一种L-氨基酸氧化酶活力的定量检测方法技术

本发明专利技术提供了一种利用二甲酚橙琼脂平板定量检测L-氨基酸氧化酶活力的方法：用打孔器在二甲酚橙琼脂平板上打出直径为4～10mm的小孔，然后往小孔中加入待测液，室温静置20～100min，测定紫红色圈的直径，根据过氧化氢浓度对数值与紫红色圈直径制作的标准直线来确定待测液中过氧化氢的浓度，从而确定L-氨基酸氧化酶的活力；所述待测液是以L-氨基酸氧化酶待测酶液为酶源，以0.2～20mmol/L的L-亮氨酸为底物，25～50℃，pH5～9条件下反应0.5～2h后产生过氧化氢，获得的反应液经稀释后即为待测液；本发明专利技术方法具有灵敏度极高、成本低、操作简单方便、稳定性好、适用性广和环境友好等特点。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用二甲酚橙琼脂平板定量检测L?氨基酸氧化酶活力的方法，所述方法包括：（1）二甲酚橙琼脂平板的制备：以水为溶剂，配制含有0.05～0.4mmol/L?FeSO4、0.04～0.3mmol/L二甲酚橙和15～30g/L琼脂的水溶液，煮沸溶解，倒平板，冷却凝固后制成二甲酚橙琼脂平板；（2）待测液的制备：以0.2～20mmol/L的L?亮氨酸为底物，加入含L?氨基酸氧化酶待测酶液作为酶源，于25～50℃、pH5～9条件下反应0.5～2h，获得的反应液用水经稀释后即为待测液；（3）L?氨基酸氧化酶活力的测定：用打孔器在二甲酚橙琼脂平板上打出直径为4～10mm的小孔，然后往小孔中加入待测液，室温静置20～100min后，测定紫红色圈的直径；（4）标准曲线绘制：配制梯度浓度的过氧化氢溶液，按照步骤（3）方法进行检测，以过氧化氢浓度为横坐标、紫红色圈直径为纵坐标，绘制标准曲线；（5）结果判定：根据待测液的紫红色圈直径，对照标准曲线，获得待测液中过氧化氢的浓度值，从而获得L?氨基酸氧化酶活力数据；L?氨基酸氧化酶活力的定义为：1μL酶液作用底物浓度为10mmol/L的L?氨基酸1h后释放出1mmol/L过氧化氢即为1个酶活单位U。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：余志良，裘娟萍，赵春田，王菊，周宁，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：