用于制备具有改善性质的含Fc多肽的方法技术

本发明专利技术涉及用于生产含Fc多肽的方法和组合物，所述含Fc多肽包含在Fc区的位置243、264、267和328上的突变。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于制备具有改善性质的含Fe多肽的方法专利
本专利技术涉及用于产生作为人或动物治疗剂有用的糖基化蛋白质(糖蛋白)和具体的含Fe多肽的方法和组合物。专利技术背景 单克隆抗体通常通过两个结合事件来实现其治疗益处。首先，抗体的可变结构域结合靶细胞上的特异性蛋白质。这随后为效应细胞的招募，所述效应细胞与抗体的恒定区(Fe)结合，且破坏与抗体结合的细胞。抗体(或其他免疫治疗组合物)的效力取决于多重作用机制，包括由表达Fe受体(FcRs)的效应细胞介导的那些。Fe受体具有活化或抑制性功能作用，并且在其在效应细胞中的分布中不同。单核细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞表达活化和抑制性FcRs两者，而自然杀伤(NK)细胞仅表达活化FcRIIIa。因此，抗体(或其他免疫治疗剂)可以接合各种Fe受体的程度对于临床结果是重要的。抗体Fe结构域的氨基酸工程化和糖工程化是修饰抗体和其他免疫治疗剂的效应细胞功能的两种方法。参见例如，Chu等人，Molecular Immunology 45:3926-3933(2008)。期望工程化得到包含改善性质的抗体或Fe融合蛋白。例如，期望工程化得到抗体或其他免疫治疗剂，其与Fe Y受体IIB(CD32B)结合，但不结合(或以减少的亲和力结合)Fe Y受体IIA(CD32A)和Fe Y受体IIIA(CD16A)和Fe Y受体I (CD64)。此类抗体的特征在于其效应子功能的缺乏(或显著降低)和抗炎性质的增加。N-糖基化的存在不仅在抗体的效应子功能中起作用，N联寡糖的特定组成对于其最终功能也是重要的。例如，岩藻糖的缺乏`或平分型N-乙酰葡糖胺的存在已与ADCC的效力正相关，Rothman (1989), Umana 等人，Nat.Biotech.17: 176-180 (1999), Shields 等人，T.Biol.Chem.277: 26733-26740 (2002)，和 Shinkawa 等人，T.Biol.Chem.278:3466-3473(2003)。还存在在Fe区中的唾液酸化与静脉内免疫球蛋白(IVIG)的抗炎性质正相关的证据。参见例如，Kaneko 等人，Science, 313: 670-673, 2006 ;Nimmerjahn 和Ravetch，J.Exp.Med.，204: 11-15，2007。考虑到特异性N-糖基化在抗体功能和效力中的效用，用于修饰抗体的N联寡糖组成的方法和用于修饰抗体和其他免疫治疗剂的效应子功能的方法将是期望的。酵母和其他真菌宿主是用于生成重组蛋白质的重要生产平台。酵母是真核生物，并且因此与高等真核生物共享共同的进化过程，包括在分泌途径中发生的许多翻译后修饰。糖工程化中的近期进展已导致具有遗传修饰的糖基化途径的酵母菌株巴斯德毕赤酵母iPichia pastoris)的细胞系，所述糖基化途径允许它们执行模拟在人中糖基化过程的一系列酶促反应。参见例如，描述用于在低等真核宿主细胞中产生重组糖蛋白的方法的美国专利号7，029, 872、7，326，681和7，449，308，所述重组糖蛋白基本上等同于其人对应物。已证实了人样唾液酸化二天线复合N联聚糖，如由前述方法在巴斯德毕赤酵母中产生的那些，用于生产治疗性糖蛋白的效用。因此，用于进一步修饰或改善酵母例如巴斯德毕赤酵母中的抗体生产的方法将是期望的。专利技术概述本专利技术涉及包含在Fe区的氨基酸位置243、264、267和328上的突变的含Fe多肽，其中编号根据如Kabat中的EU指数。在一个实施方案中，在位置243上的突变选自:F243A, F243G, F243S, F243T, F243V, H243L,F243i F243D, F243Y, F243H? F243R, F243W |l! F243K ; 在位置264 上的 突变选自:V264A, ￥264R, V264G, V264S, V264T, V264D,V264E, V264K, V264W, V264I1 V264P, V264N, V264Q 和 V264L ;在位置 267 上的突变选自:S267D、S267Y、S267T ;并且在位置328上的突变选自:L328Y、L328W、L328H。在一个实施方案中，在位置243和264上的突变选自:F243A和V264A ；F243Y和V264G ；F243T和V264G ；F243L和V264A ；F243L和V264N ；以及F243V和V264G。在一个实施方案中，突变是F243A、V264A、S267E 和 L328F。在一个实施方案中，本专利技术的含Fe多肽是抗体或抗体片段。在一个实施方案中，本专利技术的含Fe多肽是包含SEQ ID NO: 7,SEQ ID NO:8或SEQ ID NO: 17的抗体片段。在另一个实施方案中，本专利技术的含Fe多肽是由SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO: 17组成(或基本上由其组成)的抗体片段。