本发明专利技术涉及天然药物的分离方法，具体涉及一种运用高速逆流色谱从红花中分离制备亚精胺的方法。本发明专利技术方法包括以下步骤：①将氯仿、甲醇和水溶液混合成混合溶剂，分层；②将红花亚精胺粗提物溶于步骤①的下层中；③取步骤①混合溶剂分层，将步骤②溶液经进样阀进入色谱柱，进样完毕后继续泵入流动相；④收集分离物，浓缩，即得1、2、3和4四个亚精胺单体。本发明专利技术利用高速逆流色谱并采用了合理的溶剂体系从红花中获得高纯度的亚精胺化合物，本发明专利技术不需要使用固相载体，无不可逆吸附，样品无损失、无污染、高效、快速、低成本分离制备亚精胺，获得的亚精胺纯度可达95％以上。本发明专利技术工艺简单、操作方便、安全、重复性好，可工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及天然药物的分离方法，具体涉及。本专利技术方法包括以下步骤：①将氯仿、甲醇和水溶液混合成混合溶剂，分层；②将红花亚精胺粗提物溶于步骤①的下层中；③取步骤①混合溶剂分层，将步骤②溶液经进样阀进入色谱柱，进样完毕后继续泵入流动相；④收集分离物，浓缩，即得1、2、3和4四个亚精胺单体。本专利技术利用高速逆流色谱并采用了合理的溶剂体系从红花中获得高纯度的亚精胺化合物，本专利技术不需要使用固相载体，无不可逆吸附，样品无损失、无污染、高效、快速、低成本分离制备亚精胺，获得的亚精胺纯度可达95％以上。本专利技术工艺简单、操作方便、安全、重复性好，可工业化生产。【专利说明】
本专利技术涉及天然药物的分离方法，具体涉及一种用高速逆流色谱法从红花中分离制备4个顺反同分异构亚精胺的方法。
技术介绍
红花菊科属植物红花的干燥花，能“活血、润燥、止痛、散肿通经”。中医上认为红花味辛、微苦、性温、归心和肝经，具有活血通经、散瘀止痛、降血压、降血脂的功效，用于经闭、痛经、跌打损伤、冠心病、心绞痛和高血压等疾病。红花在现代临床中成为预防和治疗冠心病、心肌梗死和脑血栓等疾病的重要中药。现代药理实验表明:红花能改善心脑血氧供应、减轻缺血性损伤、抗凝血、抗心肌缺血、抑制血小板聚集、抗氧化、抗肿瘤和抗炎等药理作用。红花中的亚精胺存在众多的同分异构体，传统的色谱分离手段不能实现对其高效、快速分离。传统研究中，通常使用多步硅胶柱层析以及联用制备液相等方法分离制备红花中亚精胺，不仅耗费时间长，不能在线检测，也会造成死吸附，损失较大，得率较低。高速逆流色谱(high-speedcountercurrent chromatography, HSCCC)是一种连续高效的液-液分配色谱技术，由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等，样品的理论回收率为100%，特别适合于天然物活性成分的分离。利用高速逆流色谱从红花中分离制备亚精胺类化合物的工业化生产，目前尚未见国内外有关文献和专利报道。
技术实现思路
本专利技术公开了一种用高速逆流色谱从红花中分离化合物1、2、3和4四个亚精胺OvijA5jTv10- (E) -tr1-/?-cou`maroy I spermidine (EEE)、/V1 (E) -TV5- (Z) -TV10- (E) -tr1-/?-coumaroylspermidine (EZE) (Z) -Λ5- (Z) -TV10- (E) -tr1-/7-coumaroylspermidine (ZZE)和 TV^/V5，Nw- (Z) -tr1-/7-coumaroylspermidine (ZZZ)的方法，四个亚精胺的 结构式如图1 一图4所不。本专利技术一种高速逆流色谱分离红花中四个亚精胺的方法通过下述技术方案予以实现: 一种高速逆流色谱分离红花中四个亚精胺的方法包括以下步骤: ①将氯仿、甲醇和水溶液混合成混合溶剂，分层； ②将红花亚精胺粗提物溶于步骤①的下层中； ③取步骤①混合溶剂分层，下相作为固定相，上相作为流动相，将固定相和流动相先后泵入高速逆流色谱内，将步骤②溶液经进样阀进入色谱柱，进样完毕后继续泵入流动相；④依据检测器谱图分别收集分离物，浓缩，即得1、2、3和4四个顺反同分异构亚精胺单体。本专利技术优点:本专利技术利用高速逆流色谱并采用了合理的溶剂体系从红花中获得高纯度的亚精胺化合物，该技术不需要使用固相载体，无不可逆吸附，样品无损失、无污染、高效、快速、低成本分离制备亚精胺，获得的亚精胺纯度可达95%以上。本专利技术工艺简单、操作方便、安全、重复性好，可工业化生产。