一种利用连续克隆技术生产孤雌生殖克隆猪的方法技术

本发明专利技术涉及一种利用连续克隆技术生产孤雌生殖克隆猪的方法，属于繁殖生物学领域。本发明专利技术包括猪卵母细胞的去脂、孤雌激活、成纤维细胞的分离和连续的体细胞核移植；将猪去脂后的成熟卵母细胞进行孤雌激活获得孤雌胚胎，移植到代孕母猪体内并获取25－29日龄成活孤雌胎儿，建立猪孤雌胎儿成纤维细胞系，并将其作为最初供体细胞，利用体细胞核移植技术进行连续克隆获得猪的孤雌生殖个体，此技术克服了猪的孤雌生殖胚胎在体内发育至30天便停止发育的情况，成功延长猪的孤雌胚胎在体内的发育时间，并最终获得成活的孤雌克隆猪。

【技术实现步骤摘要】
一种利用连续克隆技术生产孤雌生殖克隆猪的方法
本专利技术涉及一种利用连续克隆技术生产孤雌生殖克隆猪的方法，以孤雌胎儿成纤维细胞为最初供体细胞，利用体细胞核移植技术进行连续克隆获得成活的孤雌生殖的猪个体的技术，属于繁殖生物学领域。
技术介绍
孤雌生殖是指无雄性配子的任何作用，由雌性配子产生的胚胎，不论其是否发生成个体的无性生殖过程。孤雌生殖的对于阐明哺乳动物卵激活过程的信号偶联过程、细胞周期阻滞的恢复、受精机制和发育机理具有重要的应用价值。加之由于父系基因的缺失，孤雌生殖对研究哺乳动物的胚胎、胎盘的生长发育和印记基因有重要意义。经孤雌生殖而产生的单倍体和纯合双倍体细胞系在各种遗传学和动物育种中都具有重要的价值。但是猪的孤雌生殖在自然条件下是无法自发进行的。通常是通过人工体外激活，猪的成熟的卵母细胞转化为二倍体的孤雌胚胎，其在体内最多发育至30天便停止发育。因此，怎样促使猪的孤雌胚胎在体内发育时间延长并最终获得孤雌生殖个体一直是技术难点和热点。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供一种利用连续克隆技术生产孤雌生殖克隆猪的方法，针对猪的孤雌生殖的胚胎在体内发育至30天便停止发育的情况，利本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用连续克隆技术生产孤雌生殖克隆猪的方法，其特征在于，所述的生产孤雌生殖克隆猪的方法按照下面步骤进行：第一步、获得猪孤雌胎儿成纤维细胞；对猪成熟卵母细胞进行高速离心，用显微操作技术去除脂肪颗粒，然后对其进行孤雌激活获得孤雌胚胎，移植到代孕母猪体内，取25－29日龄成活孤雌胎儿，建立猪孤雌胎儿成纤维细胞系；第二步、通过第一代克隆获得猪孤雌生殖的克隆胎儿成纤维细胞；首先，将分离的猪孤雌胎儿成纤维细胞作为供体细胞，通过体细胞核移植技术进行第一代体细胞核移植，将重构胚移植到代孕母猪体内发育，手术获取能发育超过成活35日龄的第一代孤雌生殖的克隆胎儿，并分离培养猪孤雌生殖的克隆胎儿成纤维细胞；第三步、...

【技术特征摘要】
1.一种利用连续克隆技术生产孤雌生殖克隆猪的方法，其特征在于，所述的生产孤雌生殖克隆猪的方法按照下面步骤进行：第一步、获得猪孤雌胎儿成纤维细胞；对猪成熟卵母细胞进行高速离心，转速为13000rmp，时间为20min，用显微操作技术去除脂肪颗粒，然后对其进行孤雌激活获得孤雌胚胎，移植到代孕母猪体内，取25－29日龄成活孤雌胎儿，建立猪孤雌胎儿成纤维细胞系；第二步、通过第一代克隆获得猪孤雌生殖的克隆胎儿成纤维细胞；首先，将分离的猪孤雌胎儿成纤维细胞作为供体细胞，通过体细胞核移植技术进行第一代体细胞核移植，将重构胚移植到代孕母猪体内发育，手术获取能发...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏红江，赵红业，赵鲁，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：