一种提高猪克隆胚胎体外发育效率的方法技术

本发明专利技术具体公开了一种提高猪克隆胚胎体外发育效率的方法。本发明专利技术对骨髓来源的间充质干细胞进行了分子鉴定，建立了通过6通道流式技术利用少量细胞即可鉴定细胞纯度的方法；然后对猪骨髓间充质干细胞进行基因修饰，获得了表达多种重编程因子的猪骨髓间充质干细胞；利用荧光流式分选方法，分离出了阳性猪骨髓间充质干细胞，将其继续培养3~7days，再作为核供体细胞进行核移植，考察了4RFs-3days，6RFs-3days，4RFs-7days，6RFs-7dayspMSC作为核供体细胞对猪克隆胚胎发育效率提高的影响；结果显示，4RFs-7dayspMSC能更好地促进克隆胚胎的分裂以及囊胚的形成，有助于克隆胚胎形成较均一细胞数量的同质状态，为大规模高效地克隆成年优良品种猪奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种提高猪克隆胚胎发育效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.分离纯化猪骨髓间充质干细胞；S2.将Oct4、Klf4、c?Myc和Sox2?4种重编程因子或Oct4、Klf4、c?Myc、Lin28、Nanog和Sox2?6种重编程因子转入猪骨髓间充质干细胞中进行超表达；利用流式荧光筛选技术分选出含有4种重编程因子或6种重编程因子的猪骨髓间充质干细胞；在体外培养3~7天，即可作为核供体细胞进行核移植。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：宋振威，丛佩清，冀倩倩，赵海静，何祖勇，陈瑶生，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：