山杨良种银×山1333的组织培养方法技术

山杨良种银×山1333的组织培养方法，它涉及一种植物的培养方法。本发明专利技术要解决现有山杨良种银×山1333植株组织培养困难、繁殖系数低、组培生根苗不健壮及移栽成活率低的问题。本发明专利技术是按以下步骤完成：一、外植体的采集和前处理；二、外植体的分化培养；三、不定芽的继代增殖培养；四、不定芽的生根培养；五、再生组培苗的炼苗；六、山杨良种银×山1333组培苗出瓶定植后得到容器苗，即得到高度为40cm～50cm的山杨良种银×山1333组培苗的容器苗。本发明专利技术应用在植物组织培养领域。

【技术实现步骤摘要】
山杨良种银X山1333的组织培养方法
本专利技术涉及一种植物的组织培养方法。
技术介绍
杨树是我国北方普遍公认的用材林、防护林和园林绿化的优质速生树种，但是在近半个世纪引选的1000多个品种中，没有适于林区山地用材林造林的品种。而我国是以山地著称于世的国家，山区占国土面积的三分之二以上，因此开展山地杨树新品种推广转化十分必要。东北地区乡土树种中的山杨(Populus davidiana Dode)分布广泛、适应性强、材质优良，适于林区山地用材林的营造。但是其生长速度缓慢，年平均胸径生长仅4_左右；扦插生根十分困难，繁殖率低；造林难成活，保存率低；心腐严重，20年生山杨心腐率高达70%，因此过去利用山杨造林很少。黑龙江省林业科学研究所从“六五”到“九五”，主持了《新选杨树用材和绿化品系研究》黑龙江省科技重点项目和《山杨良种选育》国家科技攻关专题，历经二十年，从不同种源，不同杂交组合的1800多个无性系中，选育出了银X山1333 (P.albaXP.davidianCL.‘1333’)，2010年该品种通过了黑龙江省森工林区林木品种审定委员会组织的良种审定。该良种是适于林区山地营本文档来自技高网...

【技术保护点】
山杨良种银×山1333的组织培养方法，其特征在于山杨良种银×山1333的组织培养方法，是按以下步骤完成：一、外植体的采集和前处理：将山杨良种银×山1333植株的外植体在流水下冲洗1h～2h后，用质量浓度为70%～75%乙醇溶液对表面进行消毒10s～20s，然后用无菌水冲洗2～3遍，再用0.1%氯化汞消毒2.0min～4.0min后，用无菌水冲洗3～5遍，最后用无菌滤纸吸干无菌水，并对外植体进行处理，得到已消毒的外植体；二、外植体的分化培养：将步骤一中得到的已消毒的外植体接种到已灭菌的不定芽分化培养基中，在温度23℃～26℃、光照时间12h/d～14h/d，光强2500Lx～3500Lx和湿度7...

