一种快速测定桑叶中单宁含量的方法技术

一种快速测定桑叶中单宁含量的方法，通过单宁标准曲线的绘制、桑叶中单宁的超声波提取和桑叶中单宁的测定等步骤实现。本发明专利技术方法在超声波的辅助作用下，用65%的乙醇溶液作溶剂，在很短的时间内（不超过1h）即可将桑叶中的单宁提取出来，提取时间大大缩短；而且可以根据超声波清洗机的大小同时测定数个乃至数十个桑叶样本，提高工作效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物成分分析
，特别是涉及。
技术介绍
单宁又称鞣质，是由没食子酸(或其聚合物)的葡萄糖(及其多元醇)酯、环烷醇及其衍生物的聚合物以及两者混合共同组成的多元酚，在植物中广泛存在。单宁分为可水解型和缩合型(原花色素)两大类，近10年来低聚原花青素在欧、美、日等国家的保健品、化妆品领域得到广泛应用，享有“皮肤维生素”的美誉。单宁在制革工业中被广泛用来鞣制底革、工业用革、箱包革等。单宁也是百部、老鹤草等中草药的重要药效成分。桑科桑属植物桑的叶是桑树的主要产物，约占地上部产量的64%，我国是世界上最大的桑树种植国，卫生部于1993年将桑叶列为药食两用植物。桑叶中含有较丰富的单宁。要利用桑叶提取单宁，必须先知道桑叶单宁含量的高低。目前单宁含量的测定方法主要有、溶剂提取法、微波提取法等。热水提取法是利用水作溶剂，在高温下将单宁溶出后测定。该法的主要缺陷是测定时间长，重复过程多，提取效率较低，能耗高；溶剂提取法是利用甲醇、乙醇等极性有机溶剂将单宁溶出后测定，如用pH为3、浓度50%的乙醇提取百部3h，测定得到百部中 单宁含量为0.93%。该法的主要缺点是提取时间长、溶出液中杂质较多，对测定数据的准确性影响较大。到目前为止，尚无有关快速测定桑叶中单宁含量方法的研究报道。
技术实现思路
鉴于目前单宁含量测定方法耗时的缺陷，本专利技术的目的在于提供，该方法利用超声波技术快速地将桑叶中的单宁分离、提出，用于测定。超声波是指频率为20千赫 50兆赫左右的机械波，它具有空化、闻频振荡及微射流等多级物理效应。超声波的空化作用可产生极大的压力，造成细胞壁在瞬间破裂，细胞内物质充分释放出来；同时，超声波产生的振动作用可加强待提取物质的扩散及溶解。因此，利用超声波对细胞壁的破壁作用，使细胞内物质如单宁充分释放出来，缩短单宁提取时间、提闻单宁提取率。本专利技术依次通过下列步骤实现: (O单宁标准曲线的绘制:称取单宁酸，加蒸馏水溶解、混匀，配制浓度为0.lmg/mL的单宁标准溶液；分别取单宁标准溶液 0.0mL、L OmL,2.0mL,3.0mL,4.0mL,5.0mL 于各容量瓶中，加 Folir-Denis 试剂2.5mL及饱和碳酸钠溶液5.0mL，加水定容至50mL，充分混匀，静置30min后，以空白溶液调零，在750nm处测吸光度，根据单宁浓度与对应的吸光度值绘制得到标准曲线； (2)桑叶中单宁的超声波提取:将鲜桑叶放入80°C烘箱中烘干，粉碎成桑叶粉后放入容器中，加入质量比浓度为65%的乙醇溶液，桑叶粉与质量比浓度为65%的乙醇溶液的质量体积比为Ig:25 mL，将容器放入超声波清洗机，在功率为120W，温度为65°C下提取15min，提取完成后，过滤，滤液保存备用；残渣中加入相同体积和浓度的乙醇溶液于相同条件下重复超声波提取，得到滤液，如此重复提取3次，合并滤液并按每0.5克桑叶粉定容至50mL定容，得提取液； (3)桑叶中单宁的测定: 吸取提取液1.0mL于容量瓶中，加入Folir-Denis试剂2.5mL及饱和碳酸钠溶液5.0mL,加水定容至50mL并充分混合，静置30min后，以空白调零，于750nm处测吸光度，根据步骤(I)所得标准曲线计算桑叶中单宁的含量。附图说明图1为单宁标准曲线。本专利技术的优点是 本专利技术方法在超声波的辅助作用下，用65%的乙醇溶液作溶剂，在很短的时间内(不超过Ih)即可将桑叶中的单宁提取出来，提取时间大大缩短；而且可以根据超声波清洗机的大小同时测定数个乃至数十个桑叶样本，提高工作效率。用本专利技术方法提取并测定桑叶中的单宁，加标回收率达到92%，RSD < 5%，符合分析方法的要求。具体实施方式: 为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本专利技术的优选实施例子进行详细的描述。实施例1:试剂的配制 (I)Folir-Denis试剂:称取钨酸钠100g、磷钥酸20g于IOOOmL烧瓶中，加水750mL溶解，再加入磷酸50mL。连接冷凝装置，在沸水浴上加热回流2h后，冷却至室温，加水定容到IOOOmL得Folir-Denis试剂，于棕色瓶中保存备用。