本发明专利技术公开了一种兼性厌氧的红假单胞菌菌株，其为保藏于中国典型培养物保藏中心、且保藏号为CCTCC?NO：M2012366的菌株。该红假单胞菌菌株可抑制黄瓜霜霉病菌且促进黄瓜生长，应用时可将光合细菌菌液直接喷施施用或将菌液制备成发酵液后再进行喷施应用，其中光合细菌菌液和光合细菌发酵液的制备方法包括以下步骤：先将红假单胞菌菌株活化；再将活化培养得到的单菌落接入至血清瓶进行种子培养；然后进行生产培养，获得光合细菌菌液；将光合细菌菌液进行离心，收集上清液，再经细菌过滤器过滤后得到光合细菌发酵液。本发明专利技术具有生产成本低、拮抗效果好、高效、无毒、环保等优点。
【技术实现步骤摘要】
红假单胞菌菌株及其在抑制黄瓜霜霉病菌、促进黄瓜生长中的应用
本专利技术涉及一种光合细菌及其应用，尤其涉及一种红假单胞菌菌株及其在抑制黄瓜霜霉病菌以及促进黄瓜生长中的应用。
技术介绍
黄瓜霜霉病是影响黄瓜种植的最重要的病害之一，在整个黄瓜生育期，如遇适宜发病条件，无论是露天还是保护地栽培，其浸染、传播流行速度极快，均能对黄瓜的产量造成严重损失。目前，防治黄瓜霜霉病最主要和最有效的措施是采用杀菌剂，然而，由于化学药剂选择压力，单一药剂或单一类型杀菌剂地不合理使用，极易造成病原菌的抗药性快速上升，进而导致杀菌剂用量上升，从而可能引起农产品中杀菌剂的超标，过量杀菌剂的投放，其一旦渗透进土壤或地下水层也将污染生态环境。随着全社会环境保护意识的增强，农药残留带来的农产品安全以及环境污染问题愈来愈受到关注。然而，从目前农业生产现状以及农业技术水平来看，杀菌剂仍将继续使用且使用量还会继续上升。杀菌剂作为控制作物病害的有效手段，是目前及今后相对较长时期内最主要的技术措施之一。因此，寻找杀菌剂的替代技术和方法，是目前最具有实际应用前景的研究方向。生物防治特别是微生物防治研究，是国内外研究作物病害防治的热点。微生物防治作物病害具有无毒、无污染的特 点，而且微生物菌剂生产简便、田间操作与杀菌剂一样方便。光合细菌是地球上最早出现的具有原始光能合成体系的原核生物，分布广泛，遍及江河、沼泽、湖泊和海洋等，具有固氮、制氢、固碳、脱硫等作用。光合细菌生命力强，容易培养，生长速度繁殖快，本身无毒，富含蛋白质、维他命、类胡萝卜素等。目前已经被广泛的研究，发现光合细菌在种植、养殖、新能源开发利用以及医药方面具有十分广阔的前景。目前在黄瓜霜霉病防治方面，已有一些较好的微生物资源被挖掘，然而，尚无光合细菌应用于黄瓜霜霉病的报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种生产成本低、拮抗效果好、高效、无毒、环保的红假单胞菌菌株，还提供该菌株在抑制黄瓜霜霉病菌、促进黄瓜生长中的应用，使其能以环保、高效、低成本、方便快捷的操作实现抑制黄瓜病害的危害，促进黄瓜等蔬菜的生长。为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案为一种兼性厌氧的红假单胞菌菌株，所述红假单胞菌(Rhodopseudomonas sp.)菌株为保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)、且保藏号为CCTCC NO:M2012366的菌株(以下简称红假单胞菌CCTCCM2012366)。红假单胞菌CCTCC M2012366的保藏单位为中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏单位的地址位于中国武汉大学，保藏日期为2012年9月20日，该红假单胞菌CCTCCM2012366 被命名为红假单胞菌 S_1 (Rhodopseudomonas sp.S-1)。经过我们的检测，本专利技术的红假单胞菌CCTCC M2012366具有以下主要特征:G-，个体形态为杆状，V-P反应阳性，甲基红反应阳性，不能利用淀粉，H2S反应阳性，明胶液化阳性，吲哚反应阳性，柠檬酸盐实验阴性，脲酶实验阴性，过氧化氢酶实验阳性，3%NaCl中能生长，最适生长温度为30°C~35°C，最适生长pH值为6.5~7.5，菌体的特征吸收峰为375nm、805nm和865nm,测定的16S rDNA序列长度为1389bp,在Genbank中的登录号为KC491187。满足上述特征描述的红假单胞菌CCTCC M2012366在下述应用中的效果更好。作为一个总的技术构思，本专利技术还提供一种上述的红假单胞菌CCTCC M2012366在抑制黄瓜霜霉病菌中的应用。作为一个总的技术构思，本专利技术还提供一种上述的红假单胞菌CCTCC M2012366在促进黄瓜生长中的应用。上述的应用中，优选的，将所述红假单胞菌CCTCC M2012366制备成光合细菌菌液直接喷施应用或将该红假单胞菌菌株制备成光合细菌发酵液后再进行喷施应用。所述光合细菌菌液及光合细菌发酵液的制备方法包括以下步骤:(I)活化:将所述 红假单胞菌CCTCC M2012366的保存种按双层平板培养法进行培养，培养至红色单菌落出现；(2)种子培养:将步骤(1)中培养得到的单菌落接入至血清瓶，用红假单胞菌菌株种子培养基培养至对数生长期；(3)生产培养:将步骤(2)培养得到的培养液接入至生产瓶(例如5L的生产瓶，该瓶可以为透明玻璃瓶)中，用红假单胞菌菌株生产培养基培养至对数生长期得到光合细菌菌液，所述培养液的接入量不少于红假单胞菌菌株生产培养基总体积的1% ;(4)光合细菌发酵液制备:将步骤(3)培养得到的光合细菌菌液进行离心，收集离心后的上清液，再经细菌过滤器过滤后得到光合细菌发酵液。