一种猪印迹基因Grb10制造技术

本发明专利技术公开了一种猪印迹基因Grb10及其应用，属于分子遗传学领域。通过PCR、序列比较发现该猪Grb10基因第17外显子157位和215位碱基的SNP位点，进一步应用该位点鉴定Grb10基因的印迹状态。本发明专利技术所公开的猪印迹基因Grb10，丰富了猪印迹基因的数量，为探索印迹基因在不同物种间的保守性、调控机制以及在猪生长发育过程中的功能作用提供信息，可用于以猪作为动物模型研究人类Grb10基因异常疾病。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种猪印迹基因Grb10及其应用，属于分子遗传学领域。通过PCR、序列比较发现该猪Grb10基因第17外显子157位和215位碱基的SNP位点，进一步应用该位点鉴定Grb10基因的印迹状态。本专利技术所公开的猪印迹基因Grb10，丰富了猪印迹基因的数量，为探索印迹基因在不同物种间的保守性、调控机制以及在猪生长发育过程中的功能作用提供信息，可用于以猪作为动物模型研究人类Grb10基因异常疾病。【专利说明】—种猪印迹基因GrbIO
本专利技术涉及一种印迹基因及其应用，尤其涉及一种猪印迹基因GrblO及其应用，属于分子遗传学领域。
技术介绍
哺乳动物是二倍体生物，包含有两套染色体，一套来源于母本，一套来源于父本。哺乳动物的正常发育需要双亲基因组的正确表达。在哺乳动物中，多数基因是双等位基因表达的。然而，一部分基因的表达具有亲源特异性，只表达来源于母本或父本的等位基因，这类基因被称为印迹基因。将母源等位基因表达，父源等位基因不表达的基因，称为父源印迹基因；父源等位基因表达，母源等位基因不表达的基因，称为母源印迹基因。印迹基因存在于哺乳动物中，作为一类不遵循传统孟德尔遗传规律的特殊基因而存在，其功能体现在对胚胎生长发育、胎盘功能的调控以及出生后行为的影响上。印迹基因的异常表达还引起多种疾病，比如在克隆猪的生产中，主要表现为胚胎和胎盘过度生长及胎盘异常等，主要由于体细胞的表观重编程异常或印迹基因异常等所造成。对于印迹基因的研究，始终围绕着三个层次展开:印迹基因的筛选鉴定、印迹基因功能的探索、印迹基因表达调控机制的研究。到目前为止，在小鼠和人中发现的印迹基因数量超过150个，研究内容涵盖了包括基因功能、分子调控网络、印迹机制和疾病相关等方面。与对小鼠和人的研究相比较，印迹基因在猪中的研究仍集中于挖掘与鉴定阶段。主要包括了候选印迹基因的克隆，印迹状态的鉴定与不同组织器官的差异表达等方面。印迹基因的主要功能体现在对胚胎和胎盘的影响，印迹基因的异常表达，在人上会导致如生长过剩、侏儒症等各种生长发育方面的问题，在动物中则较明显的表现为流产率的提高、出生率的降低。本专利技术根据印迹基因在哺乳动物中具有较高保守性这一特征，利用生物信息学方法，将小鼠的印迹基因序列与猪的基因组数据进行序列比对分析，从而对猪印迹基因进行预测并筛选、鉴定，以此丰富猪印迹基因的数量，为探索印迹基因在不同物种间的保守性、调控机制以及在猪生长发育过程中的功能作用提供信息。GrblO位于小鼠11号染色体近端， 编码生长因子受体结合蛋白10，GrblO蛋白通过结合于胰岛素受体(insulin receptor, IR)和胰岛素样生长因子I受体(insulin-likegrowth factor I receptor, IGFIR)等调节受体酪氨酸激酶活性。GRBlO位于人7号染色体短臂上，这个区域包含多个印迹基因簇，并且与印迹基因异常引起的疾病-SRS有关，该疾病主要表现为出生前后生长迟缓及发育异常等。小鼠上，通过基因捕获技术获得的GrblO第2外显子至第4外显子敲除的小鼠，在出生前后均发生异常，表现为胎儿期胎体及胎盘过度生长；成年后身体组成发生改变，包括肌肉含量增加及脂肪含量减少等。父源GrblODMR的敲除导致小鼠出生前和出生后发生严重的生长阻滞。小鼠GrblO由18个外显子组成，翻译起始位点位于第3外显子内，于第18外显子翻译终止。其中，第5外显子在alpha亚型中存在，在beta亚型中缺失。人GRBlO由至少22个外显子组成。