【专利附图】【附图说明】本专利技术一种高速逆流色谱分离红花中四个亚精胺的方法有如下附图: 图1是本专利技术一种高速逆流色谱分离红花中四个亚精胺的方法亚精胺I化学结构式； 图2是本专利技术一种高速逆流色谱分离红花中四个亚精胺的方法精胺2化学结构式； 图3是本专利技术一种高速逆流色谱分离红花中四个亚精胺的方法精胺3化学结构式； 图4是本专利技术一种高速逆流色谱分离红花中四个亚精胺的方法精胺4化学结构式； 图5是本专利技术一种高速逆流色谱分离红花中四个亚精胺的方法高速逆流色谱分离亚精胺谱图； 图6是本专利技术一种高速逆流色谱分离红花中四个亚精胺的方法红花亚精胺粗提物液相检测图； 图7是本专利技术一种高速逆流色谱分离红花中四个亚精胺的方法亚精胺I单体液相检测图； 图8是本专利技术一种高速逆流色谱分离红花中四个亚精胺的方法亚精胺2单体液相检测图； 图9是本专利技术一种高速逆流色谱分离红花中四个亚精胺的方法亚精胺3单体液相检测图； 图10是本专利技术一种高速逆流色谱分离红花中四个亚精胺的方法亚精胺4单体液相检测图。【具体实施方式】下面结合附图和实施例对本专利技术一种高速逆流色谱分离红花中四个亚精胺的方法技术方案作进一步描述。如图1 一图10所示，，其特征在于所述的方法包括以下步骤: ①将氯仿、甲醇和水溶液混合成混合溶剂，分层； ②将红花亚精胺粗提物溶于步骤①的下层中； ③取步骤①混合溶剂分层，下相作为固定相，上相作为流动相，将固定相和流动相先后泵入高速逆流色谱内，将步骤②溶液经进样阀进入色谱柱，进样完毕后继续泵入流动相； ④依据检测器谱图分别收集分离物，浓缩，即得1、2、3和4四个顺反同分异构亚精胺单体。所述的步骤①中的氯仿、甲醇和水的体积比为3~5: 4: 3~5。所述的步骤②中红花粗提物溶于混合溶剂后的浓度为6~15 mg/mL。所述的红花亚精胺粗提物由下列方法制备:将红花干燥花按液料比10~20:1加入60~80%酒精于45~65 V回流提取2~4次，每次1.5~2.5个小时，合并提取液并减压浓缩至干，将蒸干的浸膏用去离子水溶解，然后用等体积的石油醚和乙酸乙酯分别萃取3~6次；将水相上大孔吸附树脂，先用25~35%的乙醇洗脱，再用45~55%乙醇洗脱；将45~55%乙醇洗脱液减压浓缩至干，即得。所述的高速逆流色谱仪流速范围为0.5~2 mL/min，转速范围为600~900 r/min0所述的检测波长为210~360nm。实施例1。1、红花亚精胺粗提物制备 取红花500 g按液料比15:1加入70%酒精于60 1:回流提取3次，每次2 h，合并提取液并减压浓缩至干，将蒸干的浸膏用250 mL去离子水溶解，然后用等体积的石油醚和乙酸乙酯分别萃取5次。取500 g AB-8大孔树脂，装入直径20 cm的层析柱，将水相上样，30%和50%的乙醇依次洗脱。50%的乙醇洗脱液减压浓缩至干，储存于冰箱中待进一步的HSCCC分离。2、高速逆流分离制备亚精胺 在分液漏斗中配制氯仿-甲醇-水(1:1:1，v/v)两相溶剂系统，充分振摇后静置过夜。下相为固定相，上相为流动相，使用前分别超声脱气30 min.取100 mg待分离样品粉末，震荡完全溶解于10 mL下相溶液中，备用。用15 mL/min流速将溶剂系统下相泵入主机并充满分离螺线管，开启循环水浴并将温度设定为25 °C。开启主机电源以850 r/min正向旋转，待转速稳定后，以2.0 mL/min流速泵入流动相，待流动相从管柱出口`流出且基线稳定后，将样品溶本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种运用高速逆流色谱从红花中分离制备亚精胺的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤：①将氯仿、甲醇和水溶液混合成混合溶剂，分层；②将红花亚精胺粗提物溶于步骤①的下层中；③?取步骤①混合溶剂分层，下相作为固定相，上相作为流动相，将固定相和流动相先后泵入高速逆流色谱内，将步骤②溶液经进样阀进入色谱柱，进样完毕后继续泵入流动相；④依据检测器谱图分别收集分离物，浓缩，即得1、2、3?和4?四个亚精胺单体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：丁晨旭，李文聪，王小艳，张秋龙，王洪伦，索有瑞，
申请(专利权)人：中国科学院西北高原生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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