为催化剂选择性地氧化二元伯醇类化合物，从而制备多种羟基醛。与化学方法制备羟基醛相比，根据本发明专利技术的方法的副反应少，具有反应条件温和、对环境友好，操作简便，易于放大等优势。本发明专利技术的方法中所使用的水溶液-有机溶剂的两相催化体系，可解除产物羟基醛对细胞活性的抑制，且产物羟基醛主要分布于有机相中，易于产物分离。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，更具体地涉及。
技术介绍
醛是一类重要的化合物，可作为天然的风味添加剂应用于食品工业上，可作为香精香料用于化妆品工业，也可作为有机合成的中间体应用于医药、农药、香料、染料、感光材料、液晶材料等的合成工业中。一些具有醇和醛的双重性质的羟基醛化合物，在香料、食品、化妆品工业以及有机合成领域的应用尤为广泛，例如水杨醛。水杨醛，又称邻羟基苯甲醛，可用作制造香豆素、香兰素等食用香料、以及咳喘宁、紫外线吸收剂、杀虫剂、灭菌剂和电镀光亮剂的原料。近年来，香料和医药工业对无氯水杨醛的需求量越来越大，无氯水杨醛合成新工艺的研究和开发的关注度日益提升。目前，国内外主要通过氧化伯醇的方法实现醛的生产，其中又以化学催化法为主。羟基醛可通过二元伯醇的选择性、不完全氧化而获得。由于醛比醇更容易被氧化，为了控制合成的醛不被进一步氧化，化学催化条件控制严苛，且过程烦琐。此外，化学催化难以实现多羟基醇的区域选择性转化。生物催化具有效率高、专一性强、选择性高、反应条件温和、环境友好等特点。尤其在醛作为食品和化妆品使用时，生物法生产的醛可被看做天然物质，价值会有大幅提升。迄今为止本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种应用微生物细胞催化法制备羟基醛的方法，其特征在于，该方法包括：S1，构建膜结合乙醛脱氢酶敲除的氧化葡萄糖酸杆菌工程菌；S2，制备所述氧化葡萄糖酸杆菌工程菌的静息细胞；S3，溶解于有机溶剂的底物二元伯醇被悬浮于水溶液中的所述静息细胞氧化为羟基醛。

【技术特征摘要】
1.一种应用微生物细胞催化法制备羟基醛的方法，其特征在于，该方法包括:S1，构建膜结合乙醛脱氢酶敲除的氧化葡萄糖酸杆菌工程菌；S2，制备所述氧化葡萄糖酸杆菌工程菌的静息细胞；S3，溶解于有机溶剂的底物二元伯醇被悬浮于水溶液中的所述静息细胞氧化为羟基醛。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过同源重组和基因插入失活的方法来使得膜结合乙醛脱氢酶基因沉默，从而得到醛氧化途径被阻断的所述氧化葡萄糖酸杆菌工程菌。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述氧化葡萄糖酸杆菌工程菌的制备包括以下步骤:S11，以携带有乙醛脱氢酶基因的原始菌的基因组DNA为模板进行PCR扩增得到乙醛脱氢酶基因的内部片段，所述原始菌为氧化葡萄糖酸杆菌DSM2003 ;S12，将所述乙醛脱氢酶基因的内部片段与质粒载体分别进行酶切反应，将酶切反应的产物进行连接得到连接反应物；S13，将所述连接反应物转化E.coli JM109感受态细胞；S14，在克隆到载体上的乙醛脱氢酶基因内部选择合适的酶切位点Xhol，与经XhoI酶切的Kam基因的PCR产物连接，转化至感受态E.coli JM109，通过平板筛选得到重组质粒；S15，将含敲除突变载体的E.coli JM109作为供体菌用于三亲接合，受体菌为氧化葡...

【专利技术属性】
技术研发人员：林金萍，魏东芝，张行星，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：