一种大规模哺乳动物工程细胞培养方法技术

本发明专利技术涉及一种大规模哺乳动物工程细胞培养方法。该方法包括（1）细胞复苏及摇床培养，（2）扩培罐培养，包括在培养基中于悬浮液中培养细胞，分三级进行；（3）生产罐培养。本发明专利技术将在生产罐中典型的15天的细胞培养缩短为8天，在扩培罐中培养生长7天，待细胞密度达到对数生长期后，再将细胞以高密度稀释到生产细胞罐中，继续生长培养8天至结束。本发明专利技术的细胞培养方法使得每一批次生产的周期缩短为典型培养的一半；该工艺使扩培罐和生产罐得到最大效率的利用，提高了设备的利用率。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种大规模动物工程细胞培养方法，包括以下步骤：（1）细胞复苏及摇床培养：将从液氮罐中取出的细胞株，在37℃水浴中复融，待细胞化开后置于含有50ml扩培培养基的250ml摇瓶中，放置于37℃、5%CO2培养箱中，150rpm摇床培养2?3天，使摇瓶中细胞密度生长到1.0×106～3.0×106cell/ml；所述扩培培养基为含有2mM?L?Gln、400ng/ml?G418和100nM?MTX的CD?Forti?CHO培养基；（2）扩培罐培养，包括在培养基中于悬浮液中培养细胞，分三级进行：2L罐扩培：将摇瓶中密度1.0×106～3.0×106cell/ml的细胞，以1:4～5的体积比例稀释到含有1.6L扩培培养基的2L细胞罐中进行扩培，扩培工艺条件为：温度37℃，pH控制范围7.0±0.2，溶氧（DO）控制在40%，搅拌转速200rpm；培养2?3天，使2L罐中细胞密度生长到1.0×106～3.0×106cell/ml；10L罐扩培：将2L罐中密度1.0×106～3.0×106cell/ml的细胞以1:4～5的体积比稀释到含有8L扩培培养基的10L细胞罐中进行扩培，扩培工艺条件为：温度37℃，pH控制范围是7.0±0.2，同时与NaHCO3偶联，溶氧（DO）控制在40%，搅拌转速120rpm；使2L罐中细胞密度生长到1.0×106～3.0×106cell/ml；其中，上述的扩培培养基为含有2mM?L?Gln、400ng/ml?G418和100nM?MTX的CD?Forti?cho培养基；100L罐扩培：将10L罐中扩培的密度为1.0×106～3.0×106cell/ml的细胞，以1:4～5的体积比稀释到含有35?40L完全培养基的100L扩培罐中，所述的完全培养基为含有2mML?Gln的CD?Forti?cho培养基；培养工艺条件为：温度37℃，pH控制范围是7.0±0.2，溶氧（DO）控制在40%，搅拌转速75rpm；在细胞培养的第4、6天各补料培养基Feed?C一次，补料培养基的体积为完全培养基体积的11?13%；细胞培养的第7?8天，细胞密度为17×106～19×106cell/ml，此阶段细胞进入对数生长期，收集处在此对数生长期的细胞作为种子细胞准备转移到生产罐中进行生产罐培养；（3）生产罐培养：将步骤（2）中55?60L种子细胞无菌转移到含有55?60L完全培养基的150L细胞生产培养罐中，所述的完全培养基为含有2mM?L?Gln的CD?Forti?cho培养基；培养工艺条件为：温度33℃，pH控制范围是7.0±0.2，溶氧（DO）控制在40%，搅拌转速50rpm；在生产细胞罐中的第1天，补料培养基Feed?C10?20L，使总体积达130L，每天取样计数，生产罐培养的第7?8天时，细胞活力下降到78?82%，收集细胞上清液进行纯化，得到纯化后的原液。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周凯松，王庆民，孙丽霞，曹平，夏庭坤，崔午阳，
申请(专利权)人：齐鲁制药有限公司，
类型：发明
国别省市：