一种水栎组织培养繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种水栎新品种组织培养繁殖方法，包括选材、消毒处理、试管芽苗培养、壮苗培养、增殖培养、生根培养、移栽、成活一系列操作；在体胚诱导、增殖、成熟、萌发培养的培养基中进行培养。本发明专利技术具有繁殖系数高，繁殖时间不受季节限制，取材对母体伤害小，无病虫害困扰，在水栎苗木生产及科研中均具有重要的应用价值。

Water oak tissue culture propagation method

The invention discloses a water oak tissue culture method for breeding new varieties, including material selection, disinfection, shoots in vitro cultivation, seedling cultivation, proliferation, rooting and transplanting, the survival of a series of operations; in the induction, somatic embryo proliferation, maturation, germination culture medium. The invention has the advantages of high reproduction coefficient, long propagation time, no seasonal restriction, small material damage, no disease and insect pest, and has important application value in the production and scientific research of water oak seedlings.

【技术实现步骤摘要】
一种水栋组织培养繁殖方法
本专利技术涉及水栎的繁育方法，具体地说是涉及水栎的组织培养方法。
技术介绍
水栎iQuercus /?办ra)为壳斗科栎属树种，原产美国东南部，主要分布于美国东南部的亚热带海岸平原及密西西比河中下游冲积平原区，在低地及海拔450米处均有分布，喜阳，适应性强，对土壤要求不严，既耐干旱瘠薄，又较耐水湿，抗寒，是优良的用材和绿化景观树种。然而由于水栎在我国的引种时间较短，且开花结果实较迟，结实大小年现象明显，种子来源少，扦插及嫁接的成活率均很低，对种苗的大量繁育带来了困难。组织培养技术是目前林业生物技术的主要内容之一，其主要用途是林木的大规模繁殖和分子育种。该技术的优点在于繁殖效率高，占用空间小，不受季节及外界环境的限制，需要母体材料少，能够在短期内提供大量优质苗木。
技术实现思路
专利技术目的:本专利技术的目的是针对水栎现有繁殖技术较为陈旧的问题，提供一种水栎良种的组织培养方法，其目的在于提高其繁殖系数以适应其引种推广及园林应用的需求。技术方案:本专利技术提供的，其操作步骤包括如下: (1)选材:于十月末在引种的十年生水栎树上采集种子，采用水浸法除去坏种子，将选出的种子置于沙、蔬菜颗粒肥、芦苇炭、草碳混合物的基质中培养，取水栎种子繁育的优良实生幼苗嫩茎为接种材料； (2)消毒处理:将幼苗嫩茎进行消毒处理； (3)试管芽苗培养:在无菌条件下，将步骤(2)中消毒后的外植体剪去接触消毒液的伤口，留f 2cm带芽茎段接种在启动培养基中，然后将其置于普通日光灯为光源的环境下，其中光照强度为1600-25001χ，每日光照时间为16小时，温度为(25±2)°C，湿度为50%~65%，培养22~25天，分化长成试管芽苗； (4)壮苗培养:由于初代诱导的小苗因受顽拗现象的影响直接增殖极易枯死，因此先进行壮苗培养，将步骤(3)中获得的试管芽苗，剪切带有1~2个腋芽的茎段或顶芽后，在超净的工作台上及无菌条件下，接种于经消毒的含有壮苗培养基的玻璃培养瓶中，在光照强度为1600-25001χ，每日光照时间为16小时，温度为(25±2) °C，湿度为50%~65%的条件下，进行壮苗培养，15^18天后进入下一步骤； (5)增殖培养:将从步骤(4)中长成的试管芽苗，剪切带有广2个腋芽的茎段或顶芽后，在超净的工作台上及无菌条件下，转接于经消毒的含有增殖培养基的玻璃培养瓶中，然后将其置于普通日光灯为光源的环境下，在光照强度为1600-25001χ，每日光照时间为16小时，温度为(25±2) °C，湿度为50%~65%的条件下，对芽苗进行增殖培养，15~18天后增殖系数为2.45~4 ；(6)生根培养:将步骤(5)中获得的试管苗，去掉基部组织和部分叶片，留3~4片叶片，于无菌条件下接种于经消毒的含有生根培养基的玻璃培养瓶中，在光照强度为1600-25001χ，每日光照时间为16小时，温度为(25±2) °C，湿度为50%~65%的条件下，进行生根培养15天后转至不含激素的WPM培养基中继续培养；15~20天后生根率达50% ； (7)移栽、成活:将步骤(6)中获得的生根瓶苗，取出洗净，移栽到含有泥炭和黄心土的基质中，其中泥炭与黄心土的体积比为1:1，然后浇透水，用塑料薄膜覆盖容器口，保持温度25~30 V，相对湿度75%~85%，培养30~35天，新叶完全展开，移栽成活率在80%~83%。进一步地，所述步骤(2)中的消毒处理过程包括:选取的外植体剪切成3~4cm长的小段，用洗衣粉溶液浸泡5 min,自来水冲洗10次，转入超净工作台，放入无菌烧杯中，用70%的酒精进行表面消毒30 S，无菌水冲洗3次，再用浓度为0.1%的升汞溶液消毒4.5分钟，最后用无菌水冲洗6次。进一步地，所述步骤(1)中的沙、蔬菜颗粒肥、芦苇炭、草碳混合物体积比为4:1:1:10进一步地，所述步骤(7)中的泥炭与黄心土的体积比为1:1-1.5。