本发明专利技术是一种铁线莲栽培品种“奶油”的组织培养方法，包括如下步骤：1）外植体消毒处理；2）芽诱导和芽增殖，包括①诱导培养；②不定芽增殖培养；③壮苗培养；④生根培养；⑤炼苗和移栽。本发明专利技术的有益效果：应用组织培养方法，能较好地保持母本的观赏价值，有效地提高铁线莲“奶油”的繁殖系数；与扦插繁殖相比，生长周期大幅缩短，组织培养法的繁殖系数为扦插繁殖的50~60倍；快速繁殖、品种优质、产量可观和便于实地推广。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术是一种铁线莲栽培品种“奶油”的组织培养方法，包括如下步骤：1）外植体消毒处理；2）芽诱导和芽增殖，包括①诱导培养；②不定芽增殖培养；③壮苗培养；④生根培养；⑤炼苗和移栽。本专利技术的有益效果：应用组织培养方法，能较好地保持母本的观赏价值，有效地提高铁线莲“奶油”的繁殖系数；与扦插繁殖相比，生长周期大幅缩短，组织培养法的繁殖系数为扦插繁殖的50~60倍；快速繁殖、品种优质、产量可观和便于实地推广。【专利说明】
本专利技术涉及的是一种铁线莲“奶油”(英文商品名为:Clematis ‘GuernseyCream’ )的组织培养方法，属于植物组织培养
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技术介绍
铁线莲属(Clematis L.)隶属于毛茛科(Ranunculaceae)毛茛亚科(Subfam.Ranunculoideae)银莲花族(Trib.Anemoneae)铁线莲亚族(Subtrib.Clematidinae),常为多年生木质藤本。世界约有355种，我国有147种，其中93种为我国特有种，特有率为63.3%。其萼片花瓣状，色彩丰富，形态多变，茎蔓生，利用叶柄攀援，生长适应性强，园艺用途广泛，观赏价值高，在垂直绿化中具有重要地位，享有“攀援植物皇后”之美称。在日本和西方园林中，铁线莲已占有十分重要的地位，大部分植物园、公园和家庭花园都能见到它们绚丽多彩的身影。此外，该属植物中的许多种如女萎{Clematis)、威灵仙(Cchinensis)等作为药用植物使用已久。其种子较难发芽，多用扦插繁殖。采取组织培养法进行铁线莲“奶油”(英文商品名为:Clematis ‘Guernsey Cream’)的快速繁殖,建立丛生芽生根的无性繁殖体系，有利于增大繁殖系数，对于铁线莲“奶油”走向园艺应用具有较强的生产应用价值。·
技术实现思路
本专利技术提出的是一种铁线莲“奶油”的组织培养方法，其目的是克服铁线莲“奶油”现有繁殖技术存在的缺陷，提高其繁殖系数以适应其引种推广及园林应用的需求。本专利技术的技术解决方案:一种铁线莲栽培品种Clematis ‘Proteus’的组织培养方法，其特征是包括如下步骤: 1)外植体消毒处理； 2)芽诱导和芽增殖。所述的步骤I)外植体消毒处理，具体包括: 取铁线莲“奶油”当年生的幼嫩茎节和顶芽，依次用自来水冲洗I h，毛笔来回刷洗20次，于超净工作台上用质量浓度为75%乙醇灭菌20 S，无菌水冲洗2次，之后用质量浓度为0.1%氯化汞灭菌7 min，立即用无菌水冲洗4次。用灭菌滤纸吸干外植体表面水分，切除叶柄和两端受伤部位。实验统计的污染率分别为70%、64%，褐化率为25%、22%。所述的步骤2)芽诱导和芽增殖，具体包括: ①诱导培养 将芽接种于已灭菌的诱导培养基1/2 MS+生长调节物质NAA 0.5 mg/L+生长调节物质TDZ 1.0 mg/L+质量浓度为3%的蔗糖2(T30 g/L +质量浓度为0.7%的琼脂7 g/L，pH值为5.8，培养4周。培养温度25°C，光照16 h/d，照度2400 Ix ； ②不定芽增殖培养将诱导的丛生芽分成单芽，继而将单芽接入1/2 MS+生长调节物质6-BA 0.2 mg/L +生长调节物质ΚΤ0.5 mg/L+生长调节物质NAA 0.05 mg/L+质量浓度为3%的蔗糖2(T30 g/L+质量浓度为0.7%的琼脂7 g/L的培养基，pH值为5.8，培养4周。温度、光照条件同①丛生芽诱导； ③壮苗培养 将增殖培养基中叶色浓绿、长度为广2 cm的不定芽逐个切下，接入MS基本培养基中培养4星期，光照条件同①丛生芽诱导； ④生根培养 将壮苗培养后长势旺盛的芽接入生根培养基1/2 MS+生长调节物质IBA 0.5 mg/L中，培养40天。