本发明专利技术公开了一种利用二萜类化合物Tagalsin?E和Tagalsin?G制备抗肿瘤活性先导化合物Tagalsin?C的方法：1)将Tagalsin?E与叔丁醇钾投入反应容器并加入无水四氢呋喃，容器抽真空后通入氧气，在零下15摄氏度下反应10小时后停止反应；2)将Tagalsin?G与醋酸钯投入反应容器后加入无水二甲基亚砜，将反应容器抽真空并通入氧气，在60℃下反应24小时后停止反应；3)将上述1)和2)两个反应的终产物用乙酸乙酯萃取，后用正相硅胶柱色谱以石油醚/乙酸乙酯为流动相洗脱，纯化得到Tagalsin?C。本发明专利技术制备方法步骤少，产率高，环境污染小，绿色环保。
【技术实现步骤摘要】
利用TagalsinE和TagalsinG制备抗肿瘤先导化合物TagalsinC的方法
本专利技术涉及一种利用二萜类化合物TagalsinE和TagalsinG制备抗肿瘤活性先导化合物TagalsinC的方法，属于纯化学
技术介绍
TagalsinC是2005年首次从角果木Ceriopstagal中分离得到的dolabrane型二萜类化合物(YanZhang，WenhanLin，etal.Phytochemisry，2005，66：1465-1471)。据报道，该化合物具有膜通透性和广谱的杀肿瘤活性，可以杀伤人早幼粒急性白血病细胞HL-60、人骨髓瘤细胞TM9、人急性T细胞白血病细胞Jurkat、人巨噬细胞淋巴瘤细胞U937、人肺癌细胞A549、人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231、人肝癌细胞HepG2、人前列腺癌细胞PC-3和人宫颈癌上皮细胞Hela，而对正常细胞人肾胚细胞293和人肝二倍体细胞L02没有明显的杀伤能力，可应用于制备治疗肿瘤的药物、制备治疗临床Bcl-2高表达、耐常规化疗的药物和制备治疗复发癌症的药物(WenhanLin，TingZhang，etal.FaMingZhuanLiShenQing，2007，CN101077345A20071128)。但目前TagalsinC的来源还仅局限于从红树植物角果木中提取分离获得，且提取过程复杂，大大增加了TagalsinC的药物研发成本。而与其结构类似的二萜类化合物TagalsinE和TagalsinG在角果木中却含量丰富(TagalsinE为TagalsinC的7～10倍，TagalsinG为TagalsinC的15～20倍)，但却不具备TagalsinC的显著抗癌活性。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种利用TagalsinE和TagalsinG快速制备TagalsinC的方法，以提高角果木资源的有效利用率，降低TagalsinC的药物研发成本。本专利技术包括如下内容：1)将TagalsinE与叔丁醇钾投入反应容器后加入无水四氢呋喃，将反应容器抽真空并通入氧气，在-15℃下反应10小时，后淬灭反应；2)反应产物用乙酸乙酯萃取，后用正相硅胶柱色谱以石油醚∶乙酸乙酯40∶1洗脱3个柱体积，再用石油醚∶乙酸乙酯20∶1洗脱2个柱体积，回收20∶1洗脱部分，减压浓缩得到TagalsinC，收率大于85％。3)将TagalsinG与醋酸钯投入反应容器后加入无水二甲基亚砜，将反应容器抽真空并通入氧气，在60℃下反应24小时后，停止反应；4)反应产物用乙酸乙酯萃取，后用正相硅胶柱色谱以石油醚∶乙酸乙酯40∶1洗脱3个柱体积，再用石油醚∶乙酸乙酯20∶1洗脱2个柱体积，回收20∶1洗脱部分，减压浓缩得到TagalsinC，收率大于50％。该方法的步骤1)中，TagalsinE与叔丁醇钾的用量比为1∶2(摩尔比)；无水四氢呋喃作为反应溶剂应为钠钾合金干燥后的四氢呋喃，用量为足够溶解TagalsinE与叔丁醇钾且不超过反应容器1/3；通入氧气为纯氧；反应温度为-15℃±1℃；用饱和的氯化铵溶液淬灭反应。