本发明专利技术公开了一种能提高儿茶素生物利用度的复方纳米脂质体的制备方法，包括以下步骤：1）、在20mL0.05mol/L的磷酸盐缓冲液（PBS,pH7.0）中加入100～150mg儿茶素和1.0～2.0g的Tween80于40～60℃搅拌，得儿茶素PBS溶液；2）、称取100～200mg丙磺舒、0.1～0.5g卵磷脂和100～500mg胆固醇溶于10～20ml二氯甲烷中，使用注射器注入步骤1）所得的温度为40～60℃的儿茶素PBS溶液中，恒温搅拌，得悬浮液；3）、将悬浮液旋转蒸发以除去二氯甲烷；再于350～400W功率的超声波下超声处理8～12min，得儿茶素复方纳米脂质体。
Preparation method of compound nano liposome capable of improving catechin bioavailability
The invention discloses a preparation method of catechins can improve the bioavailability of the compound liposomes, which comprises the following steps: 1), in 20mL0.05mol/L phosphate buffer (PBS, pH7.0) added in 100 ~ 150mg of catechin and 1 ~ 2.0g Tween80 to 40 to 60 DEG C to stir, catechin PBS solution; 2), weighing 100 ~ 200mg, 0.1 ~ 0.5g probenecid lecithin and cholesterol dissolved in 100 ~ 500mg, 10 ~ 20ml in dichloromethane, using a syringe injection step 1) the temperature of 40 ~ PBS catechin solution of 60 DEG C, thermostatic mixing, suspending liquid; 3), suspension rotary evaporation to remove dichloromethane; then in 350 ~ 400W ultrasonic power ultrasonic treatment was 8 ~ 12min, catechin compound nano liposome.
【技术实现步骤摘要】
儿茶素为茶叶中最主要的天然活性成分，具有多种药理和保健活性。本专利技术涉及一种能够提高儿茶素生物利用度的复方纳米脂质体的制备方法。
技术介绍
茶多酚(Tea Polyphenols, TP)是茶叶中多酚类及其衍生物的总称，主要有儿茶素、黄酮类、花青素和酚酸等物质组成，其中儿茶素类占茶多酚总量60%-90%。儿茶素具有很强的生物活性，大量研究均表明儿茶素具有抗氧化清除自由基、抗心血管疾病、抑菌消炎等多种保健和药理作用。但是制约着儿茶素或茶多酚高效利用的关键技术问题一直没有得到有效解决，其关键问题是儿茶素类化合物在机体内的胃肠道生物膜转运率较低，从而导致较低的生物利用度。因此，通过改变儿茶素类保健品的剂型来增强其生物利用度，必将为儿茶素的深入研究与开发奠定坚实的基础。痛风是由单钠尿酸盐沉积所致的晶体相关性关节病，与嘌呤代谢紊乱和(或)尿酸排泄减少所致的高尿酸血症直接相关，特指急性特征性关节炎和慢性痛风石疾病，主要包括急性发作性关节炎、痛风石形成、痛风石性慢性关节炎、尿酸盐肾病和尿酸性尿路结石，重者可出现关节残疾和肾功能不全。痛风常伴腹型肥胖、高脂血症、高血压、2型糖尿病及心血管病等 心脑血管性疾病。目前对高尿酸血症的治疗主要包括抑制尿酸生成的药物，如别嘌醇类药物；另一类为促进尿酸排泄加快的药物，如丙磺舒类药物。