miR-375的应用制造技术

本发明专利技术涉及医药和生物技术领域，具体为miR-375的应用。通过体外实验研究miR-375对肾上腺皮质癌细胞增殖的影响。在人H295R细胞系上以瞬时转染的方式使miR-375过表达，结果显示，miR-375过表达可抑制肾上腺皮质癌细胞系H295R增殖。因此，miR-375对于肾上腺皮质癌细胞的增殖有调控作用，可用于制备筛选肾上腺皮质癌或肾上腺肿瘤的药物。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及医药和生物
，具体为miR-375的应用。通过体外实验研究miR-375对肾上腺皮质癌细胞增殖的影响。在人H295R细胞系上以瞬时转染的方式使miR-375过表达，结果显示，miR-375过表达可抑制肾上腺皮质癌细胞系H295R增殖。因此，miR-375对于肾上腺皮质癌细胞的增殖有调控作用，可用于制备筛选肾上腺皮质癌或肾上腺肿瘤的药物。【专利说明】miR-375的应用
本专利技术涉及医药和生物
，具体为用miRNA制备和筛选治疗肾上腺肿瘤的药物及诊断试剂。
技术介绍
近年来，随着表观遗传学的兴起，越来越多的研究开始关注非编码核糖核酸(noncoding RNA, ncRNA),其中的microRNA (miRNA)更成为发育、代谢、肿瘤等各个领域的新兴研究热点。microRNAs (miRNAs)是一类长约19-25个核苷酸大小的在进化上非常保守的内源性非编码RNA，通过转录后调控对靶基因的表达水平产生影响；micr0RNAS在动植物和微生物中广泛存在，由DNA经RNA聚合酶II或III转录生成前体miRNA(pr1-miRNA)，之后pr1-miRNA被Drosha酶切割形成长度大约70-100碱基的、具发夹结构的pre_miRNA。这些发夹结构的RNA被核输出蛋白exportin5转运到细胞质,再被胞衆中的Dicer酶切割形成成熟的miRNAs产物，同Ago2、TRBP等蛋白一起形成RNA诱导的沉默复合体(RNA-1nducedsilencing complex, RISC)。它们通过同祀基因 mRNA 的 3’ 端非翻译区(3，untranslatedregion, 3’ UTR)的碱基完全或不完全配对，引起靶基因mRNA的降解和/或抑制该mRNA的翻译，从而直接抑制蛋白质的表达。近几年来通过高通量测序等研究方法，已发现了上千种可编码miRNA的基因，而超过30%的编码蛋白质基因受到这些miRNA的调控。自2002年Calin等人首次报道了在慢性淋巴细胞白血病中存在miR-15及miR-16的表达缺失及下调，miRNA在肿瘤发生、发展中的作用及对肿瘤治疗疗效、预后判断的影响逐渐为人们所认识。现已有大量文献报道了在乳腺癌、胃癌、肺癌、前列腺癌、肝癌等多种肿瘤性疾病中miRNA表达的异常及其调控机制，其或扮演了原癌基因或抑癌基因的角色。而miRNA在内分泌相关代谢和肿瘤发生过程中的功能也已成为了研究热点，如在胰腺癌，甲状腺、垂体、卵巢肿瘤中均可见miRNAs表达异常的相关报道。在肾上腺疾病中，对于基因表达差异及其与疾病和预后的相关性`也有一些研究报道近期有研究报道了嗜铬细胞瘤、库欣综合征、肾上腺皮质癌等肾上腺肿瘤组织中miRNA的表达差异，而对于原醛症，尚未见任何报道研究非编码RNA的表达和功能，其中对于肾上腺皮质细胞增生的机制研究更加缺少。相较其他肿瘤的研究情况，这在很大程度上制约了人们对原醛症的认识，限制了诊断和治疗技术手段的发展。越来越多证据显示，miRNA参与了肿瘤生物学行为的多个环节。
技术实现思路
