一种检测单糖的方法及衍生试剂的制备方法技术

技术编号:9666318 阅读:188 留言:0更新日期:2014-02-14 02:52
本发明专利技术属于医药领域,涉及一种单糖的检测方法及衍生试剂的制备方法,包括如下步骤:(1)用衍生试剂对单糖进行衍生;(2)将衍生产物进行液相色谱质谱联用(LC-MS)分析;衍生试剂包括1-萘-3-氘代甲基-5-吡唑啉酮(D3NMP)和1-萘-3-甲基-5-吡唑啉酮(NMP)。该检测方法对微量样品既可以定性又可以定量,检测灵敏度高,操作简便,可同时对两种未知样品进行相对定量,质谱图信噪比低,分离所需流动相极性小,大大延长了柱子的使用寿命。本发明专利技术方法比传统1-苯基-3-甲基-5吡唑啉酮(PMP)衍生法的灵敏度高4-5倍,比传统NMP衍生法更好地分离单糖,不会出现单糖色谱峰重叠的现象。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药领域,涉及。
技术介绍
目前,多糖领域中面临很多挑战。多糖的研究不仅仅限于对大量样品的分析,对于生物来源的样品研究也越来越多。由于生物来源(如血液、细胞、组织)的样品多糖量少,单糖极性较强,结构相近,且缺乏光学活性,采用常规方法对其分离鉴定较为困难。糖在紫外区无吸收,传统的示差折光检测法的灵敏度低且不利于梯度洗脱。为了改善其分离选择性和提高检测灵敏度,人们常采用衍生化处理,将糖类组分转变为带发色基团的分子,然后进行紫外或荧光检测。液相色谱质谱联用(LC-MS)是一种很好的检测方法。它以液相色谱作为分离系统,质谱为检测系统。样品由流动相分离,被离子化后,经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开,经检测器得到质谱图。液质联用体现了色谱和质谱的优势互补,将色谱对复杂样品的高分离能力,与质谱具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来,在药物分析、食品分析和环境分析等许多领域得到了广泛的应用。糖类物质的衍生反应多基于还原氨化法,不仅过程繁琐、反应时间长,而且可导致不稳定基团如唾液酸残基的解离,给测定结果带来偏差。1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP),常被用于衍生单糖,结合高效液相色谱法分析,具有反应条件较温和,产物无立体异构等优点。1-萘-3-甲基-5-吡唑啉酮(NMP)也是常用的衍生试剂,如孙志伟等用NMP衍生测定油菜花粉多糖中单糖的组成(孙志伟,刘凌君,户宝军,等.1-(2-萘基)-3-甲基-5-批唑啉酮衍生试剂的制备及其在高效液相色谱-质谱法测定糖类化合物中的应用[J].色谱,2008(02):200-205),其反应机理与PMP相同,都可以与单糖反应生成具有紫外吸收的糖-双衍生试剂产物,但是以上两种衍生试剂都存在检测限高,样品消耗量大,用质谱检测只能对样品定性,不能定量等缺点。用普通衍生试剂衍生结合LC-MS对单糖定量,需要做一系列的标准曲线,不仅步骤繁琐,而且对珍贵的生物样品来说也是一种浪费,同时单糖的分离结果并不理想。
技术实现思路
针对以上现有技术存在的不足,本专利技术的目的是提供一种定性定量检测单糖的方法。实现上述专利技术目的的技术方法是:1.一种检测单糖的方法,具体包括如下步骤:(I)用衍生试剂对单糖进行衍生;(2)将衍生产物进行液相色谱质谱联用(LC-MS)分析;所述的衍生试剂包括1-萘-3-氘代甲基-5-吡唑啉酮(D3NMP)和1-萘_3_甲基-5-吡唑啉酮(NMP);[0011 ] 所述的衍生试剂D3NMP单独使用或与NMP联用。2.一种检测单糖的方法,其特征在于,所述的单糖为动物、植物和微生物来源的多糖及寡糖的基本组成单元。3.D3NMP的制备方法包括如下步骤:(I)称取萘肼盐酸盐,置于水中,加热至100°C,使其完全溶解,用20% NaOH溶液调节PH至8-9,抽滤后得到固体,用水洗涤直至PH为7,抽滤后真空干燥,得萘肼;(2)将萘肼加入无水乙醇中,于55°C水浴条件下搅拌至其溶解,滴加氘代乙酰乙酸乙酯,滴加完毕后反应2h,然后升温至80°C回流7h,将反应液减压浓缩至原体积的I /3,用甲醇将其重结晶3次,得D3NMP ;其中萘肼与氘代乙酰乙酸乙酯的物质量之比为1.2:1。反应方程式如下:本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种检测单糖的方法,包括如下步骤:(1)用衍生试剂对单糖进行衍生;(2)将衍生产物进行液相色谱质谱联用(LC?MS)分析;其特征在于,所述的衍生试剂包括1?萘?3?氘代甲基?5?吡唑啉酮(D3NMP)和1?萘?3?甲基?5?吡唑啉酮(NMP);所述的衍生试剂D3NMP单独使用或与NMP联用。

【技术特征摘要】
1.一种检测单糖的方法,包括如下步骤: (1)用衍生试剂对单糖进行衍生; (2)将衍生产物进行液相色谱质谱联用(LC-MS)分析; 其特征在于,所述的衍生试剂包括1-萘-3-氘代甲基-5-吡唑啉酮(D3NMP)和1-萘-3-甲基-5-吡唑啉酮(NMP); 所述的衍生试剂D3NMP单独使用或与NMP联用。2.如权利要求1所述的一种检测单糖的方法,其特征在于,所述的单糖为动物、植物和微生物来源的多糖及寡糖的基本组成单元。3.制备权利要求1或2任意一项所述的D3NM...

【专利技术属性】
技术研发人员:张丽娟韩章润曾洋洋兰莹邱培菊
申请(专利权)人:中国海洋大学
类型:发明
国别省市:

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