进一步地，所述步骤(3)中的启动培养基配方为:WPM基本培养基、0.01 mg.02mg.T1NAAJOg.L-1蔗糖、6.5 g.L-1卡拉胶；所述启动培养基的pH值控制在5.7~5.8。进一步地，所述步骤(5)中的壮苗培养基配方为:WPM基本培养基、0.01mg.02 mg.L^1NAA,0.5 mg.L-1 玉米素、30g.L-1 蔗糖、6.5 g.L-1 卡拉胶；所述壮苗培养基配方PH值控制在5.7~5.8。进一步地，所述步骤(6)的增殖培养基配方为:WPM基本培养基、0.lmg.0.02 mg.LlAA、30g.L-1蔗糖、6.5 g.L-1卡拉胶；增殖培养基pH值控制在5.7~5.8。进一步地，所述步骤(7)中的生根培养基配方为:WPM基本培养基、1.5mg.L-1IBA,30g.L—1蔗糖、6.5 g.L—1卡拉胶，所述生根培养基的pH值为5.7~5.8。进一步地，所述的WPM基本培养基即木本植物组织培养基的具体配方如下: 硝酸铵 NH4N03400 mg/L 硝酸钙 Ca (NO3) 2.4H20556 mg/L 氯化钙 CaCl2.2H2096 mg/L 硫酸镁 MgSO4.7H20370 mg/L 磷酸二氢钾 KH2PO4170 mg/L 硫酸钾 K2S04990 mg/L 乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA 37.3 mg/L 硫酸亚铁 FeSO4.7H2027.8 mg/L 硫酸锰 MnSO4.H2O22.3 mg/L 硫酸锌 ZnSO4.7H208.6 mg/L 硼酸 H3BO36.2 mg/L 钥酸钠 Na2MoO4.2H200.25 mg/L 硫酸铜 CuSO4.5H200.025 mg/L 氯化钴 CoCl2.620.025 mg/L肌醇 C6H12O6.2H20100 mg/L 甘氨酸 NH2.CH2.COOH 2 mg/L 盐酸硫胺素 C12H17ClOS.2HC1 I mg/L 盐酸吡唆醇 C8HltlNO5P0.5 mg/L 烟酸 NC5H4COOH0.5 mg/L 。有益效果:本专利技术相对于现有技术而言具有以下优点: (I)本专利技术所述的一种水栎组织培养方法相对于播种繁殖和其他无性繁殖而言，通过适当的操作和适宜的培养基，具有操作简便、节约占地空间，繁殖时间不受季节限制，其萌发率高，达到90%以上。 (2)本专利技术取材对母体无伤害，无病虫害困扰，繁殖系数高，能够保持原植株的优良性状的优点，在水栎苗木生产及科研中均具有重要的应用价值。(3)本专利技术与常规组培繁殖方法相比，由于初代诱导的水栎小苗因受顽拗现象的影响直接增殖极易枯死，本法在操作中将壮苗培养提前一步骤，在增殖诱导之前进行，有效保证了增殖成活率和增值系数。【具体实施方式】下面结合实施例对本专利技术作更进一步的说明。以下实例所用的基本培养基的配方如下: 芽诱导基本培养基为WPM培养基，其中，常量元素的组分和其对应的使用浓度如下:硝酸铵(NH4NO3) 400 mg/L、硝酸钙(Ca(NO3)2.4Η20) 556 mg/L、氯化钙(CaCl2.2Η20) 96 mg/L、硫酸镁(MgSO4.7H20) 370 mg/L、磷酸二氢钾(KH2PO4) 170本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水栎组织培养繁殖方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）选材：于十月末在引种的十年生水栎树上采集种子，采用水浸法除去坏种子，将选出的种子置于沙、蔬菜颗粒肥、芦苇炭、草碳混合物的基质中培养，取水栎种子繁育的优良实生幼苗嫩茎为接种材料；所述沙、蔬菜颗粒肥、芦苇炭、草碳混合物体积比为4:1:1:1；（2）消毒处理：将幼苗嫩茎进行消毒处理；（3）试管芽苗培养：在无菌条件下，将步骤（2）中消毒后的外植体剪去接触消毒液的伤口，留1~2cm带芽茎段接种在经消毒的含有启动培养基的玻璃培养瓶中，然后将其置于普通日光灯为光源的环境下，湿度为50%~65%，培养22~25天，分化长成试管芽苗；所述启动培养基配方为：WPM基本培养基、0.01?mg.?L?16?BA、0.02mg.?L?1NAA、30g.L?1蔗糖、6.5?g.L?1卡拉胶；所述启动培养基的pH值控制在5.7~5.8；（4）壮苗培养：将步骤（3）中获得的试管芽苗，剪切带有1~2个腋芽的茎段或顶芽后，转接于经消毒的含有壮苗培养基的玻璃培养瓶中，湿度为50%~65%的条件下，进行壮苗培养，15~18天后进入下一步骤；所述壮苗培养基配方为：WPM基本培养基、0.01mg.?L?16?BA、0.02?mg.?L?1NAA、0.5?mg.?L?1玉米素、30g.L?1蔗糖、6.5?g.L?1卡拉胶；所述壮苗培养基配方pH值控制在5.7~5.8；（5）增殖培养：将从步骤（4）中长成的试管芽苗，剪切带有1~2个腋芽的茎段或顶芽后，转接于增殖培养基中，湿度50%~65%；增殖培养15~20天；所述增殖培养基配方为：WPM基本培养基、0.?1mg.?L?16?BA、?0.02?mg.?L?1NAA、?30g.L?1蔗糖、6.5?g.L?1卡拉胶；增殖培养基pH值控制在5.7~5.8；（6）生根培养：将步骤（5）中获得的试管苗，去掉基部组织和部分叶片，留3~4片叶片，在无菌条件下，接种于经消毒的含有生根培养基的玻璃培养瓶中，在光照强度为1600~2500lx，每日光照时间为16小时，温度为(25±2)℃，湿度为50%~65%的条件下，进行生根培养15天后转至不含激素的WPM培养基中继续培养15~20天；所述生根培养基配方为：WPM基本培养基、1.5mg.L?1IBA、30g.L?1蔗糖、6.5?g.L?1卡拉胶，所述生根培养基的pH值为5.7~5.8；（7）移栽、成活：将步骤（6）中获得的生根瓶苗，取出洗净，移栽到含有泥炭和黄心土的基质中，然后浇透水，用塑料薄膜覆盖容器口，保持温度25~30?℃，相对湿度75%~85%，培养30~35天。...

