一种恒河猴糖尿病肾病模型的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种恒河猴糖尿病肾病模型的制备方法，包括如下步骤：（1）将剂量为80～100mg/kg的链脲菌素施用于恒河猴；（2）血糖浓度升至11.1mmol/l后，餐前施用胰岛素，使恒河猴血糖浓度为10-20mmol/L。本发明专利技术在糖尿病恒河猴的基础上，采用血糖控制的方式，成功地诱导恒河猴糖尿病肾病模型。

【技术实现步骤摘要】
一种恒河猴糖尿病肾病模型的制备方法
本专利技术涉及恒河猴糖尿病肾病模型的制备方法。
技术介绍
糖尿病（DiabetesMellitus，DM）的发病率呈快速增长的趋势。据报道我国现约有9200万DM和1.48亿DM前期患者，成为继美国之后的第二个糖尿病发病大国。随着病情的逐渐发展加重，这些患者中约有30-40%的1型糖尿病患者和约20%的2型糖尿病患者伴随严重的肾功能损害——糖尿病肾病（DiabeticNephropathy，DN）。DN是糖尿病患者最严重的慢性并发症之一，也是糖尿病患者最主要的死亡原因。一旦DN患者出现了显著的临床症状，此时可选择的药物较少，且药物的治疗效果较差，病情往往呈进行性发展直至末期肾衰，给患者家庭和社会带来巨大的经济负担。因此深入研究DN的发病机制及早期诊断方法，在此基础上探索延缓或逆转疾病进程的有效措施，是目前医学研究的热点和难点问题。动物模型是研究人类重大疾病的基础，建立与人类高度近似的DN动物模型，将会在研究其发病机理、早期诊断和干预治疗等方面取得事半功倍的效果。非人灵长类动物作为人类的近亲，在遗传基因方面约96%以上同源，其形态结构、生理机能和生化代谢均同人类非常相似，建立一种非人灵长类动物DN模型对研究DN的发生发展、早期诊断和新药研发等具有重要的科学意义和经济价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供恒河猴糖尿病肾病模型的制备方法。本专利技术恒河猴糖尿病肾病模型的制备方法，包括如下步骤：（1）将剂量为80～100mg/kg的链脲菌素施用于恒河猴；（2）血糖浓度升至11.1mmol/l后，餐前施用胰岛素，使恒河猴血糖浓度为10-20mmol/L。本专利技术恒河猴糖尿病肾病模型的制备方法，包括如下步骤：（1）将剂量为80～100mg/kg的链脲菌素施用于恒河猴；（2）血糖浓度升高至11.1mmol/l后，饲喂高脂饲料，每天饲喂2次，饲喂量为0.3-0.4kg/次·只，并在餐前施用胰岛素，使恒河猴血糖浓度为10-20mmol/L，所述饲料包含如下重量配比的原料：标准猴饲料78份、动物油脂15份、糖5份、胆固醇2份。标准猴饲料，是指《中华人名共和国国家标准GB14924.8-2001》规定的猴配合饲料。动物油脂，是指来源于动物的脂肪，如:牛油、羊油、猪油。步骤（1）中，所述的施用方式是静脉注射。步骤（2）中，所述的施用方式是皮下注射。步骤（2）中，所述动物油脂是猪油；所述糖是蔗糖。本专利技术恒河猴糖尿病肾病模型的高脂饲料，它包含如下重量配比的原料：标准猴饲料78份、动物油脂15份、糖5份、胆固醇2份。所述动物油脂是猪油；所述糖是蔗糖。本专利技术前述方法制备的动物模型在筛选治疗恒河猴糖尿病肾病的药物中的用途。本专利技术筛选治疗恒河猴糖尿病肾病模型的药物的方法，它包括如下步骤：a、按照前述方法，建立恒河猴糖尿病肾病模型；b、将候选药物施用于动物模型；c、用动物模型评价潜在的治疗恒河猴糖尿病肾病的药物。本专利技术造模方法可以诱导恒河猴出现肾脏损伤、微量蛋白尿等糖尿病肾病的临床症状，给药方法简单，可重复性强。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1血糖控制情况；图2肾功能检测结果；图3致纤维化基因改变情况；图4肾血流动力学参数和血流灌注系数；图5肾脏B超检查的血流分布和频谱；图6肾组织病理改变；图7肾组织免疫荧光。具体实施方式实施例1本专利技术恒河猴糖尿病肾病征模型的制备1实验材料和仪器1.1供试品基本信息IL-1β抗体：abcamTNF-a抗体：abcamTGF-β1抗体:BioworldCTGF抗体：abcamCollagenIV抗体:abcamFibronection抗体:BioworldMCP-1抗体:ebioscienceCD68(KP1)抗体:abcameNOS抗体:abcam动物组织总RNA提取试剂盒：天根iScriptTMcDNA合成试剂盒：BIO-RADiQTMGreenSupermix：BIO-RAD1.2试验所需主要仪器、器械血糖检测仪：罗康全活力型血糖检测仪，罗康全活力型血糖试纸全自动血液生化分析仪（瑞士RocheCOBASIntegra400Plus，编号MEB-02-01）BIO-RADCFX96荧光定量PCR仪BIO-RADS200PCR仪LEICADM4000B荧光显微镜OlympusBX51光学显微镜穿刺针，穿刺枪：BARD彩超;Iu22philips眼底荧光造影：TopconTRC.50DX（日本拓普康公司生产）1.3实验动物1.3.1实验系统恒河猴14只，体重3.5～5.5kg，拟由四川成都平安动物繁育研究基地（生产许可证号：SCXK(川)2004－013）引进。