目前由于经济快速发展、人们生活节奏的加快，加之生活水平的提高、饮食结构的改变，导致的高尿酸血症和各种心脑血管慢性病逐渐呈现升高的趋势，往往相伴有高血压、高血脂、高血糖等现代内分泌、代谢紊乱性疾病。由于生活和工作压力过大，往往导致内分泌发生紊乱，从而导致机体机能和各种复合疾病进一步发生和加剧，大部分人都处于亚健康状态。加之各种应酬增多、抽烟、酗酒、熬夜、长期处在电脑辐射状态下，使得人们在不知不觉中体内积聚了大量的自由基，同时可能会慢慢滋生各种疾病。因此，开发符合现代人生活方式并能够快速清除体内自由基的新型保健品，具有重要意义和市场前景。由于高尿酸血症和高血脂、高血压等心脑血管类疾病往往伴随发生，而且此类疾病一般需要长期连续服药，同时由于丙磺舒具有抑制细胞上皮多药耐药外排蛋白的独特功效。目前与儿茶素或茶多酚相关的保健品层出不穷，传统保健品剂型有片剂、胶囊，新型保健品剂型有微球、微囊、脂质体、环糊精包合剂及固体分散剂等，其中部分剂型(如茶多酚片剂、茶多酚胶囊等)在临床进行了推广和应用，但临床效果并不十分理想。这些制剂均以单一的儿茶素作为主要活性成分，然而关于儿茶素和其他药品或保健品组成的复方制剂，鲜见报道。结合本实验室前期研究积累和大量文献报道可知，由于儿茶素类化合物极性较大、水溶性较高，生物膜渗透性较差，加之小肠上皮细胞膜中转运蛋白(P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白等)对儿茶素发挥“外排”作用，从而使得该类化合物口服后难以通过小肠上皮细胞进入全身血液循环，以致儿茶素类化合物在机体内的生物利用度较低，大部分在肠道中被各种酶或微生物所代谢和降解，或随粪便排泄到体外，从而使得该类化合物难以在体内发挥有效作用。因此，如何提高儿茶素类化合物生物膜转运速率，从而提高其生物利用度和增强儿茶素类化合物在作用靶部位的富集，是解决限制儿茶素大规模应用这一重要“瓶颈”的关键共性问题。目前在提高儿茶素生物膜转运方面的研究主要集中在儿茶素衍生化物的制备和应用上，近来年也有学者开展了儿茶素/茶多酚纳米粒制剂或注射用纳米乳剂的研究，但此类研究主要是针对如何促进儿茶素跨膜转运进行的有益探索。然而关于儿茶素与其他活性成分组成的复方制剂，从而发挥协同功效的研究尚未见报道。目前也没有丙磺舒和儿茶素的复方制剂被报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种儿茶素复方纳米脂质体的制备方法，采用该方法能制备出能够提高儿茶素生物利用度的复方制剂。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种儿茶素复方纳米脂质体的制备方法，包括以下步骤:1、，其特征是包括以下步骤:I)、在20mL0.05mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.0)中加入100~150mg儿茶素和1.0~2.0g的Tween80于40~60°C (最佳为50°C)搅拌，直至儿茶素和Tween80均溶解；得儿茶素PBS溶液；2)、称取100~200mg丙横舒、0.1~0.5g卵憐脂和100~500mg胆固醇溶于10~20ml 二氯甲烷中，使用注射器以1.5~2.5ml/分钟的速度(较佳为2ml/分钟)注入步骤I)所得的温度为40~60°C (最佳为50°C)的儿茶素PBS溶液中，恒温搅拌20~40min (较佳为30min),得悬浮液；3)、将悬浮液旋转蒸发以除去二氯甲烷；再于350~400W(较佳为380W)功率的超声波下超声处理8~12min (较佳为lOmin)，得儿茶素复方纳米脂质体。该儿茶素复方纳米脂质体一般为10-100纳米。作为本专利技术的的改进:卵磷脂为蛋黄卵磷脂或大豆卵磷脂。