一种1型单纯疱疹病毒载体系统及其制备方法与应用技术方案

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一种1型单纯疱疹病毒载体系统及其制备方法。该载体系统包括以HSV-1内部反向重复序列（IR）两侧DNA片段为同源重组臂的穿梭质粒pKo5/BN和含缺失IR区的HSV-1基因组的细菌人工染色体质粒pHSVΔIR-BAC。使用所述载体系统制备重组HSV-1包括三个步骤，首先将靶DNA片段克隆入pKo5/BN获得重组穿梭质粒；随后用所获重组穿梭质粒电转化含pHSVΔIR-BAC的大肠杆菌并筛选获得重组菌；最后从所获重组菌中提取重组DNA并转染Vero细胞，纯化获得重组HSV-1。所述载体系统安全性高，可容纳30Kb外源DNA，可高效地构建表达多个目的基因的选择复制型重组HSV-1。

【技术实现步骤摘要】
一种1型单纯疱疹病毒载体系统及其制备方法与应用
本专利技术属于生物
，本专利技术涉及一种I型单纯疱疹病毒载体系统及其制备方法，还涉及单纯疱疹病毒载体携载并表达EGFP报告基因和在抗肿瘤中的应用。
技术介绍
I型单纯疱疫病毒(Herpes simplex virus type I, HSV-1)是一种嗜神经性病毒，在人群中感染非常普遍，临床表现为黏膜或皮肤局部集聚疱疹等轻微症状，偶尔伴有发热。HSV-1为双链DNA病毒，基因组152kb，由独特长片段(?)和短片段(Us)组成，两端为末端反向重复序列TRjP TRs，两片段连接处为内部反向重复序列(IR区)。HSV-1编码约90种蛋白，功能大多已明确，其中约一半为病毒复制所必需，另一些为复制非必需，这些非必需基因删除并代之以外源基因不影响病毒复制，故HSV-1可改造为病毒载体。HSV-1载体的优势在于其宿主范围广、感染效率高、安全(基因组游离存在；抗疱疹病毒药物可终止治疗和意外感染)、容量大、易于制备、所携载的外源基因可持续表达；小鼠等动物感染HSV-1的症状类似于人，可作为HSV-1载体研究的动物模型；遗传背景清楚，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种1型单纯疱疹病毒载体系统，其特征在于，该1型单纯疱疹病毒载体系统包括穿梭质粒pKo5/BN和缺失IR区的HSV?1细菌人工染色体质粒pHSVΔIR?BAC；所述的穿梭质粒pKo5/BN包含HSV?1?内部反向重复序列（IR）两侧的BamHⅠB片段（B）和BamHⅠN片段(N)、多克隆位点、温度敏感性的复制起始区、博莱霉素（zeocin）抗性基因和果聚糖蔗糖酶基因（SacB）；所述的pHSVΔIR?BAC包含缺失了IR区的HSV?1基因组DNA、BAC序列和氯霉素抗性基因。

【技术特征摘要】
1.一种I型单纯疱疹病毒载体系统，其特征在于，该I型单纯疱疹病毒载体系统包括穿梭质粒pKo5/BN和缺失IR区的HSV-1细菌人工染色体质粒pHSV A IR-BAC ;所述的穿梭质粒pKo5/BN包含HSV-1内部反向重复序列(IR)两侧的I B片段(B)和汉I N片段(N)、多克隆位点、温度敏感性的复制起始区、博莱霉素(zeocin)抗性基因和果聚糖蔗糖酶基因QSacB);所述的pHSV A IR-BAC包含缺失了 IR区的HSV-1基因组DNA、BAC序列和氯霉素抗性基因。2.根据权利要求1所述的I型单纯疱疹病毒载体系统，其特征在于，所述穿梭质粒pKo5/BN中的DNA片段B和N为两个同源重组臂。3.根据权利要求1所述的I型单纯疱疹病毒载体系统，其特征在于，所述穿梭质粒pKo5/BN中的DNA片段B为位于HSV-1基因组独特性长片段中与IR区相连的2024bp的DNA片段。4.根据权利要求1所述的I型单纯疱疹病毒载体系统，其特征在于，所述穿梭质粒pKo5/BN中的DNA片段N为位于HSV-1基因组独特性短片段中与IR区相连的2857bp的DNA片段。5.根据权利要求1所述的I型单纯疱疹病毒载体系统，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：马正海，毛红艳，李永鑫，
申请(专利权)人：新疆大学，
类型：发明
国别省市：