软骨细胞中的胶原蛋白和蛋白聚糖合成的促进方法技术

通过投与接种痘苗病毒的炎症组织提取物来促进软骨细胞如椎间盘细胞、关节软骨细胞和半月板细胞中的胶原蛋白和蛋白聚糖的合成。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】通过投与接种痘苗病毒的炎症组织提取物来促进软骨细胞如椎间盘细胞、关节软骨细胞和半月板细胞中的胶原蛋白和蛋白聚糖的合成。【专利说明】
本专利技术涉及接种痘苗病毒的炎症组织提取物的新医药用途，特别涉及软骨细胞如椎间盘(intervertebral disc cell)细胞、关节软骨细胞(articular chondrocyte)和半月板细胞(meniscus cell)中的胶原蛋白和蛋白聚糖合成的促进方法。
技术介绍
以商品名“神经妥乐平(Neurotropin) ”销售的药剂包含来自接种有痘苗病毒的兔的炎症皮肤的非蛋白提取物作为有效成分。在日本神经妥乐平(NTP)已广泛用于治疗神经病理性疼痛，包括疱疹后神经痛和腰痛。在动物模型中，NTP已显示出由于下行性单胺能疼痛抑制体系的活化引起的抗伤害性(ant1-nociceptive)效果。NTP还显示出通过抑制激肽释放酶-激肽(kallikrein-kinin)级联的活化，由此抑制舒缓激肽在体内和体外的形成来抑制疼痛路径。最近报道了 NTP对人椎间盘细胞的肿瘤坏死因子a (TNF- α )和环氧酶-2 (C0X-2)的mRNA表达的抑制效果。然而，不清楚NTP是否具有对椎间盘细胞的胞外基质(ECM)合成的效果。
技术实现思路
将接种痘苗病毒的炎症组织提取物用于促进软骨细胞如椎间盘细胞(牛髓核细胞(bovine nucleus pulposus cell)或纤维环细胞(annulus fibrosus cell))、关节软骨细胞和半月板细胞中的胶原蛋白和蛋白聚糖的合成。在本专利技术的方面，提供促进患者的软骨细胞中的蛋白聚糖和/或胶原蛋白合成的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者投与药物学有效量的接种痘苗病毒 的炎症组织提取物。在本专利技术的另一方面，提供再生软骨细胞的胞外基质的方法，所述方法包括向需要此类治疗的患者投与从接种有痘苗病毒的炎症组织分离的提取物。【专利附图】【附图说明】借助附图进一步说明本专利技术，其中:图1为接种痘苗病毒的炎症组织提取物对作为纤维环细胞(AF)的椎间盘细胞中蛋白聚糖合成的活性的实验结果。图2为接种痘苗病毒的炎症组织提取物对作为牛髓核细胞(NP)的椎间盘细胞中蛋白聚糖合成的活性的实验结果。图3为接种痘苗病毒的炎症组织提取物对作为纤维环细胞(AF)的椎间盘细胞中胶原蛋白合成的活性的实验结果。图4为接种痘苗病毒的炎症组织提取物对作为牛髓核细胞(NP)的椎间盘细胞中胶原蛋白合成的活性的实验结果。【具体实施方式】本专利技术以使用在常氧(normoxic)和低氧(hypoxic)状态下在海藻酸盐小球(bead)中培养的牛髓核细胞(NP)和纤维环细胞(AF)来评价NTP对蛋白聚糖(PG)和胶原蛋白合成的影响的结果为基础。关于本专利技术的接种痘苗病毒的炎症组织提取物，如之前所报道的存在针对在接种有痘苗病毒的炎症组织中产生的生理活性物质、从病变组织中提取该物质的方法和药物学活性等的各种报道(参见W02009/028605的段，EP2191836，日本专利申请公布号 JP-A-53-101515、JP-A-55-87724、JP-A-1-265028、JP-A-1-319422、JP-A-2-28119、 JP-A-7-97336、 JP-A-8-291077、 JP-A-10-194978、 JP-A-11-80005、JP-A-11-139977、JP-A-2000-336034、JP-A-2000-16942 和 JP-A-2004-300146，以及国际公布号 TO2004/039383)。