在小鼠和人中，GrblO存在组织特异性启动子及多种剪接亚型。而且，印迹状态也具有组织特异性。小鼠GrblO在多数组织中母源表达，在脑中父源表达；在人中，GRBlO在多数组织中双等位基因表达，在脑中父源表达，GRBlO Y I亚型在骨骼肌中母源表达。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种猪印迹基因GrblO，其cDNA序列为SEQ IDN0.1所示的核苷酸序列。所述GrblO在第17外显子的157位和215位碱基存在SNP位点；所述第17外显子的序列如序列SEQ ID N0.2所示。获得所述猪印迹基因GrblO的方法，主要包括以下步骤:(I)以猪胎儿成纤维细胞cDNA为模板，PCR扩增获得GrblO基因；所述PCR扩增引物为 cl-GrblO:5’ -CGATGTGATTGGCGGAAAG-3’(正向)和 5’ -GTAAACATAGCGGTTTTAATTGTCAAG-3’(反向)；(2)以猪耳组织DNA为模版，PCR扩增GrblO基因第17外显子，测序法寻找到在第17外显子157位和215位碱基处存在SNP位点；所述PCR扩增引物为dtD_GrblO:5，-GTCTTCTTCTGTCTCCCCAGTGC-3，(正向)和 5，-GTAAACATAGCGGTTTTAATTGTCAAG-3’(反向)。本专利技术的第二个目的是要提供猪印迹基因GrblO在指示猪的生长发育指标和以猪作为动物模型研究人类Slc22a3基因异常疾病与肿瘤发生中的应用，可用于区分父母源等位基因、鉴定印迹方向。以I月龄仔猪15种组织器官和胎盘cDNA为模板，dt-GrblO为引物，对于第17外显子处的SNP位点区域进行cDNA测序，确定其印迹方向，测序结果表明，GrblO基因在I月龄仔猪的舌、肾、卵巢、胃、小肠、膀胱和脑中父源等位基因表达，在其他组织器官中双等位基因表达；所述引物dt-GrblO的序列为5’ -CCAAAGGCATTTGTCCTCACAC-3’(正向)和5’ -GTCGGCACAGAACGAACGG-3’(反向)。以dt-GrblO为引物对I月龄仔猪15种组织器官和胎盘进行SYBR法荧光定量PCR，描述基因在各组织器官的表达模式。结果表明，GrblO在猪各组织器官中广泛表达，在肺组织中表达水平最高，在脑中表达水平最低。本专利技术所提供的猪GrblO基因是猪印迹基因，与猪生长发育指标相关，可用于研究猪的数量性状相关；同时以猪作为动物模型研究人类GRBlO基因异常疾病。本专利技术所提供的一种猪印迹基因GrblO， 丰富了猪印迹基因的数量，为探索印迹基因在不同物种间的保守性、调控机制以及在猪生长发育过程中的功能作用提供信息。【专利附图】【附图说明】图1GrblO基因克隆引物的PCR产物琼脂糖凝胶电泳图谱。图2GrblO基因外显子克隆引物的PCR产物琼脂糖凝胶电泳图谱；M =Maker ；1:dtD-GrblO 的 PCR 产物；2:dt-Grbl0 的 PCR 产物。图3GrblO_exonl7的第157位碱基PCR胶回收产物测序峰图；1:母本早NBBffl 100115的耳组织DNA第157位碱基测序峰图；2:父本(? 007062的耳组织DNA第157位碱基测序峰图；3:F1代仔猪早007003的耳组织DNA第157位碱基测序峰图；4:F1代仔猪(I 007004的耳组织DNA第157位碱基测序峰图；箭头指向SNP位点。图4GrblO_exonl7的第215位碱基PCR胶回收产物测序峰图；1:母本早NBBffl 100115的耳组织DNA第215位碱基测序峰图；2:父本c? 007062的耳组织DNA第215位碱基测序本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪印迹基因Slc22a18，其特征在于，其cDNA序列为SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孔庆然，尹智，刘忠华，周洋，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：