包括至少一个点突变的突变TSHR制品，其中，在所述制品中，至少相应于全长人TSHR第255氨基酸位点的Arg突变为另一个氨基酸残基，从而所述制品能够区分性地与患者血清刺激性TSHR自身抗体、患者血清阻断性TSHR自身抗体和TSH相互作用。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】包括至少一个点突变的突变TSHR制品，其中，在所述制品中，至少相应于全长人TSHR第255氨基酸位点的Arg突变为另一个氨基酸残基，从而所述制品能够区分性地与患者血清刺激性TSHR自身抗体、患者血清阻断性TSHR自身抗体和TSH相互作用。【专利说明】促甲状腺激素受体制品、其结合区、其与抗体和激素的相互作用、及其应用本申请为申请号为200580027629.4，申请日为2005年8月3日，专利技术名称为“促甲状腺激素受体制品、其结合区、其与抗体和激素的相互作用、及其应用”的分案申请。本专利技术涉及促甲状腺激素受体(TSHR)的制品，尤其是突变的TSHR制品、抗体和激素与其的相互作用、及其应用、提供所述制品的方法、由此识别TSHR抗体的表位区域和结合位点、及其复合体。促甲状腺激素或甲状腺刺激激素(TSH)是一种垂体激素，对调节甲状腺功能起关键作用。它的释放是受到在视丘下部形成的TRH的刺激并控制重要的甲状腺激素，甲状腺素(T4)和三碘化甲腺氨酸(T3)的形成和释放。基于反馈机制，血清甲状腺激素含量控制TSH的释放。通过由垂体释放的TSH结合到甲状腺细胞膜上的TSHR，刺激甲状腺细胞产生T3 和 T4。我们最近还在PCT专利申请W02004/050708A2中描述了针对TSHR的人单克隆抗体，其为很有效的TSHR的甲状腺刺激物。在该申请中未公开所述单克隆抗体(hMAb TSHRl)在TSHR上的结合位点，但可以认为该结合位点或袋状结构域是构象的，并涉及折叠到一起的受体不连续区域。对于针对TSHR的人单克隆抗体或重组抗体，如hMAb TSHR1，TSHR上的结合位点或表位区域的识别，或者基本的结合氨基酸残基或其序列，会是理解TSHR结构以及其与人抗体相互作用的关键因素，并且能够改良自身抗体群的分析方法和其后的与对TSHR的自身免疫反应相关的甲状腺疾病的治疗。本领域已经有大量资料说明，各种类型的抗TSHR的自身抗体可以在与抗TSHR自身免疫相关的疾病的过程中形成。根据这些自身抗体的类型而定，或者对T3和T4的形成和释放的抑制可以由于TSH分子对TSHR的保护而发生，或者从另一个角度来说，由于抗TSHR自身抗体模仿TSH的作用刺激甲状腺激素的合成和释放，这些甲状腺激素可以不受控制的形式被释放。自身免疫性甲状腺疾病(AITD)是最常见的自身免疫疾病，影响着世界上不同的人群。有一部分AITD患者，主要是那些患Graves病的患者，具有基本上与如前所述的抗TSHR—样的自身抗体。该自身抗体结合到TSHR，通常模仿TSH的作用，刺激甲状腺产生高水平的甲状腺激素。这些自身抗体被描述成具有刺激活性。刺激性自身抗体也与TSHRs在眼组织相互作用，引起Graves病至少在眼部的某些症状。在有些患者中，自身抗体结合到TSHR但并不刺激甲状腺激素的形成，因而被描述为具有阻断作用(J Sanders, Y Oda, S-A测定TSHR自身抗体对诊断和治疗AITD很重要，尤其是Graves病。现有三种类型测定TSHR自身抗体的方法:(a)竞争性结合方法，测定TSHR自身抗体抑制TSH结合到TSHR制品的能力；(b)生物鉴定法，测定TSHR自身抗体在培养物中刺激细胞表达TSHR的能力；和 (c)利用TSHR自身抗体免疫沉淀TSHR制品。利用这些方法测定TSHR自身抗体在以下参考物中已有描述，J Sanders, YOda,S-A Roberts,M Maruyama,J Furmaniak,B Rees Smith Understanding thethyrotropin receptor function-structure relationship;Bailliere's ClinicalEndocrinology and Metabolism.Ed;T F Daviesl99711 (3):451-479.Pub.BailliereTindall, London;and J Sanders, Y Oda, S Roberts, A Kiddie, T Richards, J Bolton,VMcGrath, S Walters, D Jasklski, J Furmaniak, B Rees Smith〃The interactionof TSHR autoantibodies with〈125>I_labelled TSHR", Journal of ClinicalEndocrinology and Metabolisml99984(10):3797-3802。