水母种类鉴别方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，水母种类鉴别方法，首先，提取水母DNA，对水母DNA进行水母16s?RNA数据库分析；然后，根据16s?RNA同源性分析结果设计水母16s?RNA特异性引物和Taqman探针；接着，以水母DNA为模板、利用特异性引物进行Taqman探针检测获得曲线数据；最后，根据扩增结果，确定水母种类。本发明专利技术根据水母的DNA确定水母的种类，能够针对形态上不完整的成体个体以及水母幼体进行种类鉴定。同时本发明专利技术根据16s?RNA同原性分析结果设计水母16s?RNA特异性引物，针对性强、准确率高。

Identification methods of jellyfish species

The present invention relates to the field of biotechnology, jellyfish species identification methods, firstly, extracting DNA of 16S of jellyfish, jellyfish jellyfish DNA? RNA database analysis; then, according to the 16S? RNA homology analysis results of jellyfish 16S? RNA specific primers and Taqman probe; then, with water base DNA as template, using specific primers Taqman probe for the detection curve data; finally, according to the results, to determine the species of jellyfish. The invention determines the species of jellyfish according to the DNA of the jellyfish, and aims to identify the species of the morphologically incomplete adult body and the larvae of the jellyfish. At the same time, the invention designs a jellyfish 16S RNA specific primer according to the analysis result of 16S RNA and has the advantages of high pertinence and high accuracy.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体涉及生物种类鉴别方法。
技术介绍
近十几年，我国沿岸水母大量发生，给海洋生态环境带来了一定的影响。水母在形态上完整的成体个体在种类的鉴别上比较容易，但形态上不完整的成体个体以及水母幼体的种类鉴别比较困难。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种，以解决上述问题。本专利技术所解决的技术问题可以采用以下技术方案来实现:，其特征在于，首先，利用Clustalx软件对水母16s RNA数据库分析；然后，根据16s RNA同源性分析结果,利用primer分析软件设计水母16s RNA特异性引物和Taqman探针；接着,提取水母DNA,以水母DNA为模板、利用特异性引物进行Taqman探针检测获得曲线数据；最后，确定水母种类。本专利技术根据水母的DNA确定水母的种类，能够针对形态上不完整的成体个体以及水母幼体进行种类鉴定。同时本专利技术根据16s RNA同源性分析结果设计水母16s RNA特异性引物和Taqman探针，针对性强、准确率高。通过水母DNA提取液提取水母DNA。(利用我们改良后的CTAB法)使用时，直接将100-200g样本放入水母DNA提取液中，利用水母DNA提取液进行水母DNA提取。现有技术，通常是将采集的样本进行冷冻保存，本专利技术将样本直接保存在提取液中，避免了之后的操作，达到了省时省力的作用。使用real time PCR仪采用实时荧光定量PCR技术对水母DNA进行检测，确定水母种类。本专利技术采用上述技术方案，既可节省人力物力，又可简化生产步骤。real time PCR(又叫实时定量PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号变化来即时测定特异性产物，不需要取出PCR产物进行分离。实时荧光定量PCR技术不仅实现了 PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度闻等特点。在实验操作过程中所使用的器具均经消毒处理。所使用的试剂均为DNase free级，以避免水母DNA降解。由于水母的98%为水分，不及时处理极易降解。因此，水母样本采集、水母DNA提取间隔在半小时以内最佳。本方法可针对沙海蜇、海月水母、澳洲斑点水母、海蜇进行种类鉴别。【附图说明】图1为本专利技术的流程图；图2为沙海蜇样本检测的结果图；图3为海月水母样本检测的结果图；图4为澳洲斑点样本检测的结果图；图5为海蜇样本检测的结果图。【具体实施方式】为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体图示进一步阐述本专利技术。参照图1、图2、图3、图4和图5。，首先，提取水母DNA，对水母DNA进行水母16s RNA数据库分析；然后,根据16s RNA同原性分析结果设计水母16s RNA特异性引物；接着，以水母DNA为模板、利用特异性引物进行Taqman探针检测获得扩增曲线；最后，根据扩增结果确定水母种类。本专利技术根据水母的DNA确定水母的种类，能够针对形态上不完整的成体个体以及水母幼体进行种类鉴定。同时本专利技术根据16s RNA同源性分析结果设计水母16s RNA特异性引物Taqman探针，针对性强、准确率高。通过水母DNA提取液提取水母DNA。(我们改良后的CTAB法)使用时，直接将100-200g样本放入水母DNA提取液中，利用水母DNA提取液进行水母DNA提取。现有技术，通常是将采集的样本进行冷冻保存，本专利技术将样本直接保存在提取液中，避免了之后的操作，达到了省时省力的作用。上述操作步骤中，部分操作步骤对操作顺序要求不高，也可同步进行。作为一种优选方案，图1中先进行水母样品采集、再进行水母DNA提取，在此同时进行水母信息采集，设计特异性引物和Taqman探针，最后以水母DNA为模板、利用特异性引物进行Taqman探针检测。 使用real time PCR仪采用实时荧光定量PCR技术对水母DNA进行检测，确定水母种类。本专利技术采用上述技术方案，既可节省人力物力，又可简化生产步骤。real time PCR(又叫实时定量PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号变化来即时测定特异性产物，不需要取出PCR产物进行分离。实时荧光定量PCR技术不仅实现了 PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度闻等特点。在实验操作过程中所使用的器具均经消毒处理。所使用的试剂均为DNase free级，以避免水母DNA降解。由于水母的98%为水分，不及时处理极易降解。因此，水母样本采集、水母DNA提取间隔在半小时以内最佳。本方法可针对沙海蜇、海月水母、澳洲斑点水母、海蜇进行种类鉴别。图2、图3、图4和图5中A、B为沙海蜇；C、D为海月水母；E、F为澳洲斑点水母；G、H为海蜇。以上显示和描述了本专利技术的基本原理和主要特征和本专利技术的优点。本行业的技术人员应该了解，本专利技术不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本专利技术的原理，在不脱离本专利技术精神和范围的前提下，本专利技术还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本专利技术范围内。本专利技术要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。本文档来自技高网...

【技术保护点】
水母种类鉴别方法，其特征在于，首先，提取水母DNA，对水母DNA进行水母16s?RNA数据库分析；然后，根据16s?RNA同原性分析结果设计水母16s?RNA特异性引物和Taqman探针；接着，以水母DNA为模板、利用特异性引物进行Taqman探针检测获得曲线数据；最后，根据扩增结果，确定水母种类。

【技术特征摘要】
1.水母种类鉴别方法，其特征在于，首先，提取水母DNA，对水母DNA进行水母16sRNA数据库分析；然后，根据16s RNA同原性分析结果设计水母16s RNA特异性引物和Taqman探针；接着，以水母DNA为模板、利用特异性引物进行Taqman探针检测获得曲线数据；最后，根据扩增结果，确定水母种类。2.根据权利要求1所述的水母种类鉴别方法，其特征在于:通过水母DNA提取液提取水母DNA。(我们改良后的CTAB法)。3....

【专利技术属性】
技术研发人员：曲宪成，
申请(专利权)人：曲宪成，
类型：发明
国别省市：