本专利技术旨在将miR-375应用于制备或筛选治疗肾上腺肿瘤的药物。本专利技术还将miR-375应用于制备或筛选治疗肾上腺皮质癌的药物。本专利技术还将miR-375应用于制备或筛选调控或肾上腺皮质癌细胞增殖的药物。通过体外实验研究miRNA-375 (miR-375)对肾上腺皮质癌细胞增殖的影响。在人H295R细胞系上以mimics瞬时转染，使miR-375过表达，利用CCK-8，EDU染色观察miRNA过表达导致的细胞增殖变化。结果显示，miR-375过表达可抑制肾上腺皮质癌细胞系H295R增殖。因此，miR-375对于肾上腺皮质癌细胞的增殖有调控作用，可用于制备筛选肾上腺皮质癌或肾上腺肿瘤的药物。本专利技术确定了 miR-375与肾上腺皮质癌细胞增殖的关系，可将miR-375作为筛选的指标，通过检测m1-375的表达水平，来筛选制备治疗肾上腺肿瘤尤其是治疗肾上腺皮质癌的药物、或者是调控肾上腺皮质癌细胞增殖的药物。【专利附图】【附图说明】图1的A-E为实施例3中，原发性醛固酮增多症中腺瘤、结节样增生组织及正常对照组织中 miRNA-375、miRNA-7、miRNA-29a、miRNA-29b 和 miRNA_29c 的表达差异。图2为实施例5中，在H295R瞬时转染mimic时miR-375表达情况图3为实施例5中，在H295R细胞系中过量表达miR-375时抑制细胞增殖的结果，A为CCK8检测结果，B为EDU染色情况。【具体实施方式】实施例1确诊为原发性醛固酮增多症并行手术治疗的患者128例1.筛查对象选择标准:(I)JNC (Joint National Committee on the Prevention, Evaluation, andTreetment of High BLood Pressu re)高血压分级 2 级(BP > 160 ~179/100 ~109mmHg)、3级(BP > 180/1IOmmHg)；(2)难治性高血压(联合使用3种降压药物治疗，其中必须包括利尿剂，且每种降压药物均达常规治疗剂量，血压仍大于140/90mmHg)；(3)自发性或利尿剂所致的低钾血症；(4)肾上腺意外瘤；(5)早发性高血压家族史或早发(小于40岁)脑血管意外家族史；(6)原醛患者中存在高血压的一级亲属。I1.选择对象的诊断醛固酮/肾素(ARR):所有研究对象停用对RASS系统有影响药物，包括利尿剂、甘草及其制剂4周以上，停用血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素受体拮抗剂、二氢吡啶类钙离子拮抗剂、β受体阻滞剂、非留体类抗炎药2周以上，降压可改用非二氢吡啶类钙离子拮抗剂或α受体阻滞剂控制血压。清晨起床保持非卧位状态2h (可以站立、走动、座位)，休息15min后于10: 00前坐位抽取血醛固酮及肾素，并计算ARR。ARR>300需进一步行生理盐水试验。同时完善其他激素水平及生化检测，包括血、尿电解质，同时完善血ACTH、血皮质醇、尿游离皮质醇、血浆甲氧基肾上腺素(丽)、血浆甲氧基去甲肾上腺素(NMN)检测。确诊:参照2008年国际内分泌学会发表的《原发性醛固酮增多症诊断及治疗指 南》(Case Detection, Diagnosis, and Treatment of Patients with PrimaryAldosteronism:An Endocrine Society Clinical Practice Guideline)推荐的石角诊原醒的试验方法，我们采用了其中的生理盐水抑制试验生理盐水试验:试验前须卧床休息lh，8: OO开始，在4h内静脉滴注生理盐水2000ml (500ml/h，滴速恒定)，在整个过程中需要密切监测血压和心率变化。在静滴前和静滴后分别测定血醛固酮及血钾。生理盐水后醛固酮水平>100pg/mL原醒诊断成立。分型诊断(I)肾上腺CT扫描:为定位诊断首选检查方式，患者常规行双侧肾上腺平扫加增强CT扫描，层厚3.75mm。CT扫描可提示肾上腺形态正常，单侧肾上腺肢增厚，双侧肾上腺结节样增生，本文档来自技高网...

【技术保护点】
MiR?375用于制备或筛选治疗肾上腺肿瘤的药物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：宁光，何娟，王卫庆，李小英，曹亚南，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属瑞金医院，
类型：发明
国别省市：