【技术特征摘要】
1.一种水栎组织培养繁殖方法，其特征在于:包括以下步骤: (1)选材:于十月末在引种的十年生水栎树上采集种子，采用水浸法除去坏种子，将选出的种子置于沙、蔬菜颗粒肥、芦苇炭、草碳混合物的基质中培养，取水栎种子繁育的优良实生幼苗嫩茎为接种材料；所述沙、蔬菜颗粒肥、芦苇炭、草碳混合物体积比为4:1:1:1 ; (2)消毒处理:将幼苗嫩茎进行消毒处理； (3)试管芽苗培养:在无菌条件下，将步骤(2)中消毒后的外植体剪去接触消毒液的伤口，留f 2cm带芽茎段接种在经消毒的含有启动培养基的玻璃培养瓶中，然后将其置于普通日光灯为光源的环境下，湿度为50%飞5%，培养22~25天，分化长成试管芽苗；所述启动培养基配方为:WPM基本培养基、0.01 mg.L_16-BA>0.02mg.1^1NAAJOg.171 鹿糖、6.5 g.171 卡拉胶；所述启动培养基的pH值控制在5.7^5.8 ； (4)壮苗培养:将步骤(3)中获得的试管芽苗，剪切带有广2个腋芽的茎段或顶芽后，转接于经消毒的含有壮苗培养基的玻璃培养瓶中，湿度为50%~65%的条件下，进行壮苗培养，15~18天后进入下一步骤；所述壮苗培养基配方为:WPM基本培养基、0.01mg.^-ΒΑ,Ο.02mg.L_1NAA>0.5 mg.L—1玉米素、30g.L—1鹿糖、6.5 g.L—1卡拉胶；所述壮苗培养基配方pH值控制在5.7~5.8 ； (5)增殖培养:将从步骤(4)中长成的试管芽苗，剪切带有广2个腋芽的茎段或顶芽后，转接于增殖培养基中，湿度50%~65% ;增殖培养15~20天；所述增殖培养基配方为:WPM基本培养基、0.lmg.Ll-BA、0.02 mg.L^1NAA, 30g.1 蔗糖、6.5 g.1 卡拉胶；增殖培养基pH值控制在5.7~5.8 ; (6)生根培养:将步骤(5)中获得的试管苗，去掉基部组织和部分叶片，留3~4片叶片，在无菌条件下，接种于经消毒的含有生根培养基的玻璃培养瓶中，在光照强度为1600-25001χ，每日光照时间为16小时，温度为(25±2) °C，湿度为50%~65%的条件下，进行生根培养15天后转至不含激素的WPM培养基中继续培养15~20天；所述生根培养基配方为:WPM基本培养基、1.5mg....

【专利技术属性】
技术研发人员：黄利斌，张敏，陈智敏，窦全琴，董筱昀，
申请(专利权)人：江苏省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：