表达具有共同轻链的抗体的非人动物制造技术

提供了遗传修饰的小鼠，其中小鼠表达特征在于有限数目的轻链可变结构域的免疫球蛋白轻链库。提供了仅表达一个或少数来自它们的种系中的有限库的免疫球蛋白轻链可变结构域的小鼠。提供了用于在小鼠中产生轻链可变区包括人轻链可变区的方法。提供了用于产生适合用于多特异性结合蛋白例如双特异性抗体的人可变区的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达具有共同轻链的抗体的非人动物专利
提供了表达抗体的遗传修饰的小鼠，所述抗体具有与多种人可变/小鼠恒定重链缔和的共有人可变/小鼠恒定轻链。提供了用于从小鼠的B细胞的人可变区基因序列制备人双特异性抗体的方法。背景抗体通常包含同二聚体重链组分，其中每个重链单体与相同的轻链缔和。具有异二聚体重链组分的抗体(例如双特异性抗体)作为治疗性抗体是理想的。但是制备具有能够令人满意地与双特异性抗体的每个重链缔和的合适的轻链组分的双特异性抗体被证明是存在问题的。在ー种方法中，可通过测定所有轻链可变结构域的使用统计学、鉴定人类抗体中最常使用的轻链并在体外将这样的轻链与不同特异性的两个重量配对来选择轻链。在另ー种方法中，可通过观察噬菌体展示文库(例如包含人轻链可变区序列的噬菌体展示文库，例如人scFv文库)中的轻链序列并从该文库中选择最常使用的轻链可变区来选择轻链。然后，可以在感兴趣的两个不同重链上测试这样的轻链。在另ー种方法中，可以通过测定轻链可变序列的噬菌体展示文库(使用感兴趣的两个重链的重链可变序列作为探针)来选择轻链。与两个重链可变序列缔和的轻链可被选择为所述重链的轻链。 在另ー种方法中，可以将候选轻链与重链的同源轻链比对，并在轻链中进行修饰以更紧密地匹配两个重链的同源轻链的特征性共有的序列。如果需要使免疫原性的机会最小化，则所述修饰优选产生存在于已知的人轻链序列中的序列，从而不太可能发生蛋白水解处理以产生T细胞表位(基于本领域已知的用于测定免疫原性可能性的參数和方法(SP计算机测定以及湿法測定)。所有上述方法都依赖于体外方法，其包含了多种事先限制，例如序列同一性，与特定的预先选择的重链缔和的能力，等等。本领域需要不依赖于体外操作条件的组合物和方法，而是使用更加生物敏感的方法来制备包括共有轻链的人表位结合性蛋白。概述提供了表达人免疫球蛋白重链和轻链可变结构域的遗传修饰的小鼠，其中小鼠具有有限的轻链可变库。提供了用于产生人轻链可变结构域的生物系统，所述轻链可变结构域与亲和カ成熟的人重链可变结构域的不同库缔合并一起表达。提供了用于产生包含免疫球蛋白可变结构域的结合蛋白的方法，包括用目的抗原免疫具有有限的免疫球蛋白轻链库的小鼠，和在结合蛋白中使用特异性结合目的抗原的小鼠的免疫球蛋白可变区基因序列。方法包括用于产生适合用于产生多特异性抗原结合蛋白的人免疫球蛋白重链可变结构域的方法。提供了遗传工程化的小鼠，所述小鼠选择来源于未重排的人重链可变区基因区段的库的适当的亲和力成熟的人免疫球蛋白重链可变结构域，其中亲和力成熟的人重链可变结构域与来源于ー个人轻链可变区基因区段的单个人轻链可变结构域缔合并一起表达。还提供了遗传工程化的小鼠，所述小鼠提供了两个人轻链可变区基因区段的选择。提供了遗传工程化的小鼠，所述小鼠从人轻链可变区基因区段的有限库表达人轻链可变结构域的有限库或单个人轻链可变结构域。小鼠被遗传工程化以包括单个未重排的人轻链可变区基因区段(或两个人轻链可变区基因区段)，所述可变区基因区段重排以形成表达单个轻链(或表达两个轻链之任ー或两者)的重排的人轻链可变区基因(或两个重排的轻链可变区基因)。