一种暗褐网柄牛肝菌菌种保藏方法，属于真菌技术领域。方法步骤为：a.将暗褐网柄牛肝菌子实体组织接入M1试管培养基中培养菌丝体，培养条件为30℃，暗光培养15-20d；b.分别将重量百分比为5%的海藻糖和20%的甘油保护剂装至1.8ml的冻存管中，121℃灭菌30min；c.将暗褐网柄牛肝菌菌丝块接种于冻存管中，每支接种3-5块，接种完放入冻存盒中；d.将冻存盒先放入-20℃冰箱12h，然后迅速放入-80℃超低温冰箱保藏。优点在于：1、能实现低温保藏，且保藏的时间更长；保存8个月的菌种仍性状优良。2、用保藏方法保存的菌种进行菇房人工栽培，子实体的成熟天数相对较短，子实体的重量相对较重。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】，属于真菌
。方法步骤为：a.将暗褐网柄牛肝菌子实体组织接入M1试管培养基中培养菌丝体，培养条件为30℃，暗光培养15-20d；b.分别将重量百分比为5%的海藻糖和20%的甘油保护剂装至1.8ml的冻存管中，121℃灭菌30min；c.将暗褐网柄牛肝菌菌丝块接种于冻存管中，每支接种3-5块，接种完放入冻存盒中；d.将冻存盒先放入-20℃冰箱12h，然后迅速放入-80℃超低温冰箱保藏。优点在于：1、能实现低温保藏，且保藏的时间更长；保存8个月的菌种仍性状优良。2、用保藏方法保存的菌种进行菇房人工栽培，子实体的成熟天数相对较短，子实体的重量相对较重。【专利说明】
本专利技术属于真菌
，具体涉及。
技术介绍
暗褐网柄牛肝菌Phlebopus portentosus (Berk.&Broome) Boedi jn 隶属于小牛肝菌科Boletinellaceae,脉柄牛肝菌属Phlebopus。国内分布于云南、广西和海南等地(臧穆，1986,2006 ;杨祝良和臧穆，2003;Ka1-Ping Ji et al.2011);国外分布于泰国、斯里兰卡、越南、印度尼西亚、巴西、墨西哥、澳大利亚和新西兰(Heinemann et al.1982 ；Barbara&Segedin, 1987 ；ffatling,2001 ；Bandala et al.2004 ;Maria&Marina,2007)。其子实体个体肥大，味道鲜美，营养价值丰富，是云南南部及泰国东北部最受群众喜爱的名贵食用菌之一(纪开萍等，2007，2009;3&丨8&11101.!! et al.2007)。目前我们已经在温室(菇房)人工栽培和田间半人工栽培暗褐网柄牛肝菌方面取得了成功，栽培的方法和模式都初具规模。菌种是科研和生产的重要资源。菌种保藏即在人为创造的条件下，使菌种的新陈代谢活动处于不活跃状态，从而较长时间地保持菌种的生命力和原有性状。暗褐网柄牛肝菌菌种保藏是从事暗褐网柄牛肝菌栽培、菌种生产的一项重要工作。目前食用菌保藏方法主要有传代培养保藏法、液体石蜡覆盖保藏法、液氮低温保藏法、砂土管保藏法以及自然基质保藏法等。目前暗褐网柄牛肝菌生产上常用的传代培养保藏法，是将菌种置于15°C _20°C条件下保藏，每隔3-6个月转管I次。这一技术提供了一个简便有效的短期保藏方法，但也增加了菌种产生污染和形态、生理特征发生变异的风险。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种低温条件下暗褐网柄牛肝菌菌种保藏方法。为实现以上目的，本专利技术采取的技术方案如下:a.将暗褐网柄牛肝菌子实体组织接入Ml试管培养基中培养菌丝体，培养条件为30°C，暗光培养15-20天;b.分别将重量百分比为5%的海藻糖和20%的甘油保护剂装至1.8ml的冻存管中，121°C 灭菌 30min ；c.将暗褐网柄牛肝菌菌丝块接种于冻存管中，每支接种3-5块，接种完放入冻存盒中；d.将冻存盒先放入_20°C冰箱12h，然后迅速放入_80°C超低温冰箱保藏。所述的Ml培养基的组成为:葡萄糖20.0g，硫酸镁1.0g，磷酸二氢钾1.0g，酵母膏2.0g,马铃薯200.0g,琼脂20.0g,用自来水定容至1L，ρΗ4.0?5.0。