一种猪印迹基因Slc22a18制造技术

本发明专利技术公开了一种猪印迹基因Slc22a18及其应用，属于分子遗传学领域。通过PCR、序列比较发现该猪Slc22a18基因第4外显子79位碱基存在SNP位点，进一步应用该位点鉴定Slc22a18基因的印迹状态。本发明专利技术所公开的猪印迹基因Slc22a18，丰富了猪印迹基因的数量，为探索印迹基因在不同物种间的保守性、调控机制以及在猪生长发育过程中的功能作用提供信息，可用于以猪作为动物模型研究人类Slc22a18基因异常疾病。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种猪印迹基因Slc22a18及其应用，属于分子遗传学领域。通过PCR、序列比较发现该猪Slc22a18基因第4外显子79位碱基存在SNP位点，进一步应用该位点鉴定Slc22a18基因的印迹状态。本专利技术所公开的猪印迹基因Slc22a18，丰富了猪印迹基因的数量，为探索印迹基因在不同物种间的保守性、调控机制以及在猪生长发育过程中的功能作用提供信息，可用于以猪作为动物模型研究人类Slc22a18基因异常疾病。【专利说明】—种猪印迹基因Slc22a18
本专利技术涉及一种印迹基因，尤其涉及一种猪印迹基因Slc22al8及其应用，属于分子遗传学
。
技术介绍
哺乳动物是二倍体生物，包含有两套染色体，一套来源于母本，一套来源于父本。哺乳动物的正常发育需要双亲基因组的正确表达。在哺乳动物中，多数基因是双等位基因表达的。然而，一部分基因的表达具有亲源特异性，只表达来源于母本或父本的等位基因，这类基因被称为印迹基因。将母源等位基因表达，父源等位基因不表达的基因，称为父源印迹基因；父源等位基因表达，母源等位基因不表达的基因，称为母源印迹基因。印迹基因存在于哺乳动物中，作为一类不遵循传统孟德尔遗传规律的特殊基因而存在，其功能体现在对胚胎生长发育、胎盘功能的调控以及出生后行为的影响上。印迹基因的异常表达还引起多种疾病，比如在克隆猪的生产中，主要表现为胚胎和胎盘过度生长及胎盘异常等，主要由于体细胞的表观重编程异常或印迹基因异常等所造成。对于印迹基因的研究，始终围绕着三个层次展开:印迹基因的筛选鉴定、印迹基因功能的探索、印迹基因表达调控机制的研究。到目前为止，在小鼠和人中发现的印迹基因数量超过150个，研究内容涵盖了包括基因功能、分子调控网络、印迹机制和疾病相关等方面。与对小鼠和人的研究相比较，印迹基因在猪中的研究仍集中于挖掘与鉴定阶段。主要包括了候选印迹基因的克隆，印迹状态的鉴定与不同组织器官的差异表达等方面。印迹基因的主要功能体现在对胚胎和胎盘的影响，印迹基因的异常表达，在人上会导致如生长过剩、侏儒症等各种生长发育方面的问题，在动物中则较明显的表现为流产率的提高、出生率的降低。本专利技术根据印迹基因在哺乳动物中具有较高保守性这一特征，利用生物信息学方法，将小鼠的印迹基因序列与猪的基因组数据进行序列比对分析，从而对猪印迹基因进行预测并筛选、鉴定，以此丰富猪印迹基因的数量，为探索印迹基因在不同物种间的保守性、调控机制以及在猪生长发育过程中的功能作用提供信息。SLC22A18 (solute carrier family22, memberl8)，又称 TSSC5、BWR1A、0RCTL2 等，位于小鼠7号染色体末端和人类染色体11ρ15.5， 编码跨膜转运体相似蛋白，有十个跨膜区，影响药物敏感性，细胞代谢和生长。SLC22A18蛋白水平的调节可能是通过泛素化一蛋白酶体途径，SLC22A18是泛素化连接酶RING105的底物，与细胞周期调控相关。Slc22A18在小鼠和人类的肝，肾，肠，胚胎外膜和胎盘等组织器官中高表达。在小鼠胎儿和人类母源偏好表达，在小鼠的胎盘和TS细胞中母源等位基因表达。Slc22al8基因的异常还被认为与肿瘤有关。SLC22A18是成人肺的肿瘤抑制基因和胎儿肾印迹性肿瘤抑制基因。AzbreCht在肝母细胞瘤中有SLC22A18等位基因的丢失，肝癌中存在Slc22al8的印迹获得。同样，Schwienbache发现在人乳腺癌中亦存在Slc22al8基因印迹获得。