本发明专利技术涉及一种检测CYP3A4基因多态性的试剂盒及方法，属于基因测序技术领域。所述试剂盒包括检测用引物，即包括：CYP3A4基因第1～3外显子的长片段扩增特异性上下游引物、CYP3A4基因第4～7外显子的长片段扩增特异性上下游引物、CYP3A4基因第8～11外显子的长片段扩增特异性上下游引物和CYP3A4基因第12～13外显子的长片段扩增特异性上下游引物中的至少一对，以及与所述第1～3外显子的长片段DNA、第4～7外显子的长片段DNA、第8～11外显子的长片段DNA以及第12～13外显子的长片段DNA相对应的CYP3A4基因的各外显子的上下游测序引物中的至少一对。本发明专利技术检测时间短、工作量少。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种检测CYP3A4基因多态性的试剂盒及方法，属于基因测序
。所述试剂盒包括检测用引物，即包括：CYP3A4基因第1～3外显子的长片段扩增特异性上下游引物、CYP3A4基因第4～7外显子的长片段扩增特异性上下游引物、CYP3A4基因第8～11外显子的长片段扩增特异性上下游引物和CYP3A4基因第12～13外显子的长片段扩增特异性上下游引物中的至少一对，以及与所述第1～3外显子的长片段DNA、第4～7外显子的长片段DNA、第8～11外显子的长片段DNA以及第12～13外显子的长片段DNA相对应的CYP3A4基因的各外显子的上下游测序引物中的至少一对。本专利技术检测时间短、工作量少。【专利说明】—种检测CYP3A4基因多态性的试剂盒及方法
本专利技术涉及基因测序
，具体涉及一种检测CYP3A4基因多态性的试剂盒及方法。
技术介绍
细胞色素P450酶(Cytochrome P450, CYP),又称混合功能氧化酶(Mixed functionoxcidase)、单加氧酶(Monooxygenase)或药物代谢酶,其广泛分布于动物、植物和微生物体内。在哺乳动物的组织中已经发现有20多种同工酶，分为CYPl~4的4个家族。CYP3A型酶在体内占CYP450总量的70%，占肝内CYP450的30 %，参与60 %以上常用药物在体内的代谢转化。目前，在人体内己发现4种CYP3A~基因，即CYP3A4、CYF3A5，CYP3A7和CYP3A43，而其中CYP3A4是临床上最重要的P450酶之一，参与代谢38个类别的150多种药物的氧化代谢，约占全部药物的50%，是许多药物因相互作用发生不良反应的根源。CYP3A4是肝脏和胃肠道中主要的P450代谢酶，其活性表现为单态分布，在许多药物和环境污染物的代谢中发挥着重要作用。研究表明，CYP3A4不仅在表达水平上具有显著的个体差异，其底物的体内代谢也可相差10倍以上。编码CYP3A4蛋白的基因位于染色体7q21.3—22.1，编码区域包含13个外显子和12个内含子，主要调控其转录及表达的结构区位于5端，长约27kb, CYP3A4基因多态性具体详见CYP等位基因数据库(http://www.cypalleles.k1.se)。到目前为止CYP3A4已有24个等位基因已经确定，不同种族间CYP3A4SNPs的发生频率不同，如CYP3A4*3和*17仅在白种人中发现，CYP3A4*15只在黑种人中发现，而CYP3A4*16仅存在于日本人和墨西哥人中，在已发现的39个SNPs中，CYP3A4*4，*5，*6，*18，*19在中国人中已确定，它们的发生频率分别为1.5 %，0.98 %，0.5 %，2 %和2 %。许多常用药物是CYP3A4的强诱导剂或抑制剂，当CYP3A4作为诱导剂时，其与代谢底物合并用药，能大大提高后者的代谢速率，从而可能使后者无法达到发挥药效时的血药浓度，降低后者的利用度或者无法达到治疗效果。相反，当CYP3A4作为抑制剂时，它们与经CYP3A4代谢的药物合并用药时，会减少后者的代谢速率，导致后者的血药浓度升高，可能引起不良反应。因此，通过检测CYP3A4基因多态性，判断CYP3A4酶的活性，为临床用药个体化提供指导依据。现有技术中采用直接测序法检测CYP3A4基因多态性，即首先采用PCR扩增不同的目的片段后，回收纯化PCR产物，然后进行测序。由于直接测序法的检测时间过长，一般需要48个小时以上，使该检测的效率降低，因此，为检测CYP3A4基因多态性带来不便。
技术实现思路
针对现有技术中检测CYP3A4基因多态性的时间长、步骤繁琐、需要多次PCR的问题，本专利技术的目的在于提供一种检测CYP3A4基因多态性的试剂盒。本专利技术的另一目的在于提供一种检测CYP3A4基因多态性的方法。为了解决现有技术检测CYP3A4基因多态性时间长、步骤繁琐、需要多次PCR的问题，本专利技术采用了以下技术方案:一种检测CYP3A4基因多态性的试剂盒，包括检测用引物，所述检测用引物包括:CYP3A4基因第I~3外显子的长片段扩增特异性上下游引物、CYP3A4基因第4~7外显子的长片段扩增特异性上下游引物、CYP3A4基因第8~11外显子的长片段扩增特异性上下游引物和CYP3A4基因第12~13外显子的长片段扩增特异性上下游引物中的至少一对，以及与所述第I~3外显子的长片段DNA、第4~7外显子的长片段DNA、第8~11外显子的长片段DNA以及第12~13外显子的长片段DNA相对应的CYP3A4基因的各外显子的上下游测序引物中的至少一对，其中:所述CYP3A4基因第I~3外显子长片段扩增特异性上游引物序列如序列表中SEQID NO:1 所示；所述CYP3A4基因第I~3外显子长片段扩增特异性下游引物序列如序列表中SEQID NO:2 所示； 所述CYP3A4基因第4~7外显子长片段扩增特异性上游引物序列如序列表中SEQID NO:3 所示；所述CYP3A4基因第4~7外显子长片段扩增特异性下游引物序列如序列表中SEQID NO:4 所示；所述CYP3A4基因第8~11外显子长片段扩增特异性上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:5 所示；所述CYP3A4基因第8~11外显子长片段扩 增特异性下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:6 所示；所述CYP3A4基因第12~13外显子长片段扩增特异性上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:7 所示；所述CYP3A4基因第12~13外显子长片段扩增特异性下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:8 所示；所述CYP3A4基因第I外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ ID NO:9所示；所述CYP3A4基因第I外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ ID NO: 10所示；所述CYP3A4基因第2外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ ID NO: 11所示；所述CYP3A4基因第2外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ ID NO: 12所示；所述CYP3A4基因第3外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ ID NO: 13所示；所述CYP3A4基因第3外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ ID NO: 14所示；所述CYP3A4基因第4外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ ID NO: 15所示；所述CYP3A4基因第4外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ ID NO: 16所示；所述CYP3A4基因第5~6外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ IDNO: 17所示；所述CYP3A4基因第5~6外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ IDNO: 18所示；所述CYP3A4基因第7外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ ID NO: 19所示；所述CYP3A4基因第7外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ ID NO: 20所示；所述CYP3A4基因第8外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ ID NO: 21所示；所述CYP3A4基因第8外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ ID NO: 22所示；所述CYP3A4基因第9外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ ID NO: 23本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测CYP3A4基因多态性的试剂盒，包括检测用引物，其特征在于，所述检测用引物包括：CYP3A4基因第1～3外显子的长片段扩增特异性上下游引物、CYP3A4基因第4～7外显子的长片段扩增特异性上下游引物、CYP3A4基因第8～11外显子的长片段扩增特异性上下游引物和CYP3A4基因第12～13外显子的长片段扩增特异性上下游引物中的至少一对，以及与所述第1～3外显子的长片段DNA、第4～7外显子的长片段DNA、第8～11外显子的长片段DNA以及第12～13外显子的长片段DNA相对应的CYP3A4基因的各外显子的上下游测序引物中的至少一对，其中：所述CYP3A4基因第1～3外显子长片段扩增特异性上游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:1所示；所述CYP3A4基因第1～3外显子长片段扩增特异性下游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:2所示；所述CYP3A4基因第4～7外显子长片段扩增特异性上游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:3所示；所述CYP3A4基因第4～7外显子长片段扩增特异性下游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:4所示；所述CYP3A4基因第8～11外显子长片段扩增特异性上游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:5所示；所述CYP3A4基因第8～11外显子长片段扩增特异性下游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:6所示；所述CYP3A4基因第12～13外显子长片段扩增特异性上游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:7所示；所述CYP3A4基因第12～13外显子长片段扩增特异性下游引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:8所示；所述CYP3A4基因第1外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:9所示；所述CYP3A4基因第1外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:10所示；所述CYP3A4基因第2外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:11所示；所述CYP3A4基因第2外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:12所示；所述CYP3A4基因第3外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:13所示；所述CYP3A4基因第3外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:14所示；所述CYP3A4基因第4外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:15所示；所述CYP3A4基因第4外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:16所示；所述CYP3A4基因第5～6外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ?IDNO:17所示；所述CYP3A4基因第5～6外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ?IDNO:18所示；所述CYP3A4基因第7外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:19所示；所述CYP3A4基因第7外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:20所示；所述CYP3A4基因第8外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:21所示；所述CYP3A4基因第8外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:22所示；所述CYP3A4基因第9外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:23所示；所述CYP3A4基因第9外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ?ID?NO:24所示；所述CYP3A4基因第10外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ?IDNO:25所示；所述CYP3A4基因第10外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ?IDNO:26所示；所述CYP3A4基因第11外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ?IDNO:27所示；所述CYP3A4基因第11外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ?IDNO:28所示；所述CYP3A4基因第12外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ?IDNO:29所示；所述CYP3A4基因第12外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ?IDNO:30所示；所述CYP3A4基因第13外显子上游测序引物序列如序列表中SEQ?IDNO:31所示；所述CYP3A4基因第13外显子下游测序引物序列如序列表中SEQ?IDNO:32所示。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘辉，
申请(专利权)人：刘辉，
类型：发明
国别省市：
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