上述的应用中，所述双层平板培养法优选是采用双层PSB固体培养基进行培养，所述双层PSB固体培养基包含以下质量的成分=K2HPO40.2g、KH2PO40.8g、MgSO40.2g、CaSO4.2H200.lg、NaMoO4.2H200.0033g、FeSO4.7H200.005g、酵母提取粉 L 5g 和琼脂粉(agar) 13g/18g (双层平板培养基上层培养基琼脂粉18g/L、下层培养基琼脂粉13g/L)、蒸馏水 1L，pH7.0 ~7.2。上述的应用中，所述红假单胞菌菌株种子培养基、红假单胞菌菌株生产培养基均优选用PSB液体培养基，所述PSB液体培养基包含以下质量的成分=K2HPO40.2g、KH2PO40.8g、MgSO40.2g、CaSO4.2H200.lg、NaMoO4.2H200.0033g、FeSO4.7H200.005g 和酵母提取粉(yeast extract) 1.5g、蒸懼水IL ;所述PSB液体培养基的pH值为7.0~7.2。上述的应用中，所述活化、种子培养和生产培养过程中，培养温度均控制在30°C~350C，培养pH值为7.0~7.2，光照条件均控制为2000Lx~3000Lx。上述的应用中，所述步骤(3)中，培养液的接入量优选为红假单胞菌菌株生产培养基总体积的1%~3%。上述的应用中，所述步骤(4)中，离心时的转速优选控制在4000rpm~6000rpm,离心时间优选控制在5min~8min。通过对上述制备方法进行优化，包括对培养基、培养条件及培养工艺参数的优化，能使本专利技术的红假单胞菌CCTCC M2012366生长更加迅速，从而缩短生产时间(全流程时间一般仅需24天左右)；工艺成本及产品价格更为低廉，便于农业生产应用中进行推广；应用方法更为简便，易于操作，培养结束后，菌体数量可以达到2.0X IO9个/mL以上，培养完成后出瓶可以直接分装成液体菌剂。与现有技术相比，本专利技术的优点在于:本专利技术提供了一种生产成本低、高效、无毒、环保的红假单胞菌CCTCC M2012366，该菌株可通过简单、快捷、低成本的操作方法制备得到光合细菌菌液和光合细菌发酵液，该菌株菌液和发酵液可促进黄瓜生长，发酵液可高效抑制黄瓜霜霉病菌，应用时不仅操作简单、方便、工艺成本低，而且具有明显的防治黄瓜霜霉病效果和促生长效果，为今后黄瓜等蔬菜的种植创造了更加优异的生长环境。一种红假单胞菌菌株(Rhodopseudomonas sp S-1),其保藏单位为中国典型培养物保藏中心本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种兼性厌氧的红假单胞菌菌株，其特征在于：所述红假单胞菌（Rhodopseudomonas?sp.）菌株为保藏于中国典型培养物保藏中心、且保藏号为CCTCC?NO：M2012366的菌株。
【技术特征摘要】
1.一种兼性厌氧的红假单胞菌菌株，其特征在于:所述红假单胞菌(Rhodopseudomonas sp.)菌株为保藏于中国典型培养物保藏中心、且保藏号为CCTCC NO:M2012366的菌株。2.一种如权利要求1所述的红假单胞菌菌株在抑制黄瓜霜霉病菌中的应用。3.—种如权利要求1所述的红假单胞菌菌株在促进黄瓜生长中的应用。4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，将所述红假单胞菌菌株制成光合细菌菌液直接喷施应用或将该红假单胞菌菌株制备成光合细菌发酵液后再进行喷施应用，所述光合细菌菌液及光合细菌发酵液的制备方法包括以下步骤: (1)活化:将所述红假单胞菌菌株的保存种按双层平板培养法进行培养，培养至红色单菌落出现； (2)种子培养:将步骤(1)中培养得到的单菌落接入至血清瓶，用红假单胞菌菌株种子培养基培养至对数生长期； (3)生产培养:将步骤(2)培养得到的培养液接入至生产瓶中，用红假单胞菌菌株生产培养基培养至对数生长期得到光合细菌菌液，所述培养液的接入量不少于红假单胞菌菌株生产培养基总体积的1% ； (4)光合细菌发酵液制备:将步骤(3)培养得到的光合细菌菌液进行离心，收集离心后的上清液，再经细菌过滤器过滤后得到光合细菌发酵液。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于:所述双层平板培养法是采用双层P...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘勇，张德咏，彭静，张松柏，高阳，张卓，程菊娥，谭新球，成飞雪，朱春晖，杨春晓，
申请(专利权)人：湖南省植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：
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