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种猪印迹基因Slc22al8，其cDNA序列为SEQID N0.1所示的核苷酸序列。所述猪印迹基因Slc22al8在第4外显子的79位碱基存在SNP位点；所述第4外显子的序列如序列SEQ ID N0.2所示。 获得所述猪印迹基因的方法，主要包括以下步骤:(I)以猪胎儿成纤维细胞cDNA为模版，PCR扩增获得Slc22al8基因；所述PCR扩增引物为Slc22al8-基因克隆引物；(2)以猪耳组织DNA模版，分别PCR扩增Slc22al8基因第2、3、4、5外显子，测序法寻找到在第4外显子第79位碱基存在SNP位点；所述PCR扩增引物分别为:Slc22al8_exon2、Slc22al8_exon3、Slc22al8_exon4、Slc22al8_exon5。本专利技术的第二个目的是提供该猪印迹基因Slc22al8在以猪作为动物模型研究人类Slc22al8基因异常疾病与肿瘤发生及指示猪的生长发育中的应用，可用于区分父母源等位基因、鉴定印迹方向。以I月龄仔猪15种组织器官和45d胎盘的cDNA为模板，以Slc22al8_表达检测引物为引物，对于第4外显子79位碱基的SNP位点进行cDNA测序，确定其印迹方向，结果表明，Slc22al8基因在I月龄仔猪各组织器官中均双等位基因表达，在45d胎盘中是印迹的、母源等位基因表达。以Slc22al8_realtime引物为引物对I月龄仔猪15种组织器官和胎盘进行SYBR法荧光定量PCR，描述基因在各组织器官的表达模式；结果表明，Slc22a3在猪各组织器官中广泛表达，其中在肝、肾、小肠中的表达水平显著高于其他各组织器官。本专利技术所提供的猪印迹基因Slc22al8，丰富了猪印迹基因的数量，为探索印迹基因在不同物种间的保守性、调控机制以及在猪生长发育过程中的功能作用提供信息。同时可应用于以猪作为动物模型研究人类Slc22al8基因异常疾病与肿瘤发生，区分父母源等位基因、鉴定印迹方向。【专利附图】【附图说明】图lSlc22al8基因克隆引物的PCR产物琼脂糖凝胶电泳图谱。图2Slc22al8基因测序结果与NCBI序列比对。图3Slc22al8外显子基因克隆引物的PCR产物琼脂糖凝胶电泳图谱。图4Slc22al8_exon4第79位碱基PCR胶回收产物测序峰图；1:父本c? 021023的耳组织DNA测序峰图；2:母本早NBBffllOOllO的耳组织DNA测序峰图；3:F1代仔猪c? 021026的耳组织DNA测序峰图；4:父本3 021002的耳组织DNA测序峰图；5:母本早NBBWl 100114的耳组织DNA测序峰图；6:F1代仔猪早021035的耳组织DNA测序峰图。图5猪Slc22al8基因印迹表达状态峰图；1月龄仔猪15种组织器官和胎盘的测序峰图，I~16分别为:肌肉、脂肪、舌、肝、肺、心、肾、卵巢、子宫、睾丸、脾、胃、小肠、膀胱、脑、胎盘；箭头指向SNP位点。图6猪Slc22al8在各组织器官的相对表达水平。【具体实施方式】在本专利技术中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体的制备实施例和应用实施例，并参照数据进一步详细地描述本专利技术。应理解，这些实施例只是为了举例说明本专利技术，而非以任何方式限制本专利技术的范围。在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。实验动物选自东北农业大学大动物实验基地，用于SNP位点检测的猪包括大白猪5头、长白猪10头、丛江猪4头和巴马猪17头，选取耳组织用于DNA提取。Fl代I月龄杂合仔猪3头，屠宰选取组织器官，_80°C冰箱保存。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪印迹基因Slc22a18，其特征在于，其cDNA序列为SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孔庆然，尹智，刘忠华，周洋，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：