本专利技术的优点在于:1、能实现暗褐网柄牛肝菌的低温保藏，而且保藏的时间比常规的传代培养保藏法更长。经此保藏方法保存8个月的菌种仍能保持优良性状。2、用本专利技术保藏方法保存的菌种进行菇房人工栽培，子实体的成熟天数相对较短，子实体的重量相对较重。【具体实施方式】以下是本专利技术的实施例，但本专利技术的内容并不局限于此。实施例1:采用本专利技术保存暗褐网柄牛肝菌菌种的方法如下:a.将暗褐网柄牛肝菌子实体组织接入Ml试管(18mmX 180mm)培养基中培养菌丝体，培养条件为30°C，暗光培养20d ；b.分别将重量百分比为5%的海藻糖和20%的甘油保护剂装至1.8ml的冻存管中，121°C 灭菌 30min ；c.将暗褐网柄牛肝菌菌丝块接种于冻存管中，每支接种3-5块，接种完放入冻存盒中；d.将冻存盒先放入-20°C冰箱12h，然后迅速放入-80°C超低温冰箱保藏。实施例2:采用本专利技术保存暗褐网柄牛肝菌菌种的方法如下:a.将保藏的暗褐网柄牛肝菌菌株PP10003接入Ml试管(18mmX180mm)培养基中培养菌丝体，培养条件为30°C，暗光培养15d ；b.分别将重量百分比为5%的海藻糖和20%的甘油保护剂装至1.8ml的冻存管中，121°C 灭菌 30min ；.c.将暗褐网柄牛肝菌菌丝块接种于冻存管中，每支接种3-5块，接种完放入冻存盒中；d.将冻存盒先放入-20°C冰箱12h，然后迅速放入-80°C超低温冰箱保藏。用本专利技术方法保藏的菌种进行生产或扩大繁殖时，要先经30°C的水浴锅溶解，再接种于Ml培养基上。接种和培养基制作均遵循微生物实验的无菌操作要求。【权利要求】1.，其特征在于该菌种保藏方法的步骤如下: a.将暗褐网柄牛肝菌子实体组织接入Ml试管培养基中培养菌丝体，培养条件为30°C，暗光培养15-20d ； b.分别将重量百分比为5%的海藻糖和20%的甘油保护剂装至1.8ml的冻存管中，121°C 灭菌 30min ； c.将暗褐网柄牛肝菌菌丝块接种于冻存管中，每支接种3-5块，接种完放入冻存盒中；d.将冻存盒先放入-20°C冰箱12h，然后迅速放入-80°C超低温冰箱保藏。2.权利要求1所述的，其特征在于Ml培养基的组成为:葡萄糖20.0g,硫酸镁1.0g,磷酸二氢钾1.0g,酵母膏2.0g,马铃薯200.0g,琼脂20.0g,用自来水定容至1L，pH4.0?5.0。`【文档编号】A01G1/04GK103430773SQ201310385305【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年8月28日 优先权日:2013年8月28日 【专利技术者】张春霞, 何明霞, 王文兵, 刘静, 高锋, 曹旸, 伍英, 纪开萍, 王云 申请人:云南省热带作物科学研究所本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种暗褐网柄牛肝菌菌种保藏方法，其特征在于该菌种保藏方法的步骤如下：a.将暗褐网柄牛肝菌子实体组织接入M1试管培养基中培养菌丝体，培养条件为30℃，暗光培养15?20d；b.分别将重量百分比为5%的海藻糖和20%的甘油保护剂装至1.8ml的冻存管中，121℃灭菌30min；c.将暗褐网柄牛肝菌菌丝块接种于冻存管中，每支接种3?5块，接种完放入冻存盒中；d.将冻存盒先放入?20℃冰箱12h，然后迅速放入?80℃超低温冰箱保藏。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张春霞，何明霞，王文兵，刘静，高锋，曹旸，伍英，纪开萍，王云，
申请(专利权)人：云南省热带作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：
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