【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种荧光定量RT?PCR检测猪蓝耳病弱毒疫苗病毒含量的方法,包括用于实时荧光定量RT?PCR检测猪蓝耳病弱毒疫苗病毒含量的特异性引物、标准质粒的制备及建立标准曲线、确定实验的成立标准、确定阳性或阴性的判定标准,其具体特征如下:(1)引物特征:SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2能特异性扩增猪蓝耳病病毒的cDNA,扩增产物大小为287bp,用于构建标准浓度的质粒;SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4能特异性扩增包含于SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2扩增产物片段之内的猪蓝耳病病毒cDNA,扩增产物大小为130bp,用于建立荧光定量PCR标准曲线及检测未知样品;(2)标准曲线的建立方法:提取猪蓝耳病弱毒疫苗的RNA,并反转录为cDNA,作为模板;以SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2为引物,进行PCR扩增;将扩增产物纯化回收,连接到pMD19?T载体上,转化到感受态细胞DH5α内,提取质粒DNA,获得猪蓝耳病弱毒疫苗检测用的标准质粒;将制备的标准质粒作10倍梯度稀释,以稀释液为模板,进行荧光定量PCR,采集荧光信号,使用Bio?Rad?iQ5软件绘 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:张以芳,范斌,马志亮,刘旭川,邹丰才,柴俊,刘岳,柳桐,
申请(专利权)人:云南农业大学,
类型:发明
国别省市:
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