本发明专利技术提供的一种微囊化大肠杆菌口服灭活疫苗的优化制备方法，在于改变传统大肠杆菌疫苗注射剂型，采用微囊包被技术制备一种新型口服制剂，使大肠杆菌疫苗的免疫接种途径更加简单方便，提供反刍动物用大肠杆菌口服疫苗。采用微囊包被技术制备口服疫苗与注射疫苗产生同样的体液免疫；制得的产品颗粒饱满粒径均匀、平均粒直径为5.23±2.70μm，包埋率达到75.23%；以海藻酸钠作为包被壁材，制得的微胶囊颗粒，具有抵御胃酸的作用。
【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种微囊化大肠杆菌口服灭活疫苗的优化制备方法，其特征在于：分步骤实施;步骤1芯材的制备：1)取冻干菌种，接种于灭菌的肉汤中，37℃培养20h，取此菌液，注射于实验小白鼠的腹腔内待死亡，无菌剖取肝脏，匀浆，涂布于麦康凯培养基上，37℃培养24?h，用10%脱纤维蛋白的绵羊鲜血琼脂平板继续划线分纯至2代，经革兰氏染色、镜检、纯化，挑取光滑圆整菌落，接种于鲜血琼脂斜面，作为一级种子菌，再将其接种于肉汤内，37℃培养20h，纯粹检验合格，作为二级种子，4℃保存、备用；2）取二级种子菌液接种于营养琼脂平皿，置于37℃恒温箱，培养24?h，用含5‰甲醛、0.85%生理盐水冲洗菌苔，收集菌液，以3000rpm离心，去除培养基杂质，再以10000rpm离心，收集菌体，反复离心三次，用麦氏比浊法调整菌液浓度至200亿菌/ml，置于37℃恒温箱、振荡数次、灭活48h、得灭活菌液，配苗；3）取灭活菌液与含蜂胶30mg/ml的乙醇提取液等体积混合，以3000rpm搅拌均匀，得褐色菌苗悬液，即为灭活抗原组织，4℃保存；步骤2微囊包被的影响因素试验：设海藻酸钠浓度、芯壁比、乳化剂含量、进风温度、均质速度的不同梯度，以包埋率、粒直径为评价指标，进行单因素试验；1）在固定芯壁比为1:1，乳化剂含量为0.5%，进风温度200℃，出风温度80℃，进样速率55ml/h，10000rpm均质15min的条件下，改变海藻酸钠浓度为1%、2%、3%、4%、5%，测定其包埋率，得壁材浓度为1%?3%；2）在固定海藻酸钠浓度为2%，乳化剂含量为0.5%，进风温度200℃，出风温度80℃，进样速率55ml/h，10000rpm均质15min的条件下，改变芯壁比为1:1、1:2、1:3、1:5、1:8、1:10，测定其包埋率，得芯壁比：1:1?1:5；3）在固定海藻酸钠浓度为2%，进风温度200℃，出风温度80℃，进样速率55ml/h，10000rpm均质15min的条件下，改变乳化剂含量为0.5%、1%、1.5%、2%、4%、6%，测定其包埋率，得乳化剂含量为5?7%；4）在固定海藻酸钠浓度为2%，乳化剂含量为0.5%，出风温度80℃，进样速率55ml/h，10000rpm均质15min的条件下，改变进风温度为120℃、140℃、160℃、180℃、200℃、220℃，测定其包埋率，得进风温度为180?220℃；5）在固定海藻酸钠浓度为2%，乳化剂含量为0.5%，进风温度200℃，出风温度80℃，进样速率55ml/h，改变均质速度为10000?rpm、13000?rpm、16000?rpm、19000rpm、22000rpm，测定其包埋率，得均质速度为16000rpm；步骤3将海藻酸钠磁力搅拌溶解过夜；在常压、115℃、10?min条件下，将浓度为2%海藻酸钠与灭活抗原组织按3:1混合，添加乳化剂含量4%，保护剂含量2%，置于捣碎机，乳化10?min，再置于均质机上，以16000?rpm均质，保温30?min，将脱气后的乳状液，泵入喷雾干燥机内，以进风温度为200℃，出风温度为90℃，蠕动泵速率为70?ml/h，进行喷雾干燥即得疫苗产品；其中乳化剂为吐温80，保护剂，用1%聚乙烯吡咯烷酮与10%乳糖溶液混合均匀制得；步骤4疫苗安全性评价：疫苗口服饲喂实验大鼠，无不良反应，丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶含量与对照组之间差异不显著，为P＞0.05；?步骤5疫苗的免疫评价：制得微胶囊的含菌量为7.52×1011个菌/g干粉，口服免疫大鼠，经ELISA试验检测免疫血清抗体效价，试验组在免疫后7天即可产生抗体，免疫后28天抗体效价出现高峰。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：姚刚，徐新龙，苏艳，黄嘉驷，雷成红，马雪莲，苏战强，
申请(专利权)人：新疆农业大学，
类型：发明
国别省市：
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