重排的人轻链可变结构域能够与多个由小鼠选择的亲和カ成熟的人重链配对，其中所述重链可变区特异性结合不同表位。提供了从人轻链可变区序列的有限库表达人轻链可变结构域的有限库或单个人轻链可变结构域的遗传工程化的小鼠。通过对小鼠进行遗传工程化以包括表达单个轻链的可变区(或表达两个可变区之任ー或两者)的单个V/J人轻链序列(或两个V/J序列)。包含可变序列的轻链能够与多个由小鼠克隆地选择的亲和カ成熟的人重链配对，其中所述重链可变区特异性结合不同表位。在ー个方面，提供了遗传修饰的小鼠，所述小鼠包含单个能够与人J基因区段(选自ー个或多个I区段)重排和编码免疫球蛋白轻链的人\结构域的人免疫球蛋白轻链可变区基因区段。在另ー个方面，小鼠包含不超过两个人ん基因区段，其各自能够与人J基因区段(选自ー个或多个叉区段)重排并且编码免疫球蛋白轻链的人ん结构域。在一个实施方案中，单个人^基因区段有效地连接于选自Jk1、Jk2、Jk3、Jk4和J K 5的人I基因区段，其中单个人\基因区段能够重排以形成编码具有ー个或多个人ム基因区段的任一个的轻链可变区基因的序列。在一个实施方案中，遗传修饰的小鼠包含免疫球蛋白轻链基因座，所述基因座不包含能够重排以形成免疫球蛋白轻链基因的内源小鼠\基因区段，其中\基因座包含单个能够重排以编码轻链基因的\区的人\基因区段。在具体的实施方案中，人\基因区段是人Vk 1-39Jk 5基因区段或人Vk 3-20Jk I基因区段。在一个实施方案中，遗传修饰的小鼠包含\基因座，所述基因座不包含能够重排以形成免疫球蛋白轻链基因的内源小鼠ん基因区段，其中\基因座包含不超过2个能够重排以编码轻链基因的\区的人\基因区段。在具体的实施方案中，所述不超过2个人\基因区段是人V K 1-39J K 5基因区段和人Vk 3-20Jk I基因区段。在ー个方面，提供了包含单个编码免疫球蛋白轻链的人ん结构域的重排的(V/J)人免疫球蛋白轻链可变区(即，/叉区)的遗传修饰的小鼠。在另ー个方面，小鼠包含不超过2个能够编码免疫球蛋白轻链的人\结构域的重排的人\区。在一个实施方案中，^区是重排的人V K 1-39/J序列或重排的人Vk 3-20/J序列。在一个实施方案中，重排的V ノム序列的人ム区段选自Jk 1、JK2、Jk3、Jk4和Jk5。在具体的实施方案中，ん区是人V K 1-39J K 5序列或人V K 3-20J K I序列。在具体的实施方案中，小鼠具有人Vk 1-39J K 5序列和人Vk 3-20J k I序列。在一个实施方案中，人ん基因区段有效地连接于人或小鼠前导序列。在一个实施方案中，前导序列是小鼠前导序列。在具体的实施方案中，小鼠前导序列是小鼠Vk 3-7前导序列。在具体的实施方案中，前导序列有效地连接于未重排的人\基因区段。在具体的实施方案中，前导序列有效地连接于重排的人Vノム序列。在一个实施方案中，ん基因区段有效地连接于免疫球蛋白启动子序列。在ー个实施方案中，启动子序列是人启动子序列。在具体的实施方案中，人免疫球蛋白启动子是人Vk 3-15启动子。在具体的实施方案中，启动子有效地连接于未重排的人\基因区段。在具体的实施方案中，启动子有效地连接于重排的人Vノム序列。在一个实施方案中，轻链基因座包含前导序列，其在5’(相对于ん基因区段的转录方向)与人免疫球蛋白启动子侧翼连接，在3’与人ん基因区段侧翼连接，所述人ん基因区段与人J区段重排，并且编码包含内源小鼠轻链恒定区(CJ的反向嵌合轻链的ん结构域。