许氏平鮋微卫星DNA分子标记制造技术

本发明专利技术公开了一种许氏平鮋微卫星DNA分子标记，包括许氏平鮋微卫星(CA)16、(GA)16富集文库的构建和含有微卫星序列阳性克隆的筛选及测序，确定了10个多态性丰富的微卫星标记SS101、SS102、SS103、SS104、SS105、SS106、SS107、SS108、SS109、SS110。本发明专利技术提供了10个许氏平鮋的新的微卫星位点及扩增这10个微卫星位点的引物序列和扩增方法，可应用于许氏平鮋的群体遗传结构分析、亲权鉴定及分子标记辅助育种等领域，是一种可靠有效的分子标记。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种许氏平鮋微卫星DNA分子标记，包括许氏平鮋微卫星(CA)16、(GA)16富集文库的构建和含有微卫星序列阳性克隆的筛选及测序，确定了10个多态性丰富的微卫星标记SS101、SS102、SS103、SS104、SS105、SS106、SS107、SS108、SS109、SS110。本专利技术提供了10个许氏平鮋的新的微卫星位点及扩增这10个微卫星位点的引物序列和扩增方法，可应用于许氏平鮋的群体遗传结构分析、亲权鉴定及分子标记辅助育种等领域，是一种可靠有效的分子标记。【专利说明】许氏平紬微卫星DNA分子标记
本专利技术属于分子生物学DNA标记
，具体涉及一种许氏平鈾微卫星位点及引物。
技术介绍
微卫星DNA，又称作短串连重复(STRs )、简单重复序列(SSRs )、简单序列长度多态性(SSLP)，是指基因组中以I飞个核苷酸为单位串联组成的核苷酸序列。根据重复单元的构成，微卫星DNA序列被分为3种类型:单一型(pure)、复合型(compound)和间断型(interrupted)。例如: 单一型:AGAGAGAGAGAGAGAG ； 复合型:AGAGAGAGAGACACAC ； 间断型:AGAGAGTTAGAGAGTT。微卫星标记具有分布广泛、多态性信息容量高、呈共显性、符合孟德尔分离规律、易于PCR扩增、再现性好等优点，已经被广泛应用于海洋生物的群体遗传结构分析、亲权鉴定、遗传连锁图谱构建、功能基因定位和遗传育种等领域。许氏平鈾(5?<35.--?5.5?76^--7Υ),又名黑鯧,俗称黑寨、黑鱼、黑头鱼、黑石斑、黑老婆、黑石鲈，隶属于鈾形目、鈾科、平鈾属，是一种温水性岩礁鱼类。主要分布于西太平洋中部和北部，在黄海和东海、朝鲜半岛、日本、鄂霍次克海南部均有分布。许氏平鈾肉质细嫩，味道鲜美，一直是我国北方海域重要的海捕经济鱼类。由于具有抗病力强、生长速度快、耐低温、在北方海域可以自然越冬等特点，许氏平鈾已成为我国北方海水网箱养殖和池塘养殖的主要经济鱼类之一。而且黑鰓是近海礁栖性鱼类，营半定居式生活，人工增殖放流回捕率高，近年来逐渐成为我国增殖放流的重要海水鱼类。但目前养殖的苗种仍以海捕野生苗为主，存在养殖成活率低，破坏野生资源等问题。为了保护许氏平鈾的野生种质资源，增加人工养殖效率，对其进行种质资源现状分析、亲权鉴定、遗传连锁图谱构建及遗传育种等相关工作已经非常迫切。但是目前针对许氏平鈾开发并正式发表的微卫星标记还很少，仅有 4 篇相关文献:Yoshida 等人(Yoshida et al, Moleculer ecology notes, 2005, 5,416)利用同位素标记的(GT)ltl探针对部分基因组文库进行杂交筛选的方法，开发了 6对微卫星引物；An 等人(An et al., Conservation genetics, 2009, 10, 1969)利用生物素标记的(CA)12探针杂交和磁珠富集相结合的方法，开发了 14对微卫星引物；Bai等人(Baiet al., Genetics and molecular research, 2011, 10, 2065)利用生物素标记的(GT) 13探针杂交和磁珠富集相结合的方法，开发了 18对微卫星引物；Yasuike等人(Yasuike etal., Conservation genetics resources , 2012, 5, 577)利用 454 测序技术得到了部分三核苷酸、四核苷酸、五核苷酸重复的微`卫星序列，开发了 17对多态性微卫星引物。因此，需要开发更多微卫星标记来满足良种选育相关的遗传分析的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供许氏平鈾微卫星位点及多态性引物，即提供10个许氏平鈾的微卫星位点，以及相应的多态性微卫星引物，为许氏平鈾群体遗传结构分析、亲权鉴定及分子标记辅助育种提供有效的工具。本专利技术解决技术问题的技术方案:许氏平鈾微卫星位点DNA分子标记，包括构建许氏平鈾微卫星(ca)16、(ga)16富集文库，筛选许氏平鈾多态性微卫星引物及利用一个野生群体对其这些微卫星位点进行遗传多态性检测，确定了许氏平鈾10个多态性丰富的微卫星标记:SS101、SS102、SS103、SS104、SS105、SS106、SS107、SS108、SS109、SS110，其核苷酸序列分别为SEQ ID N0.1—N0.10所示。所述10个多态性丰富的微卫星标记的引物序列是从序列SEQ ID N0.1—N0.10的微卫星重复序列两端的侧翼保守序列上分别设计的正向、反向引物，分别为SEQ IDN0.11—N0.30 所示。微卫星位点、位点序列和对应的引物信息如表1。表1:10个微卫星位点及对应引物信息。【权利要求】1.许氏平鈾微卫星DNA分子标记，其特征在于，所述的微卫星标记编号为:SS101、SS102、SS103、SS104、SS105、SS106、SS107、SS108、SS109、SS110，其核苷酸序列为 SEQ IDN0.1—N0.10 所示。2.根据权利要求1所述的一种许氏平鈾微卫星标记，其特征在于上述位点的引物序列为 SEQ ID N0.11— N0.30 `所示。【文档编号】C12Q1/68GK103484454SQ201310356984【公开日】2014年1月1日 申请日期:2013年8月16日 优先权日:2013年8月16日 【专利技术者】马海涛, 姜海滨, 刘相全, 杜荣斌, 杨建敏 申请人:山东省海洋水产研究所本文档来自技高网...

【技术保护点】
许氏平鮋微卫星DNA分子标记，其特征在于，所述的微卫星标记编号为：SS101、SS102、SS103、SS104、SS105、SS106、SS107、SS108、SS109、SS110，其核苷酸序列为SEQ?ID?NO.1—NO.10所示。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马海涛，姜海滨，刘相全，杜荣斌，杨建敏，
申请(专利权)人：山东省海洋水产研究所，
类型：发明
国别省市：