高效液相色谱法分离纯化植物内生细菌菌株抗菌肽的方法技术

技术编号:9084855 阅读:169 留言:0更新日期:2013-08-28 21:11
一种高效液相色谱法分离纯化植物内生细菌菌株抗菌肽的方法,是以短短芽孢杆菌B-011为基础菌株,该菌株于2013年04月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC?No.7466,制备该菌株的发酵滤液,加入乙腈,混匀静置,离心,上清液经蒸发并浓缩,得抗菌粗提物;再采用高效液相色谱进行二次分离,得到抗菌肽活性单峰组分。本发明专利技术菌株B-011发酵滤液中的抑菌活性物质(抗菌肽)对番茄早疫病菌的孢子萌发有抑制作用,并表现出对芽管及菌丝有致畸效果。采用本发明专利技术的高效液相色谱法分离纯化该菌株发酵滤液中抑菌活性组分并对该物质进行鉴定,有助于明确该菌株抑制番茄早疫病菌的根本原因及开发新型抗菌药物。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种高效液相色谱法分离纯化植物内生细菌菌株抗菌肽的方法,其特征在于,该方法步骤如下:A、以短短芽孢杆菌B?011为基础菌株,该菌株于2013年04月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC?No.7466,制备短短芽孢杆菌CGMCC?No.7466的发酵滤液;B、取发酵滤液加入乙腈,使乙腈体积浓度为80%,充分混匀后静置20?25min,离心,上清液经旋转蒸发并浓缩,得抗菌粗提物;C、将抗菌粗提物采用高效液相色谱进行初步分离:SinoChrom?ODS?BP柱,上样量为10mL,流速为20mL/min,检测波长为270nm,0.2%甲酸水和乙腈的混合洗脱液进行梯度洗脱,根据色谱峰收集对应的洗脱液,旋转蒸发除去有机溶剂,冷冻干燥,制得活性组分;D、将制得的活性组分采用XAqua?C18柱进行高效液相再次分离:上样量为100μl,流速为3mL/min,检测波长为270nm,0.2%甲酸水和乙腈的混合洗脱液进行梯度洗脱,根据色谱峰收集每个峰所对应的洗脱液,旋转蒸发除去有机溶剂,冷冻干燥,得到抗菌肽活性单峰组分。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:易有金王宇婷曾静
申请(专利权)人:湖南农业大学
类型:发明
国别省市:

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1