通过麦粒培养基制备纯化ZEN毒素的方法技术

技术编号:9251758 阅读:237 留言:0更新日期:2013-10-16 18:45
本发明专利技术涉及一种通过麦粒培养基制备纯化ZEN毒素的方法,利用ZEN毒素苯环结构上羟基所具有的酸性,从接种禾谷镰刀菌的麦粒培养基中提取含有ZEN毒素的粗提液,其特征在于:将含有ZEN毒素的粗提液通过氢氧化钠过量碱化,使ZEN毒素溶解于水中,与有机溶剂分离;通过酸化调节含有ZEN毒素的水相至pH2.0~7.0,恢复结构,加入有机试剂使ZEN毒素重新溶解于有机试剂中,与水相分离,浓缩有机试剂得到ZEN粗毒素;采用制备型液相色谱对ZEN毒素在液相色谱上的紫外吸收峰进行回收,获得制备的ZEN毒素。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种通过麦粒培养基制备纯化ZEN毒素的方法,利用ZEN毒素苯环结构上羟基所具有的酸性,从接种禾谷镰刀菌的麦粒培养基中提取含有ZEN毒素的粗提液,其特征在于:将含有ZEN毒素的粗提液加入过量的氢氧化钠碱化,使ZEN毒素溶解于水中,与有机溶剂分离;通过酸化调节含有ZEN毒素的水相至pH2.0~7.0,恢复结构,加入有机试剂使ZEN毒素重新溶解于有机试剂中,与水相分离,浓缩有机试剂得到ZEN粗毒素;采用制备型液相色谱对ZEN毒素在液相色谱上的紫外吸收峰进行回收,获得制备的ZEN毒素,具体的步骤是:a)?将禾谷镰刀菌活化后接到绿豆汤液体培养基中,28℃摇床振荡培养5天后用灭菌纱布过滤得到禾谷镰刀菌孢子液,孢子液浓度为1×107?个/ml?,取2ml孢子液接到200g麦粒培养基中,28℃光培养25天,获得含有ZEN毒素的培养物;b)?称取100g含有ZEN毒素的培养物,加入500ml体积比80:20的乙腈/水提取液,摇床室温振荡30分钟,离心后收集含有ZEN毒素的粗提液;c)?将含有ZEN毒素的粗提液旋转蒸干后加入20ml色谱纯甲醇重新溶解,取2ml用于粗提液的检测,重新蒸干剩余粗提液后加入50ml体积比1:1的三氯甲烷/水溶液重新溶解,加入过量的氢氧化钠固体,直到氢氧化钠不能溶解为止,混匀分层后取上层提取物;d)?将c步骤上层提取物装入试管,然后加入盐酸酸化,调节至pH2.0~7.0后加入等体积的三氯甲烷,混匀分层后取下层,旋转蒸干下层后重新溶解在色谱纯的甲醇中,采用高效液相色谱检测pH2.0~7.0条件下ZEN毒素含量;高效液相色谱检测条件为:流速V=0.6ml/min,紫外吸收波长λ=236nm,流动相中甲醇与水的体积比为80:20,利用制备型液相色谱的馏分收集器收集在8.00?8.70?min之间含有ZEN毒素的流动相,获得纯化的ZEN毒素;所述的绿豆汤培养基为:准确称取绿豆3g,加入100ml单蒸水,电磁炉加热至绿豆表皮开始破裂,纱布过滤后定容至100ml,装入250ml三角瓶,121℃灭菌30分钟;所述的麦粒培养基为:将麦粒经单蒸水浸泡过夜后,去除单蒸水将湿麦粒装入灭菌袋中,121℃灭菌30分钟。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:董飞徐剑宏祭芳殷宪超史建荣
申请(专利权)人:江苏省农业科学院
类型:发明
国别省市:

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