该方法的步骤2)和步骤4)中，色谱条件为常压柱色谱，正相硅胶为160～200目或200～300目，流动相为分析纯且比例为体积比，减压浓缩时温度为35～45℃。该方法的步骤3)中，TagalsinG与醋酸钯的用量比为1∶1(摩尔比)；无水二甲基亚砜作为反应溶剂应为钠钾合金干燥后的二甲基亚砜，用量为足够溶解TagalsinG与醋酸钯且不超过反应容器1/3；通入氧气为纯氧；反应温度为60℃±1℃。本专利技术首次通过化学转化方法，利用TagalsinE和TagalsinG制备抗肿瘤先导化合物TagalsinC。该方法所需步骤少、产率高、工艺简便、绿色环保。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明，但本专利技术并不限于以下实施例。取0.1毫摩的TagalsinE(28.6毫克)和0.2毫摩的叔丁醇钾(22.4毫克)于反应管中，加入5毫升的无水四氢呋喃溶剂，油泵抽真空后，通入氧气，在-15℃下反应10小时。用饱和氯化铵溶液淬灭反应，后用乙酸乙酯萃取得到有机层。有机层减压浓缩后用正相硅胶柱色谱以石油醚/乙酸乙酯为流动相洗脱纯化，得到0.086毫摩的TagalsinC。取0.1毫摩的TagalsinG(30.2毫克)和0.1毫摩的醋酸钯(22.4毫克)于反应管中，加入5毫升的无水二甲基亚砜溶剂，油泵抽真空，并通入氧气，在60℃下反应24小时后停止。后用乙酸乙酯萃取得到有机层。有机层减压浓缩后用正相硅胶柱色谱以石油醚/乙酸乙酯为流动相洗脱纯化，得到0.054毫摩的TagalsinC。经HPLC分析，制得的TagalsinC纯度大于99％。其经体外细胞毒活性筛选，具有明显抗肿瘤活性。表1.TagalsinC的体外细胞毒活性筛选结果IC50＜50为具有强细胞毒活性附图说明图1是TagalsinC、TagalsinE和TagalsinG的结构图图2是化学反应流程图图3是TagalsinE的1HNMR谱图图4是TagalsinC的1HNMR谱图图5是TagalsinE的ESI-MS谱图图6是TagalsinC的ESI-MS谱图本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用二萜类化合物Tagalsin?E和Tagalsin?G制备抗肿瘤先导化合物Tagalsin?C的方法，包括如下步骤：1)将Tagalsin?E与叔丁醇钾投入反应容器后加入无水四氢呋喃，将反应容器抽真空并通入氧气，在?15℃下反应10小时，后淬灭反应；2)将Tagalsin?G与醋酸钯投入反应容器后加入无水二甲基亚砜，将反应容器抽真空并通入氧气，在60℃下反应24小时后，停止反应；3)将上述1)和2)的反应产物用乙酸乙酯萃取，后用正相硅胶柱色谱以石油醚∶乙酸乙酯40∶1洗脱3个柱体积，再用石油醚∶乙酸乙酯20∶1洗脱2个柱体积，回收20∶1洗脱部分，减压浓缩得到Tagalsin?C。
【技术特征摘要】
1.一种利用二萜类化合物TagalsinE和TagalsinG制备抗肿瘤先导化合物TagalsinC的方法，包括如下步骤：1)将TagalsinE与叔丁醇钾投入反应容器后加入无水四氢呋喃，将反应容器抽真空并通入氧气，在-15℃±1℃下反应10小时后淬灭反应；2)将TagalsinG与醋酸钯投入反应容器后加入无水二甲基亚砜，将反应容器抽真空并通入氧气，在60℃±1℃下反应24小时后，停止反应；3)将上述1)和2)的反应产物用乙酸乙酯萃取后，用正相硅胶柱色谱以石油醚：乙酸乙酯40：1洗脱3个柱体积，再用石油醚：乙酸乙酯20：1洗脱2个柱体积，回收20...
【专利技术属性】
技术研发人员：张洋，林文翰，刘东，杨奕，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：
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