一种可防治猪支原体肺炎的干细胞制剂的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种可防治猪支原体肺炎的干细胞制剂的制备方法，从初生猪腿骨骨髓中分离猪骨髓间充质干细胞；分离猪骨髓间充质干细胞的亚型细胞BMSC-S3细胞系；建立稳定转染PBD-1基因的BMSC-S3/PBD-1细胞系；PCR检测BMSC-S3/PBD-1细胞表达的基因；细胞免疫荧光化学分析和流式细胞术检测BMSC-S3/PBD-1细胞表达的抗原分子。本发明专利技术制备的BMSC-S3/PBD-1细胞稳定表达PBD-1，且具备标准BMSC干细胞特性，将稳定转染PBD-1基因的BMSC-S3/PBD-1细胞通过耳部静脉输注到患支原体肺炎的猪体内，有效剂量为1～5×105/次/kg体重，可以控制猪支原体肺炎疾病；BMSC-S3/PBD-1细胞可以长期在液氮罐中保存，来源有保障，本发明专利技术提供的干细胞制剂无耐药性，外源蛋白为猪体特有，无药物残留的风险，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种可防治猪支原体肺炎的干细胞制剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：从初生猪腿骨骨髓中分离猪骨髓间充质干细胞；分离猪骨髓间充质干细胞的亚型细胞BMSC?S3细胞系；建立稳定转染PBD?1基因的BMSC?S3/PBD?1细胞系；PCR检测BMSC?S3/PBD?1细胞表达的基因；细胞免疫荧光化学分析和流式检测BMSC?S3/PBD?1细胞表达的抗原分子；在被诱导条件下，细胞可向成脂细胞或成肌细胞分化；收集经过检测合格的BMSC?S3/PBD?1细胞，以磷酸缓冲液或生理盐水进行稀释，通过耳部静脉输注到患支原体肺炎的猪体内，有效剂量为1～5×105/次/kg体重。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄海军，高其双，陈志华，占才耀，钱运国，彭霞，向敏，周莉，卢顺，陶弼菲，
申请(专利权)人：武汉市畜牧兽医科学研究所，
类型：发明
国别省市：