入室前一周进行结核菌素、寄生虫、沙门氏菌、致贺氏菌检查。1.4动物饲养管理1.4.1检疫/环境适应入室恒河猴试验前先适应环境并检疫一周，选择健康雄性动物作为受试动物，检疫内容：是否与订购时要求的质量指标一致；体温、摄食量、血生化、电解质；动物一般状态；动物体重是否达到试验要求体重的范围。1.4.2动物饲养恒河猴饲养于国家成都中药安全性评价中心普通动物房（实验动物房使用许可证号：SYXK（川）2003－030）、恒河猴每只用不锈钢鼠笼分笼饲养，饲养条件符合国标GB14925-2001，室温21±5℃（日温差≤4°C），相对湿度55±15％，12小时明暗交替，换气次数8～10次/小时。1.4.3动物标识方法恒河猴由胸牌及笼上标签共同标记1.5实验分组分组包括正常组（3只）,实验组A（STZ糖尿病造模后，通过每天餐前15分钟皮下注射胰岛素，控制血糖<10mmol/l，3只），实验组B（STZ糖尿病造模后，通过每天餐前15分钟皮下注射胰岛素，控制血糖于10-20mmol/l，5只），实验组C（STZ糖尿病造模后，通过每天餐前15分钟皮下注射胰岛素，控制血糖于10-20mmol/l，并饲喂高脂饲料，3只）。饲料配方：实验组A、B：猴标准猴饲料——商业化的猴颗粒饲料（购自四川省医学科学院动物研究所，配方与《中华人名共和国国家标准GB14924.8-2001》规定的猴配合饲料相同）。实验组C：高脂饲料：15%精炼猪油（市售），5%蔗糖（市售），2%胆固醇（市售），78%猴标准猴饲料。饲喂方式：每天饲喂2次，饲喂量为0.3-0.4kg/次·只。2实验方法2.1动物一般状况观察观察动物外观体征（包括动物的毛发、眼和粘膜）、行为活动、精神状况、腺体分泌、呼吸、饮食、排泄物、注射局部等情况，检测动物体重、血压及摄食量。2.2造模方法实验组A、B：给药前动物禁食禁饮12h以上，静脉输注生理盐水100ml扩容后，再推注配制好的STZ(80mg/kg)；给予常规猴饲料喂养，每天饲喂2次，饲喂量为0.3-0.4kg/次·只；检测动物空腹血糖（FBG），FBG连续2天高于11.1mmol/l后，通过每天餐前15分钟皮下注射胰岛素，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种恒河猴糖尿病肾病模型的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）将剂量为80～100mg/kg的链脲菌素施用于恒河猴；（2）血糖浓度升至11.1mmol/l后，餐前施用胰岛素，使恒河猴血糖浓度为10?20mmol/L。

【技术特征摘要】
1.一种恒河猴糖尿病肾病模型的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）将剂量为80mg/Kg的链脲菌素施用于恒河猴；（2）空腹血糖浓度连续2天高于11.1mmol/l后，餐前施用胰岛素，使恒河猴血糖浓度为10-20mmol/L。2.一种恒河猴糖尿病肾病模型的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）将剂量为80mg/Kg的链脲菌素施用于恒河猴；（2）空腹血糖浓度连续2天高于11.1mmol/l后，饲喂高脂饲料，每天饲喂2次，饲喂量为0.3-0.4kg/次·只，并在餐前施用胰岛素，使恒河猴血糖浓度为10-20mmol/L，所述高脂饲料包含如下重量配比的原料：猴配合饲料78份、动物油脂15份、糖5份...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆燕蓉，程惊秋，陈又南，刘敬平，刘芳，杨立川，王莉，李宏霞，张杰，王丹，何斯荣，王成世，史梅梅，袁玉佳，赵久茗，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，四川康城生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：