此外，来自接种有痘苗病毒的兔的炎症皮肤的提取物的制剂作为药品是商购可得的，并可用于本专利技术。如“Drugs in Japan, Ethical Drugs”(2010,由日本医药情报中心(Japan Pharmaceutical Information Center)编辑发行)的 2978-2980 页所记载，该制剂为包含从接种有痘苗病毒的兔的炎症皮肤组织中提取分离的非蛋白活性物质的药剂。已知该制剂有效对抗腰痛，颈臂综合征，症状性神经痛，肩关节周围炎(periarthritisscapulohumeralis)，骨关节炎，伴随皮肤病(湿疹、皮炎、荨麻疹)的瘙痒，过敏性鼻炎，亚急性脊髓视神经炎(subacute myelo-optico-neuropathy)的后遗症如寒冷、感觉异常和疼痛，以及疱疹后神经痛等。批准该制剂作为皮下注射、肌肉注射和静脉注射产品的形式和片剂的形式的处方药，并且商购可得。用于本专利技术的接种痘苗病毒的炎症组织提取物为如上所述从接种有痘苗病毒的炎症组织中提取的非蛋白生物功能调节物质，而在“Drugs in Japan, Ethical Drugs”中列出的来自接种有痘苗病毒的兔的炎症皮肤的提取液制剂被批准为药品，并且商购可得。另外，在上述专利文献中记载的来自接种有痘苗病毒的炎症组织的各种提取物可用作本专利技术的物质，它们的生产方法和适当的剂量等也在文献中给出。可以如下方法获得本专利技术的接种痘苗病毒的炎症组织提取物:将接种有痘苗病毒的炎症组织压碎；添加提取溶剂来除去组织碎片；然后进行脱蛋白处理；将脱蛋白溶液吸附到吸附剂上；接着洗脱有效成分。例如根据下述方法生产接种痘苗病毒的炎症组织提取物。(a)收集接种有痘苗病毒的兔或小鼠等的炎症皮肤组织，并将炎症组织压碎。向压碎的组织添加提取溶剂如水、酹水(phenolated water)、生理盐水或添加有苯酹的甘油水(phenol-added glycerin water) 0然后，过滤或离心混合物，从而获得提取液(滤液或上清液)。(b)将提取液的pH调整为酸性状态，并加热液体来进行脱蛋白处理。然后，将脱蛋白溶液调整为碱性状态，加热，然后过滤或离心。(C)将所得滤液或上清液制成酸性，并吸附到吸附剂如活性炭或高岭土上。(d)向吸附剂添加提取溶剂如水，将pH调整为碱性状态，洗脱吸附组分，从而获得接种痘苗病毒的炎症组织提取物。随后，根据期望，可使洗脱液在减压下蒸发至干燥或冷冻干燥从而给出干物质。。关于为了通过接种痘苗病毒获得炎症组织的动物，可使用感染有痘苗病毒的各种动物如兔、牛、马、绵羊、山羊、猴、大鼠或小鼠，并且优选的炎症组织为兔的炎症皮肤组织。收集并压碎炎症组织，并添加1-5体积的提取溶剂，从而制备乳化悬液。关于提取溶剂，可使用蒸馏水、生理盐水和弱酸至弱碱性缓冲液等。可适当地添加稳定剂如甘油，抗菌/防腐剂如苯酚，以及盐类如氯化钠、氯化钾或氯化镁。此时，可通过借助处理如冻融、超声波、细胞膜溶解酶或表面活性剂来破坏细胞组织，从而促进提取。使所得乳化提取液进行过滤或离心等，从而除去组织碎片，然后进行脱蛋白处理。脱蛋白操作可通过通常已知的方法来进行，可应用例如热处理，借助蛋白变性剂如酸、碱、脲和胍的处理，借助有机溶剂如丙酮的处理，等电沉淀以及盐析。然后，通过除去不溶物的一般方法如使用滤纸(例如，纤维素或硝化纤维)、玻璃滤器、C盐(Celite)或蔡氏(Seitz)滤器等的过滤，超滤以及离心，来除去析出的不溶性蛋白质。将包含以该方式获得的有效成分的提取液酸化，优选用酸如盐酸、硫酸或氢溴酸将PH调为3.5-5.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：舛田浩一，内木充，
申请(专利权)人：日本脏器制药株式会社，加利福尼亚大学校董会，
类型：
国别省市：