本发明专利技术涉及一种具毒性质粒沙门氏菌荧光PCR检测探针、试剂盒及检测方法，该荧光PCR检测探针具有序列为：5’-FAM-AGGGCTGGCGATGTTACTC-TAMRA-3’，705-723，19bp，Tm=57.4，GC=57.9，H0，D0，F0，Taqman荧光探针与特异性引物spvR-P35-P36配套使用进行荧光PCR检测，从而将具有毒性质粒的沙门氏菌能从众多的沙门氏菌属的种类中迅速准确检测出来。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于沙门氏菌属检测
，尤其涉及具毒性质粒沙门氏菌荧光PCR检测探针、试剂盒及检测方法。
技术介绍
现有市场上销售的沙门氏菌属荧光定量PCR检测试剂盒和沙门氏菌属荧光PCR试剂盒，这些试剂盒是运用荧光PCR技术检测出沙门氏菌属的全部种类。但现有技术的PCR检测沙门氏菌属均为普通PCR方法，其检测灵敏度较低，检测速度较慢，PCR扩增时间太长，电泳成本较高且时间长。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题在于:提供一种具毒性质粒沙门氏菌荧光PCR检测探针，从而实现将具有毒性质粒的沙门氏菌能从众多的沙门氏菌属的种类中迅速准确检测出来。本专利技术要解决的又一技术问题在于:提供一种具毒性质粒沙门氏菌荧光PCR检测试剂盒，以利于方便快捷地将致病性沙门氏菌检出。本专利技术要解决的再一技术问题在于:提供一种具毒性质粒沙门氏菌荧光PCR检测方法，从而将具有毒性质粒的沙门氏菌能从众多的沙门氏菌属的种类中迅速准确检测出来。 为解决上述技术问题，本专利技术采取的技术方案是:具毒性质粒沙门氏菌荧光PCR检测探针，为Taqman荧光探针,具有序列为: 5’ -FAM-AGG GCT GGC GAT GTT ACT C-TAMRA-3’705-723 19bp Tm= 57.4 GC=57.9HO DO FO 所述Taqman荧光探针与特异性引物spVR-P35_P36配套使用进行荧光PCR检测。进一步地，所述特异性引物spvR-P35_P36为: 上游引物: P35:5’ -GGA AAT CGG ACC TAC GGG-3’249-266 18bp Tm=57.4 GC=61.1% HO DO FO 下游引物: P36:5’ -AAT CCC AGA GCC CGA CAG-3’755-738 18bp Tm=57.7 GC=61.1% HO DO F0。本专利技术还提供毒性质粒沙门氏菌荧光PCR检测试剂盒，其包括所述的具毒性质粒沙门氏菌荧光PCR检测探针。进一步地，所述试剂盒还包括沙门氏菌PCR反应液、Taq酶、沙门氏菌阳性对照及沙门氏菌阴性对照；所述沙门氏菌PCR反应液包括所述具毒性质粒沙门氏菌荧光PCR检测探针以及所述引物P35和引物P36。进一步地，所述沙门氏菌阳性对照为鼠伤寒沙门氏菌DNA提取液；所述沙门氏菌阴性对照为大肠埃希氏菌DNA提取液。进一步地，所述试剂盒中的相对规格为:沙门氏菌PCR反应液为500 ML，Taq酶为5U/ML 20 ML，沙门氏菌阳性对照为0.5 mL，沙门氏菌阴性对照为0.5 mL ;所述检测试剂盒还包括一细菌基因组DNA提取试剂盒。进一步地，所述沙门氏菌PCR反应液组成及配比为:不含MgCl2的10 X PCR缓冲液 2.5iiL，25 mmol/L MgCl2 3 u L, 10 mmol/L dNTPs 0.5 u L, 10 ii mol/L 的引物 P35 和引物P36各0.5iiL，10iimol/L的TaqMan探针0.5 y L ;或者，单次反应25 y L PCR反应液组成及配比为:Mg2+ Plus 的 10 XPCR 缓冲液 3.0ii L，25mM each 的 dNTP Mixture 0.5u L,5 U/U L 的 Taq DNA 聚合酶 0.25 ii L，25 ii mol/L 的 TaqMan 探针 0.5 ii L，50 ii mol/L 的引物 P35为 0.5 ii L，50 ii mol/L 的引物 P36 为 0.5 y L，50 y g/mL 模板 DNA 为 2 y L,超纯水 17.75 u L。