(2)单宁标准溶液:称取单宁酸0.0lOOg，加少量水溶解，转入IOOml容量瓶中，力口水混匀并定容至IOOml得单宁标准溶液，保存备用，单宁的浓度为0.lmg/mL。(3)饱和Na2CO3溶液:称取240g无水Na2CO3,加水1200mL，于50°C水浴中搅拌溶解均匀，放置24h,过滤,所得滤液即为饱和Na2CO3溶液。实施例2:单宁标准曲线的绘制 取50mL容量瓶6个，分别加入30mL蒸馏水，再分别吸取单宁标准溶液0.0mL、1.0mL、2.0mL,3.0mL,4.0mL,5.0mL于容量瓶中，加Folir-Denis试剂2.5mL及饱和碳酸钠溶液5.0mL,加水定容至50mL (相当于单宁的浓度为0.0 μ g / mL>2.0ug / mL>4.0ug / mL、6.0yg /mL、8.0g /mLU0.0yg /mL)，充分混匀，静置30min后，以空白调零，在750nm处测吸光度，得到标准曲线(如图1所示)。实施例3:鲜桑叶中单宁的测定: (O桑叶的干燥:将鲜桑叶洗净，放入80°C烘箱中烘干，粉碎成桑叶粉后常温保存于密封袋中备用。 (2)桑叶中单宁的超声波提取:取0.5g桑叶粉于IOOmL蓝盖玻璃瓶中，加入质量比浓度为65%的乙醇溶液12.5mL，盖好瓶盖放入超声波清洗机中，在超声功率120W，温度65°C提取15min ;取出蓝盖玻璃瓶，过滤，滤液保存备用；残渣加入质量比浓度为65%的乙醇溶液12.5mL于相同条件下重复超声波提取，得到滤液，如此重复提取3次，合并滤液并定容至50mL，得提取液用于测定。(5)桑叶中单宁的测定:吸取提取液1.0mL于装有30mL水的50mL容量瓶中，加入Folir-Denis试剂2.5mL及饱和碳酸钠溶液5.0mL,加水定容至50mL并充分混匀，静置30min后，以空白调零，于750nm处测吸光度。根据标准曲线计算桑叶中单宁的含量。计算公式如下: 单丁含星(mg/g)权利要求1.，其特征在于依次通过下列步骤实现: (O单宁标准曲线的绘制: 称取单宁酸，加蒸馏水溶解、混匀，配制浓度为0.lmg/mL的单宁标准溶液；分别取单宁标准溶液 0.0mL、L OmL,2.0mL,3.0mL,4.0mL,5.0mL 于各容量瓶中，加 Folir-Denis 试剂2.5mL及饱和碳酸钠溶液5.0mL，加水定容至50mL，充分混匀，静置30min后，以空白溶液调零，在750nm处测吸光度，根据单宁浓度与对应的吸光度值绘制得到标准曲线； (2)桑叶中单宁的超声波提取: 将鲜桑叶放入80°C烘箱中烘干，粉碎成桑叶粉后放入容器中，加入质量比浓度为65%的乙醇溶液，桑叶粉与质量比浓度为65%的乙醇溶液的质量体积比为Ig:25 mL，将容器放入超声波清洗机，在功率为120W，温度为65°C下提取15min，提取完成后，过滤，滤液保存备用；残渣中加入相同体积和浓度的乙醇溶液于相同条件下重复超声波提取，得到滤液，如此重复提取3次，合并滤液并按每0.5克桑叶粉定容至50mL定本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速测定桑叶中单宁含量的方法，其特征在于依次通过下列步骤实现：（1）单宁标准曲线的绘制：称取单宁酸，加蒸馏水溶解、混匀，配制浓度为0.1mg/mL的单宁标准溶液；分别取单宁标准溶液0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL于各容量瓶中，加Folir?Denis试剂2.5mL及饱和碳酸钠溶液5.0mL，加水定容至50mL，充分混匀，静置30min后，以空白溶液调零，在750nm处测吸光度，根据单宁浓度与对应的吸光度值绘制得到标准曲线；（2）桑叶中单宁的超声波提取：将鲜桑叶放入80℃烘箱中烘干，粉碎成桑叶粉后放入容器中，加入质量比浓度为65%的乙醇溶液，桑叶粉与质量比浓度为65%的乙醇溶液的质量体积比为1g：25?mL，将容器放入超声波清洗机，在功率为120W，温度为65℃下提取15min，提取完成后，过滤，滤液保存备用；残渣中加入相同体积和浓度的乙醇溶液于相同条件下重复超声波提取，得到滤液，如此重复提取3次，合并滤液并按每0.5克桑叶粉定容至50mL定容，得提取液；（3）桑叶中单宁的测定：吸取提取液1.0mL于容量瓶中，加入Folir?Denis试剂2.5mL及饱和碳酸钠溶液5.0mL，加水定容至50mL并充分混合，静置30min后，以空白调零，于750nm处测吸光度，根据步骤（1）所得标准曲线计算桑叶中单宁的含量。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄先智，丁晓雯，韩小丹，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：