【技术特征摘要】
1.山杨良种银X山1333的组织培养方法，其特征在于山杨良种银X山1333的组织培养方法，是按以下步骤完成: 一、外植体的采集和前处理:将山杨良种银X山1333植株的外植体在流水下冲洗Ih~2h后，用质量浓度为70%~75%乙醇溶液对表面进行消毒IOs~20s，然后用无菌水冲洗2~3遍,再用0.1%氯化萊消毒2.0min~4.0min后,用无菌水冲洗3~5遍,最后用无菌滤纸吸干无菌水，并对外植体进行处理，得到已消毒的外植体； 二、外植体的分化培养:将步骤一中得到的已消毒的外植体接种到已灭菌的不定芽分化培养基中，在温度23°C~26°C、光照时间12h/d~14h/d，光强2500Lx~3500Lx和湿度70%~80%的条件下培养30d~45d，得到山杨良种银X山1333的不定芽； 三、继代增殖培养:将步骤二中得到的山杨良种银X山1333不定芽接种到已灭菌的继代增殖培养基中，在温度23°C~26°C、光照时间10h/d~12h/d、光强2500Lx~3500Lx、光源为白炽日光灯和湿度70%~80%的条件下培养得到1.5cm~2.0cm高的山杨良种银X山1333不定芽； 四、不定芽的生根培养:将步骤三得到1.5cm~2.0cm苗高的山杨良种银X山1333不定芽转接到已灭菌的不定芽生根培养基中，在温度23°C~26°C、光照时间12h/d~14h/d、光强2500Lx~3500Lx、光源为白炽日光灯和湿度70%~80%的条件下培养至苗高为4cm~5cm且具有3~5片叶片，即得山杨良种银X山1333再生组培苗； 五、再生组培苗的炼苗:在温室内，将步骤四中得到山杨良种银X山1333再生组培苗置于温室苗床上，在环境温度20°C~25°C，湿度80%~95%，光照强度3500Lx~4500Lx的条件下进行再 生组培苗的炼苗，得到山杨良种银X山1333植株； 其中，所述的再生组培苗的炼苗，是按照下述步骤实现的:首先将培养瓶瓶口的覆盖物松开炼苗Id~2d，然后在培养瓶瓶口面积的1/4~1/3没有覆盖物的条件下炼苗Id~2d，最后将培养瓶瓶口的覆盖物全部去除炼苗2d~3d ; 六、山杨良种银X山1333组培苗出瓶定植后得到容器苗:将步骤五中得到的山杨良种银X山1333植株从培养瓶中取出，放入清水中洗净根部附着的培养基，将山杨良种银X山1333植株的根系保留1.0cm~1.5cm，用质量浓度为1.00g/L~1.25g/L多菌灵浸泡15min~20min,再用无菌水冲洗3~5遍后移栽到已消毒的育苗基质中在昼温21V~29°C、夜温18°C~21°C、湿度80%~95%和遮光率60%~70%的条件下培养3d_5d，然后在昼温21°C~29 °C、夜温18 V~21°C、湿度80%~95%和遮光率30%~40%的条件下培养5d~IOd ;最后在昼温21°C~29°C、夜温18°C~21°C、湿度80%~95%和无遮光的条件下培养，待小苗成活且高度为40cm~50cm后，即得到山杨良种银X山1333组培苗的容器苗。2.根据权利要求1所述的山杨良种银X山1333的组织培养方法，其特征在于步骤一中所述山杨良种银X山1333植株的外植体为:从健壮的、没有伤口和没有病虫的25年生的山杨良种银X山1333植株上取外植体，每年I~2月份采集山杨良种银X山1333植株带休眠芽的茎段，每年5份采集山杨良种银X山1333植株的叶片，每年5月份采集山杨良种银X山1333植株的带腋芽的茎段。3.根据权利要求1所述的山杨良种银X山1333的组织培养方法，其特征在于步骤一中所述的的已消毒的外植体为休眠芽、腋芽、带叶柄叶片或不带叶柄叶片。4.根据权利要求1所述的山杨良种银X山1333的组织培养方法，其特征在于步骤二所述的不定芽分化培养基是由YS培养基和浓度为1.0mg/L的6-苄基胺基嘌呤和0.lmg/L的激动素组成； 其中，所述的YS培养基是由大量元素、微量元素、铁盐、有机成分、强度为1300g/cm2的琼脂和水组成；每1L的YS培养基中所述的大量元素由浓度为340mg/L的KN03、400mg/LNH4NO3>96mg/L 的 CaCl2.2H20、370mg/L 的 MgSO4.7H20、550mg/L 的 Ca (NO3) 2.4H20、600mg/L 的 K2S04、370mg/L KH2PO4,27.8mg/L 的 FeSO4.7H20 和 37.3mg/L 的 Na2-EDTA 组成；每 1L的YS培养基中所述的微量元素由浓度为0.83mg/L的K1、6.2mg/L的H3BO3、22.3mg/L的MnSO4.4Η20、8.6mg/L 的 ZnSO4.7Η20、0.25mg/L 的 Na2Mo...

【专利技术属性】
技术研发人员：白卉，李春明，张妍妍，李静，王艳敏，
申请(专利权)人：黑龙江省林业科学研究所，
类型：发明
国别省市：