作为本专利技术的的进一步改进:依次进行以下步骤:1)、在20mL0.05mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS, pH7.0)中加入150mg儿茶素和1.6g的Tween80于50°C搅拌，直至儿茶素和Tween80均溶解；得儿茶素PBS溶液；2)、称取150mg丙磺舒、0.5g蛋黄卵磷脂和200mg胆固醇溶于IOml 二氯甲烧中，使用注射器以2ml/分钟注入步骤I)所得的温度为50°C的儿茶素PBS溶液中，恒温搅拌30min,得悬浮液；3)、将悬浮液于旋转蒸发仪上以除去二氯甲烷；再于380W功率的超声波下超声处理lOmin，得儿茶素复方纳米脂质体。在本专利技术中，0.05mol/L磷酸盐缓冲液(PBS, pH7.0)的制备方法为:准确称取磷酸氢二钠0.05396g、磷酸二氢钾0.08432g于烧杯，加水至20ml，从而配制0.05mol/L磷酸盐缓冲液(PBS, ρΗ7.0)。此为公知技术。本专利技术在专利技术过程中，使用了如下的检测方法:方法一、采用向0.3mL空白血浆中加入儿茶素EGCG标准品的方法，配制浓度范围为0.l-200mg/L的儿茶素EGCG标准样品，再向其中加入30 μ L20% (质量百分浓度)的抗坏血酸，再加入30 μ LlOO μ g/mL香兰素作为内标，混合后加入3mL乙酸乙酯进行萃取，振荡lmin, 6000r/min高速离心5min,分别得有机相(位于上层)和水相(位于下层);将水相(位于下层)用3mL乙酸乙酯重复萃取一次(萃取条件同上)，合并两次萃取有机相，于45°C水浴中氮气流(弱氮气流)吹干，所得残渣用0.lmL20% (体积％)的乙腈水溶液溶解，超声振荡后，18000r/min高速离心3min,取20 μ L上清液HPLC进样分析。具体为:以日本岛津高效液相色谱，两元高压泵，紫外检测器，大连伊利特Hypersil BDS C18柱(5 μ m, 250mmX 4.6mm),流动相为乙腈:0.1% (质量％)柠檬酸水溶液=10: 90 ;柱温 300C，波长 280nm ;流速为 1.0mL.mirT1 ;进样量为 20 μ L。备注说明:空白血浆即为没有加入EGCG的纯血浆。 根据HPLC检测结果，以儿茶素EGCG峰面积与内标香兰素峰面积之比(Y)为纵坐标，以儿茶素EG本文档来自技高网...
【技术保护点】
能提高儿茶素生物利用度的复方纳米脂质体的制备方法，其特征是包括以下步骤：1）、在20mL0.05mol/L的磷酸盐缓冲液（PBS,pH7.0）中加入100～150mg儿茶素和1.0～2.0g的Tween80于40～60℃搅拌，直至儿茶素和Tween80均溶解；得儿茶素PBS溶液；2）、称取100～200mg丙磺舒、0.1～0.5g卵磷脂和100～500mg胆固醇溶于10～20ml二氯甲烷中，使用注射器以1.5～2.5ml/分钟的速度注入步骤1）所得的温度为40～60℃的儿茶素PBS溶液中，恒温搅拌20～40min，得悬浮液；3）、将悬浮液旋转蒸发以除去二氯甲烷；再于350～400W功率的超声波下超声处理8～12min，得儿茶素复方纳米脂质体。
【技术特征摘要】
1.能提高儿茶素生物利用度的复方纳米脂质体的制备方法，其特征是包括以下步骤: 1)、在20mL0.05mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS, pH7.0)中加入100~150mg儿茶素和1.0~2.0g的Tween80于40~60°C搅拌,直至儿茶素和Tween80均溶解；得儿茶素PBS溶液； 2)、称取100~200mg丙横舒、0.1~0.5g卵憐脂和100~500mg胆固醇溶于10~20ml 二氯甲烷中，使用注射器以1.5~2.5ml/分钟的速度注入步骤I)所得的温度为40~600C的儿茶素PBS溶液中，恒温搅拌20~40min，得悬浮液； 3)、将悬浮液旋转蒸发以除去二氯甲烷；再于350~400W功率的超声波下超声处理8~12min，得儿茶素复方纳米脂质体。2.根据权利要求1所述的能提高...
【专利技术属性】
技术研发人员：葛建，韩宝瑜，王梦馨，
申请(专利权)人：中国计量学院，
类型：发明
国别省市：
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