内含A型流感病毒M基因装甲RNA标准物质制造技术

技术编号:9662382 阅读:450 留言:0更新日期:2014-02-13 15:13
本发明专利技术公开了一种A型流感病毒核酸检测装甲RNA标准物质。该标准物质是利用MS2噬菌体装甲RNA技术,将A型流感病毒M基因用MS2噬菌体的衣壳蛋白包装而成,本发明专利技术制备的标准物质具有稳定、无生物传染性、可真实模拟病毒粒子结构、耐RNase等特性,适用于A型流感病毒以M基因为靶标的核酸检测方法的质量控制,以及检测试剂和实验室能力的评价。

【技术实现步骤摘要】
内含A型流感病毒M基因装甲RNA标准物质
本专利技术属于疫病检测
,涉及一种内含A型流感病毒M基因的装甲RNA标准物质,可用于针对A型流感病毒M基因建立的核酸检测方法和试剂的质量控制和评价。
技术介绍
A型流感病毒感染范围很广,能引起人和动物流感的流行和大流行,历史上多次流感的暴发均由A型流感病毒引起,如2004年东南亚发生的高致病性禽流感和2009年席卷全球的甲型HlNl流感等。几乎所有的动物流感均由A型流感引起,主要有禽流感,猪流感,马流感等。由于流感的发生对动物和人类健康构成了巨大威胁,因此全球对它高度关注,虽然各国对动物流感防制策略不尽相同,但都把动物流感的快速诊断和及时监测作为首要步骤。核酸检测技术因具有快速、灵敏、特异性强等特点,已成为A型流感病毒的主要检测技术,广泛用于临床样品的检测和分子流行病学调查。A型流感病毒(Inf luenza Virus)属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae),为单股负链RNA病毒,其基因组由8个RNA节段组成,其中第7片段M基因最为保守,是流感病毒通用核酸检测的主要靶基因。目前,国内外针对A型流感病毒M基因建立本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种内含A型流感病毒M基因装甲RNA标准物质,其特征在于:它是通过如下方法制备:1)获得用于A型流感病毒核酸检测的M基因序列,如序列表中SEQ?ID?NO:1所示;2)将包含MS2噬菌体成熟酶蛋白基因和衣壳蛋白基因的序列及通过步骤1)获得M基因序列克隆于原核表达载体;3)将原核表达载体转入表达菌株中,诱导表达,然后采用超声波裂解,离心,收集上清液,获得表达产物;4)经Cellufine?Sulfate树脂柱纯化、聚乙二醇沉淀和DNase消化,去除残留质粒DNA,得到内含A型流感病毒M基因装甲RNA病毒样颗粒。5)将内含流感病毒M基因的装甲RNA病毒样颗粒通过荧光定量RT?PCR方法定值,稀释分...

【技术特征摘要】
1.一种内含A型流感病毒M基因装甲RNA标准物质,其特征在于:它是通过如下方法制备: 1)获得用于A型流感病毒核酸检测的M基因序列,如序列表中SEQ ID NO:1所示; 2)将包含MS2噬菌体成熟酶蛋白基因和衣壳蛋白基因的序列及通过步骤I)获得M基因序列克隆于原核表达载体; 3)将原核表达载体转入表达菌株中,诱导表达,然后采用超声波裂解,离心,收集上清液,获得表达产物 ; 4)经^Cellufine Sulfate树脂柱纯化、聚乙二醇沉淀和DNase消化,去除残留质粒DNA,得到内含A型流感病毒M基因装甲RNA病毒样颗粒。 5)将内含流感病毒M基因的装甲RNA病毒样颗粒通过荧光定量RT-PCR方法定值,稀释分装,即得。2.根据权利要求1所述的内含A型流感病毒M基因装甲RNA标准物质,其特征在于:步骤4)中,具体过程为:取平衡缓冲液平衡Cellufine sulfate树脂柱,将表达产物上柱结合,用洗...

【专利技术属性】
技术研发人员:乔彩霞倪建强蒲静高志强张鹤晓尹羿汪琳谷强张利峰张伟
申请(专利权)人:中华人民共和国北京出入境检验检疫局
类型:发明
国别省市:

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