【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供。该方法包括以下步骤：设计一条颈环结构的逆转录引物，一条锁式探针和一对分支滚环扩增反应（HRCA）的扩增引物；建立逆转录反应体系，用于microRNA的逆转录反应；建立锁式探针的连接体系，用于锁式探针的连接反应；建立超分支滚环扩增反应体系，用于以环化的锁式探针为模板的超分支滚环扩增反应；配置2%的琼脂糖凝胶，用于扩增产物的检测。该方法通过扩增产物电泳后在琼脂糖凝胶上是否呈阶梯状条带来判断目标microRNA的有无，具有较高的灵敏度、特异度和准确度，并且操作简单，无需昂贵的检测仪器，适合临床推广。【专利说明】—种microRNA的超分支滚环扩增检测方法
本专利技术属于核酸分子检测领域，涉及miR-21的超分支滚环扩增检测方法。
技术介绍
MicroRNA是一类广泛存在于真核生物体内的，长度为18~25个核苷酸的非编码小分子RNA，通过与mRNA的3’非翻译区特异性结合的方式，导致靶mRNA的降解或是抑制其蛋白质翻译过程，从而达到调苄基因表达的目的。研究表明microRNA可以作为许多重要疾病的生物学标志物。特别是其与肿瘤之间的相关性...
【技术保护点】
一种microRNA的超分支滚环扩增检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1）逆转录引物的设计：逆转录引物是按照与靶microRNA碱基互补配对的原则所设计，使其3’端末尾6个碱基与靶microRNA3’端末尾6个碱基互补配对，并形成一种颈环结构；2）锁式探针的设计：锁式探针以cDNA序列中的一段连续排列的碱基作为识别序列，其中5’端为15个碱基，3’端为25个碱基，5’端磷酸化；3）根据锁式探针的序列设计一对扩增引物CF1、CF2；4）逆转录反应体系的建立：包含microRNA、逆转录引物、dNTPs、10×RT缓冲液、RNA酶抑制剂、逆转录酶、DEPC?H2O；5）锁式探...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：鲁卫平，郭仲莉，陈鸣，邓少丽，唱凯，王丰，顾大勇，李发科，贾双荣，何大莉，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第三附属医院，
类型：发明
国别省市：
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