然而，在使用以上所述目前测定TSHR自身抗体的方法时有很多局限性。类型(a)的竞争性方法以不同的方式使用起来一般来说是灵敏的，作为日常工作相对容易操作。但是，至今所熟知的测定TSHR自身抗体的竞争性的放射性受体分析在实用性(由于TSHR制品的结合能力一般对受体或通过它而结合的生物分子的变化非常敏感)上有根本的缺陷并且也不允许针对自身抗体群进行鉴别诊断(例如，像以上所述的刺激或阻断自身抗体的区别)。类型(b)的生物鉴定法，费用高、耗时，还需要技术很熟练的技术员。至于类型(C)的直接免疫沉淀法，具有在实际应用中很敏感这一问题，而且目前还不可能对自身抗体群实现鉴别诊断。从以上所述可以理解，本领域需要提供改进的TSHR自身抗体测定的方法，并且具有例如能够区分与TSHR自身免疫相关的刺激性和阻断性自身抗体的优势。关于这一点，W001/27634公开了一种测定方法，用于对TSHR自身抗体进行鉴别诊断确定，从而刺激性TSHR自身抗体、阻断性TSHR自身抗体和非病原性TSHR自身抗体(既不是刺激也不是阻断)在一个样品中可以理论上由选择地确定。TSHR嵌合体被使用，其中用来结合刺激性和/或阻断性TSHR自身抗体的TSHR序列被受体G蛋白偶联类的不同受体的序列替换。并且还公开了在反应混和物中可溶性野生型重组体TSHR，如果需要的话。可以看出，嵌合体A代表TSHR嵌合体，其中TSHR第8-165位的氨基酸被促黄体素/绒膜促性腺激素受体的第10-166的氨基酸替换；嵌合体B代表TSHR嵌合体，其中TSHR第261-370的氨基酸被促黄体素/绒膜促性腺激素受体的第261-329的氨基酸替换；嵌合体C代表TSHR嵌合体，其中TSHR第8-165和261-370的氨基酸被促黄体素/绒膜促性腺激素受体的第10-166和261-370的氨基酸分别替换。W001/63296相似地公开了一种进行鉴别诊断确定不同TSHR自身抗体的方法，从而刺激性TSHR自身抗体、阻断性TSHR自身抗体和非病原性TSHR`自身抗体在一个样品中又可以理论上由选择地确定。另一种至少结合被筛选的自身抗体的结合试剂(如野生型重组体TSHR)，在过量的被选择的TSHR嵌合体存在下与一个样品反应，其中，对阻断性或刺激性自身抗体是必须的TSHR结合序列被未结合到被筛选的不同类型的自身抗体的序列替换。在TO01/63296公开的TSHR嵌合体与以上W001/27634所述的嵌合体是相对应的。以上TO01/27634 和 TO01/63296 中所公开的技术在 Journal of Endocrinology&M本文档来自技高网...
【技术保护点】
突变的TSHR制品，所述制品包括至少一个点突变，其特征在于，在所述突变的TSHR制品中，至少是相应于全长人TSHR第255氨基酸位点的氨基酸Arg突变为带负电荷的氨基酸残基，从而所述突变的TSHR制品区分性地与患者血清刺激性TSHR自身抗体、患者血清阻断性TSHR自身抗体和TSH相互作用，因为（i）和与对照TSHR制品相互作用的患者血清刺激性TSHR自身抗体相比较，与突变的TSHR制品相互作用的患者血清刺激性TSHR自身抗体的刺激效果被降低或消除，所述对照TSHR制品的氨基酸序列相应于突变的TSHR制品的序列，但其不存在相应于全长人TSHR第255氨基酸位点的Arg的所述突变；（ii）与和对照TSHR制品相互作用的TSH相比较，与突变的TSHR制品相互作用时TSH的刺激效果没有受到影响；和（iii）与和所述对照TSHR制品相互作用的患者血清阻断性TSHR自身抗体相比较，与突变的TSHR制品相互作用的患者血清阻断性TSHR自身抗体的阻断效果没有受到影响或增加，从而所述突变的TSHR制品可有效差别筛选和识别待筛选的体液样品中的患者血清刺激性TSHR自身抗体、患者血清阻断性TSHR自身抗体和TSH。...
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：伯纳德·里斯·史密斯，雅德维加·富尔马尼亚克，简·桑德斯，
申请(专利权)人：RSR有限公司，
类型：发明
国别省市：
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