在具体的实施方案中，ん基因区段位于小鼠Vk基因座中，并且小鼠Q是小鼠Ck。在一个实施方案中，轻链基因座包含前导序列，其在5’ (相对于\基因区段的转录方向)与人免疫球蛋白启动子侧翼连接，在3’与重排的人ん区(V ノ叉序列)侧翼连接，并且编码包含内源小鼠轻链恒定区(CJ的反向嵌合轻链的\结构域。在具体的实施方案中，重排的人V1/叉序列为于小鼠K基因座,并且小鼠も是小鼠Ck。在一个实施方案中，修饰的小鼠的'基因座是K轻链基因座，并且所述K轻链基因座包本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含B细胞群体的遗传修饰的小鼠，所述B细胞群体表达来自人轻链序列的有限库的人轻链可变(VL)结构域的有限库或单个人VL结构域，其中所述小鼠不存在未重排的内源免疫球蛋白Vκ基因区段、未重排的内源免疫球蛋白κ轻链连接(Jκ)基因区段或其组合；并且其中所述小鼠显示与包含免疫球蛋白轻链Vκ和Jκ基因区段的野生型互补序列的小鼠大致相同的κ:λ轻链比率。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.04.25 US 13/093,1561.包含B细胞群体的遗传修饰的小鼠，所述B细胞群体表达来自人轻链序列的有限库的人轻链可变(\)结构域的有限库或单个人ん结构域，其中所述小鼠不存在未重排的内源免疫球蛋白Vk基因区段、未重排的内源免疫球蛋白K轻链连接(Jk)基因区段或其组合；并且其中所述小鼠显示与包含免疫球蛋白轻链Vk和Jk基因区段的野生型互补序列的小鼠大致相同的K: A轻链比率。2.权利要求1的小鼠，其中人轻链序列的有限库包含不超过一个或不超过两个重排的人免疫球蛋白轻链序列。3.权利要求1或2的小鼠，其中所述小鼠显示约55:1至75:1的K: X比率。4.权利要求1或2的小鼠，其中所述小鼠显示约18:1至23:1的K: A比率。5.权利要求1-4的任一项的小鼠，其中所述人轻链序列有效地连接于选自小鼠、大鼠和人序列的免疫球蛋白轻链恒定区序列。6.权利要求2的小鼠，其中所述重排的人免疫球蛋白轻链序列包括人Vk和Jk基因区段。7.权利要求6的小鼠，其中所述人Vk和Jk基因区段选自人Vk 1-39、人V k 3_20、人Jk 1、人Jk 5及其组合。8.遗传修饰的小鼠 ，所述小鼠表达来源于不超过ー个或不超过两个重排的人K轻链序列的单个人K轻链，其中所述小鼠不存在未重排的内源免疫球蛋白Vk基因区段、未重排的内源免疫球蛋白Jk基因区段或其组合；并且其中所述小鼠显示这样的K轻链使用:所述K轻链使用是由具有完全或基本上完全的人K轻链基因座的小鼠显示的K轻链使用的约100倍或更多倍、至少约200倍或更多倍、至少约300倍或更倍、至少约400倍或更多倍、至少约500倍或更多倍、至少约600倍或更多倍、至少约700倍或更多倍、至少约800倍或更多倍、至少约900倍或更多倍、至少约1000倍或更多倍。9.权利要求8的小鼠，其中所述重排的人K轻链序列包含人VK 1-39序列。10.权利要求8或7的小鼠,其中所述重排的人K轻链序列是人VK 1-39J...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·麦克沃克，L·麦克唐纳，S·史蒂文斯，S·戴维斯，D·R·巴克勒，K·A·霍希亚瓦，A·J·莫菲，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：
国别省市：