一种犊牛腹泻病中鉴定非典型性大肠杆菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种犊牛腹泻病中鉴定非典型性大肠杆菌的方法，步骤包括：犊牛发生腹泻后病料的采集与标记；细菌的增菌，细菌的鉴定和选择性特殊培养基培养，菌体的处理；设计两对诊断性引物eaeA，P1：5’-CTGAACGGCGATTACGCGAA-3’，P2：5’-CCAGACGATACGATCCAG-3’，预期扩增出的目的片段大小，bfpA基因P1：5’-TGTATATTGGGCAGACC-3’，P2：5’-CAGGGCGTATTATGTAGA-3’，预期扩增出的目的片段大小；PCR扩增反应；记录革兰氏染色镜检结果，大肠杆菌在麦康凯琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板生长结果，毒力基因eaeAPCR结果；将eaeA所测序列与GeneBank中的序列进行比对，对eae序列进行分析，对核苷酸序列分析；将蛋白序列在NCBI中进行比对，得到该蛋白的结构域。本发明专利技术结合传统大肠杆菌的选择性特殊培养对样品进行初步纯化，获得单菌落，可提高PCR检测的准确性，可行性强。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，步骤包括：犊牛发生腹泻后病料的采集与标记；细菌的增菌，细菌的鉴定和选择性特殊培养基培养，菌体的处理；设计两对诊断性引物eaeA，P1：5’-CTGAACGGCGATTACGCGAA-3’，P2：5’-CCAGACGATACGATCCAG-3’，预期扩增出的目的片段大小，bfpA基因P1：5’-TGTATATTGGGCAGACC-3’，P2：5’-CAGGGCGTATTATGTAGA-3’，预期扩增出的目的片段大小；PCR扩增反应；记录革兰氏染色镜检结果，大肠杆菌在麦康凯琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板生长结果，毒力基因eaeAPCR结果；将eaeA所测序列与GeneBank中的序列进行比对，对eae序列进行分析，对核苷酸序列分析；将蛋白序列在NCBI中进行比对，得到该蛋白的结构域。本专利技术结合传统大肠杆菌的选择性特殊培养对样品进行初步纯化，获得单菌落，可提高PCR检测的准确性，可行性强。【专利说明】
本专利技术属于犊牛腹泻病病因领域，尤其涉及。
技术介绍
大肠埃希菌是一种重要的危害严重的肠道致病菌，它是一组革兰氏阴性菌，是人和动物肠道的正常菌群，多数本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种犊牛腹泻病中鉴定非典型性大肠杆菌的方法，其特征在于，该犊牛腹泻病中鉴定非典型性大肠杆菌的方法包括以下步骤：步骤一、犊牛发生腹泻后病料的采集与标记；步骤二、细菌的增菌，细菌的鉴定和选择性特殊培养基培养，菌体的处理；步骤三、设计两对诊断性引物eaeA，P1：5’?CTGAACGGCGATTACGCGAA?3’；P2：5’?CCAGACGATACGATCCAG?3’，预期扩增出的目的片段大小；bfpA基因，P1：5’?TGTATATTGGGCAGACC?3’；P2：5’?CAGGGCGTATTATGTAGA?3’，预期扩增出的目的片段大小；步骤四、PCR扩增反应；步骤五、记录革兰氏染色镜检结果，...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：喻华英，石长青，焦海宏，任敏，
申请(专利权)人：塔里木大学，
类型：发明
国别省市：