一种由种公牛体外受精率对种公牛受胎率的评价方法，属于动物繁殖技术领域，将COCs分别用牛卵母细胞捡卵液、牛卵母细胞成熟液洗后，放入牛卵母细胞成熟液中培养后，放入用BO-AB液获能的牛精子滴中受精；再用IVC?SOF液脱掉颗粒细胞，把脱掉颗粒细胞的卵子放入SOF液中培养，测出体外受精卵裂率；同时进行人工授精，测出种公牛的受胎率，通过卵裂率与受胎率的关联性对种公牛进行评价。本发明专利技术的优点是利用种公牛精子体外受精率，较快的估测出种公牛的实际受胎能力，及时了解种公牛繁育能力，省去了人工授精检测个体种公牛繁育能力需要耗费大量时间、人力和财力的问题，节约了资源。
【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种由种公牛体外受精率对种公牛受胎率的评价方法，其特征在于：它包括如下步骤：一、配制试剂：按照牛卵母细胞捡卵液、牛卵母细胞成熟液、牛体外受精液BO?A、BO?B、BO?AB、牛体外受精培养液Stock?A、Stock?B、Stock?C、Stock?D、StockX、Stock?Y、Stock?Z、IVC?SOF液的次序排列；（1）配制牛卵母细胞捡卵液：H?M199（GIBCO，12340）+10%FBS4℃保存，使用期限为一个月;（2）配置牛卵母细胞成熟液:M199(GIBICO,11150)+1μg/mlE2+0.1IU/mlFSH+1IU/mlLH+10%FBS4℃保存，使用期限为一个月;（3）配制牛体外受精液BO：4℃保存，使用期限为一个月;（4）配制牛体外受精液BO?A：现配现用;（5）配制牛体外受精液BO?B：现配现用;（6）配制牛体外受精液BO?AB：等量BO?A与BO?B混合；现配现用;（7）配制牛体外受精培养液Stock?A：4℃保存，使用期限为一个月;（8）配制牛体外受精培养液Stock?B：4℃保存，使用期限为一个月;（9）配制牛体外受精培养液Stock?C：4℃保存，使用期限为一个月;（10）配制牛体外受精培养液Stock?D：4℃保存，使用期限为一个月;（11）配制牛体外受精培养液Stock?X：4℃保存，使用期限为一个月;（12）配制牛体外受精培养液Stock?Y：4℃保存，使用期限为一个月;（13）配制牛体外受精培养液Stock?Z：4℃保存，使用期限为一个月;（14）配制牛体外受精培养液IVC?SOF液：SOF液体总体积10mlstockA1mlstockB1mlstockC100μlstockD100μlstockX100μlstockY100μlstockZ100μlNEAA100μlEAA200μlBSA0.08gP/S10μl酚红10μl超纯水7.18ml4℃保存，使用期限为一个月;二、体外受精：（1）牛卵细胞的成熟培养：①屠宰3h之内的新鲜牛卵巢用无菌生理盐水冲洗3次并浸泡在干净的生理盐水中,用20ml注射器17#针头抽取直径在2?8mm的卵泡，将采集后的卵泡液放在10cm培养皿中，在显微镜下捡出卵丘?卵母细胞复合体COCs；②把牛卵母细胞捡卵液与牛卵母细胞成熟液分别放在38.5℃，5%的二氧化碳培养箱中平衡1h以上，然后将拣出的COCs用平衡好的牛卵母细胞捡卵液洗一遍，牛卵母细胞成熟液洗两遍后，取一四孔板，每孔先加入500μl牛卵母细胞成熟液，再加入500μl石蜡油，按照每孔50?120枚的数目放入牛卵母细胞成熟液中，在38.5℃，5%二氧化碳培养箱内进行成熟培养22h；（2）体外受精：①取50ml烧杯两个，分别标记为A和B：A配制牛体外受精液BO?A，B配制牛体外受精液BO?B；将配置好的牛体外受精液BO?A使用0.2μm过滤器过滤到新的50ml烧杯中，配好的牛体外受精液BO?B使用0.2μm过滤器过滤到新的50ml烧杯中，均放入37.5℃恒温水浴锅中预热；②取牛原精1000万，加入预热的牛体外受精液BO?A5ml，将精子轻轻混匀后，2000rpm/min室温离心5min，弃上清；再加入5ml预热的牛体外受精液BO?A轻轻混匀后，2000rpm/min离心5min，弃掉上清后，用预热的牛体外受精液BO?AB将牛精子浓度稀释为1000万/ml；③将②处理好的精液在35mm皿中做100μl的精子滴，做好后加入石蜡油放入培养箱中；④打开显微镜保温板升至37.5℃，在显微镜下拣出步骤2（1）②成熟22h的牛卵细胞，在预热的牛体外受精液BO?AB中洗3次，将③中做好的精子滴从培养箱中拿出，每个精子滴加入10枚卵，38.5℃，5%CO2培养箱中培养6h；（3）受精卵的体外发育培养：经步骤2（2）④受精6h后，用培养箱中预热的IVCSOF液脱掉颗粒细胞，然后，把脱掉颗粒细胞的卵子放入预热的每孔含500μlIVCSOF液上盖500μl石蜡油的四孔板中，38.5℃，5%二氧化碳培养箱继续培养； （4）体外卵裂率检测：受精48小时统计卵裂率；卵裂率=正常卵裂的胚胎/用于受精的卵子数；三、人工输精：（1）母牛的选择：A、青年牛16?18月龄、体重275?350Kg；B、经产牛产后60?90天、子宫复旧良好；发情规律、产后第二次自然发情时输精;（2）精液的选择：按照国家标准，选取解冻后精子活力大于30%，畸形率小于20%，每毫升精液中细菌菌落数小于1000个，顶体完整率大于40%，37℃存活时间大于4小时的种...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李喜和，苏杰，韩红梅，王春生，吴冬生，胡树香，
申请(专利权)人：内蒙古赛科星繁育生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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