在一个实施方案中，含Fe多肽是包含SEQ ID NO:4的重链氨基酸序列或其变体，和SEQ ID NO: 2的轻链氨基酸序列或其变体的抗体。在另一个实施方案中，含Fe多肽是包含SEQ ID NO: 11的重链氨基酸序列或其变体，和SEQ ID NO: 10的轻链氨基酸序列或其变体的抗体。在另一个实施方案中，含Fe多肽是包含SEQ ID NO: 12的重链氨基酸序列或其变体，和SEQ ID NO: 13的轻链氨基酸序列或其变体的抗体。在一些实施方案中 ，本专利技术的含Fe多肽包含含有唾液酸(包括NANA、NGNA、及其类似物和衍生物)的N-聚糖。在一个实施方案中，N-聚糖具有选自SA(1.4)Gal(j.4}G!cNAc(2-4)Man3GlcNAc2?'Ι SAGalGlcNAcManSGlcNAca 的结构。在一个实施方案中，本专利技术的含Fe多肽包含α-2，3和α-2，6连接的唾液酸的混合物。在另一个实施方案中，本专利技术的含Fe多肽仅包含α-2，6连接的唾液酸。在一个实施方案中，本专利技术的含Fe多肽包含α-2，6连接的唾液酸且不含可检测水平的α-2，3连接的唾液酸。在一个实施方案中，唾液酸是N-乙酰神经氨酸(NANA)或N-羟乙酰神经氨酸(NGNA)或其混合物。在另一个实施方案中，唾液酸是在唾液酸上的位置9上具有乙酰化的NANA或NGNA的类似物或衍生物。在一个实施方案中，在本专利技术的含Fe多肽上的N-聚糖包含NANA且不含NGNA。在一个实施方案中，在本专利技术的含Fe多肽上的N-聚糖包含α -2，6连接的NANA (且不含NGNA)。在一个实施方案中，本专利技术的含Fe多肽是包含唾液酸化的N-聚糖的抗体或抗体片段，所述唾液酸化的N-聚糖包含选自SA(i4)Gal(1.4)GfcMAe(2-4)Man3Gl€NAc2 A SAGaIGlcNAcMan5GIcNAc】的结构，其中所述唾液酸残基经由α-2，6键。在本专利技术的含Fe多肽上的N-聚糖可以任选包含岩藻糖。在一个实施方案中，在含Fe多肽上的N-聚糖将包含岩藻糖基化和非岩藻糖基化N-聚糖的混合物。在另一个实施方案中，在含Fe多肽上的N-聚糖缺乏岩藻糖。在一个实施方案中，当与亲本含Fe多肽相比较时，本本文档来自技高网...

【技术保护点】
含Fc多肽，其包含在所述Fc区的氨基酸位置243、264、267和328上的突变，其中所述编号根据如Kabat中的EU指数。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.05.25 US 61/4897431.含Fe多肽，其包含在所述Fe区的氨基酸位置243、264、267和328上的突变，其中所述编号根据如Kabat中的EU指数。2.权利要求1的含Fe多肽，其中所述突变是F243A、V264A、S267E和L328F。3.权利要求1的含Fe多肽，其包含SEQID NO:7,SEQ ID NO:8或SEQ ID NO: 17的氨基酸序列。4.权利要求1的含Fe多肽，其中所述含Fe多肽是包含唾液酸化的N-聚糖的抗体或抗体片段，其中所述唾液酸化的N-聚糖中的唾液酸残基经由α -2，6键连接。5.权利要求1的含Fe多肽，其中所述含Fe多肽是包含唾液酸化的N-聚糖的抗体或抗体片段，其中所述唾液酸化的N-聚糖包含选自SA(1_4)Gal(1_4)GlCNAC(2_4)Man3GlCNAC2或SAGalGlcNAcMan5GlGNAc2的结构，其中所述唾液酸残基经由α -2，6键连接。6.权利要求1的含Fe多肽，其中当与亲本含Fe多肽相比较时，所述含Fe多肽具有下述性质中的一种或多种: a)减少的效应子功能； b)增加的抗炎性质； c)增加的与凝集素(例如CD22(Siglec 2))的结合； d)减少的与FeY RIIa的结合； e)增加的与FeY RIIb的结合； f)减少的与FeY RIIIa的结合； g)减少的与FeY RIIIb的结合。7.用于在宿主细胞中生产含Fe多肽的方法，其包括: a)提供已遗传工程化以产生含Fe多肽的细胞，其中所述宿主细胞包含编码在所述Fe区的氨基酸位置243、264、267和328上的突变的核酸，其中所述编号根据如Kabat中的EU指数； b)在引起所述含Fe多肽表达的条件下培养所述宿主细胞；和 c)从所述宿主细胞中分离所述含Fe多肽。8.权利要求7的方法，其中所述核酸编码突变F243A、V264A、S267E和L328F。9.权利要求7的方法，其中所述含Fe多肽包含SEQID NO: 7, SEQ ID N0:8或SEQ IDNO: 17的氨基酸序列。10.权利要求7的方法，其中所述含Fe多肽是包含唾液酸化的N-聚糖的抗体或抗体片段，其中所述唾液酸化的N-聚糖经由α _2，6键连接。11.权利要求10的方法，其中所述含Fe多肽具有这样的聚糖组成，其中总唾液酸化的聚糖的量和百分比相对于亲本含Fe多肽是增加的。12.权利要求7的方法，其中所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：查冬兴，
申请(专利权)人：默沙东公司，
类型：
国别省市：