温度、光照条件同①丛生芽诱导； ⑤炼苗和移栽 将生根的铁线莲“奶油”植株的培养瓶瓶盖打开，温室下炼苗6 d后，取出试管苗，洗净，移栽到准备好的珍珠岩:蛭石:泥炭(1:1:1)的营养钵中，保持湿度85%-95%，温度、光照条件同(2)丛生芽诱导，成活率达95%。本专利技术的有益效果:应用组织培养方法，能较好地保持母本的观赏价值，有效地提高铁线莲“奶油”的繁殖系数。与扦插繁殖相比，生长周期大幅缩短，组织培养法的繁殖系数为扦插繁殖的50-60倍。快速繁殖、品种优质、产量可观和便于实地推广。【具体实施方式】实施例一种铁线莲栽培品种‘Proteus’的组织培养方法,其培养步骤如下: 步骤一、外植体消毒处理 选取当年生幼嫩茎节和顶芽，依次进行冲洗1.5 h，于超净工作台上用75%乙醇灭菌20 s,用无菌水冲洗2次,之后用0.1%升萊灭菌7 min,立即用无菌水冲洗3_4次。步骤二、芽诱导和芽增殖 ①诱导培养 冲洗后将外植体置于培养皿中，用剪刀、镊子切除叶柄、两端受伤部位后，将芽接种于已灭菌的诱导培养基1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L上5周，质量浓度为3%的蔗糖2(T30 g/L,质量浓度为0.7%的琼脂7 g/L, pH 5.7，培养温度25°C ;光照条件:光照/黑暗，其中光照16 h/d，光照度为2400 Ix0②不定芽增殖培养 将诱导培养基中诱导出的丛生芽分成单芽，接入1/2 MS+生长调节物质6-BA 0.2 mg/L+生长调节物质KT 0.5 mg/L+生长调节物质NAA 0.05 mg/L增殖培养基中培养4周光照条件同①诱导培养。③壮苗培养 将增殖培养基中叶色浓绿、长度为2 cm左右的不定芽逐个切下，接入MS基本培养基中培养25天，光照条件同①诱导培养。④生根培养将壮苗培养后长势旺盛的芽切去茎基部褐色物质后接入生根培养基1/2 MS+生长调节物质IBA 0.5 mg/L,培养6周后生根,光照条件同①诱导培养。⑤炼苗和移栽 将生根植株的培养瓶瓶盖打开，室温下炼苗6 d后，取出试管苗，洗净，移栽到准备好的珍珠岩、蛭石、泥炭，其重量比为珍珠岩:蛭石:泥炭=1:1:1苗床上，保持温度20-251:，湿度85%-95%，适当遮荫，成活率达90%。所述的MS基本培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成分所组成。所述的大量元素为:硝酸钾KNO3,1900 mg.Λ硝酸铵NH4NO3,1650 mg1,磷酸二氢钾 KH2PO4,170 mg.1，硫酸镁 MgSO4.7 H2O, 370 mg.1，氯化钙 CaCl2.4 H20,440mg.L 1 ο所述的微量元素为:碘化钾KI, 0.83 mg.L-1,硼酸H3BO3 , 6.2 mg七1,或硫酸猛MnS04.4 H2O, 22.3 mg.1 或硫酸锌 ZnSO4.7 H20,8.6 mg.1 或钥酸钠 Na2MoO4.2 H2O,0.25 mg.L' 硫酸铜 CuSO4.5 H2O, 0.025 mg.L' 氯化钴 CoCl2.6 H2O, 0.025 mg.L'所述的铁盐为:乙二胺二乙酸二钠Na2.EDTA，37.3 mg.L—1，硫酸亚铁FeSO4.7H2O, 27.8 mg.L 1O所述的有机成分为:肌醇C6H12O6.2H20,100 mg.L-1，甘氨酸 NH2CH2COOH, 2mg.L—1，盐酸硫胺素 C本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种铁线莲栽培品种Clematis?‘Proteus’的组织培养方法，其特征是包括如下步骤：1）外植体消毒处理；2）芽诱导和芽增殖。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：方炎明，程莹，刘畅，王磊，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：
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