本专利技术还提供具毒性质粒沙门氏菌荧光PCR检测方法，包括以下步骤: 步骤1:模板DNA提取； 步骤2:配制荧光PCR反应体系，并设定空白、沙门氏菌阳性对照、沙门氏菌阴性对照，所述荧光PCR反应体系包括上述具毒性质粒沙门氏菌荧光PCR检测探针； 步骤3:设定PCR反应条件进行荧光PCR检测； 步骤4:结果判断:根据扩增结果，对照空白管、阳性对照管、阴性对照管扩增曲线，确定样品的扩增结果。进一步地，步骤2中所述沙门氏菌阳性对照为鼠伤寒沙门氏菌DNA提取液；所述沙门氏菌阴性对照为大肠埃希氏菌DNA提取液。进一步地，所述步骤2的荧光PCR反应体系25 L单次反应时组成及配比如下: 10 X PCR 缓冲液 Mg2+ Plus 3.0il L: 500mmol/L KCl, 100mmol/L Tris Cl,在 25。。下，pH9.0, 1.0% Triton X-100dNTP Mixture 25mM each:0.5 u L5 U/u L Taq DNA 聚合酶:0.25 U L25 u mol/L TaqMan 探针:0.5 U L50 ii mol/L 引物 35: 0.5 u L50 ii mol/L 引物 36: 0.5 u L50 u g/mL 模板 DNA: 2 u L超纯水:17.75iiL 所述PCR反应条件为95°C，5 min ；95°C , 5s, 60 V，40 s, 40个循环，4°C保存。本专利技术的有益效果:本专利技术利用特异性引物和探针，运用荧光PCR技术将具有毒性质粒的沙门氏菌能从众多的沙门氏菌属的种类中迅速检测出来，而具有毒性质粒沙门氏菌种类，均为高致病性沙门氏菌，可以引起人类和动物致病，也是食源性疾病的重要病原菌之一。故本专利技术《具毒素质粒沙门氏菌荧光PCR快速检测试剂盒》不仅用于食品检测，也可应用于医学诊断。 本专利技术的具毒素质粒沙门氏菌荧光PCR检测探针、试剂盒及检测方法，能快速检测出具有毒性质粒的有致病作用的沙门氏菌，比普通PCR的检测速度更快，不仅大大节省PCR的扩增时间，也节省了电泳的成本和时间，有助于对人和动物常见沙门氏菌病的早期临床诊断和食物、水源、环境中沙门氏菌的跟踪监测，并对于公共卫生、食品卫生、畜牧兽医和口岸检疫中的致病性沙门氏菌的检出具有重要的实际意义。附图说明图1 (纵座标表示的是荧光强度，横座标表示是循环数)是本专利技术实施例的具毒素质粒沙门氏菌荧光PCR快速检测试剂盒检测图谱，其中从下往上9条曲线分别表示:1:大肠埃希氏菌(阴性对照)、S空白对照、1:鼠伤寒沙门氏菌、I猪霍乱沙门氏菌、￡样品分离株沙门氏菌、S鸡白痢沙门氏菌、T鸡伤寒沙门氏菌、I'羊流产沙门氏菌、I；肠炎沙门氏菌。具体实施例方式以下具体实施例对本专利技术作进一步的说明，以下实施例仅用于说明本专利技术，而不用于限定本专利技术的范围。具有毒性质粒的沙门氏菌菌株对小鼠的毒力要比其相应的无质粒菌株强至数百甚至数万倍，截至目前已先后在鼠伤寒、猪霍乱、肠炎、羊流产、鸡伤寒、鸡白痢等沙门氏菌中鉴定出不同分子量的毒力质粒，由于不同血清型沙门氏菌的毒力质粒(spv)中存在一个含毒力基因的高度保守的IOkb左右的区域，因此通过对此保守区的检测，可以鉴定出常见的具有毒性质粒的沙门氏菌。本专利技术基于最常见的具有毒性质粒的沙门氏菌种类，在普通PCR的基础上，设计出一条具有序列特异性的Taqman荧光探针；最终连同常规的DNA提取液，沙门氏菌PCR反应液、Taq酶等组装成一套具毒素质粒沙门氏菌荧光PCR快速检测试剂盒。 从NCBI本文档来自技高网...
【技术保护点】
具毒性质粒沙门氏菌荧光PCR检测探针，为Taqman荧光探针，具有序列为：5’?FAM?AGG?GCT?GGC?GAT?GTT?ACT?C?TAMRA?3’???????705?72319bp????Tm=?57.4???GC=57.9???????H0?????D0????F0所述Taqman荧光探针与特异性引物spvR?P35?P36配套使用进行荧光PCR检测。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：马立农，
申请(专利权)人：深圳职业技术学院，
类型：发明
国别省市：
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