本发明专利技术涉及具有肌醇六磷酸酶活性的多肽和编码它的多核苷酸，具体地涉及来源于无丙二酸柠檬酸杆菌(Citrobacter?amalonaticus)、Citrobacter?gillenii的柠檬酸细菌肌醇六磷酸酶和有关的肌醇六磷酸酶。肌醇六磷酸酶属于酸性组氨酸磷酸酶家族，具有酸稳定性，预期具有高比活性。本发明专利技术也涉及相应的DNA、生产该肌醇六磷酸酶的重组和野生型方式，以及其用途，特别是在动物饲料中的用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及具有肌醇六磷酸酶活性的分离的多肽和编码该多肽的分离的多核苷酸。多妝与来源于无丙二酸朽1樣酸杆菌(Citrobacter amalonaticus)和Citrobactergillenii的朽1檬酸细菌属(Citrobacter)肌醇六磷酸酶有关,他们的氨基酸序列在附加的序列表显示为SEQ ID N0:4和6。专利技术也涉及包含多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及生产和使用该多肽的方法，特别是在动物饲料中使用多肽。
技术介绍
肌醇六磷酸酶(phytase)是公知的酶，他们具有添加到动物食品，包括人食品中的优点。已经从许多来源，包括许多真菌和细菌菌株中分离出肌醇六磷酸酶。已知大肠杆菌的酸性组氨酸磷酸酶appA和其他革兰氏阴性细菌肌醇六磷酸酶具有高比活性。Kim 等在 Biotechnology Letters25:1231-1234，2003 中报道了布氏朽1 樣酸杆菌(Citrobacter braakii)YH_15生产胞内肌醇六磷酸酶的情况。KR-2004-A-045267和W0-2004/085638中以SEQ ID NO: 7公开了来自保藏号为KCCM10427的布氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii) YH-15的肌醇六憐酸酶的氨基酸序列。W0-2004/085638的公开日是2004年7月10日，即是在本申请的第一个优先权日之后公开的。提供具有肌醇六磷酸酶活性的可选择的多肽和编码该多肽的多核苷酸是本专利技术的一目的。本专利技术的多肽优选具有被改变的特性，更优选具有改进的特性，例如不同的底物特异性、更高的比活性(specific activity)、增加的稳定性(例如酸稳定性、热稳定性和/或蛋白酶稳定性，特别是胃蛋白酶稳定性)、改变的PH最适条件(例如，更低或更高的pH最适条件)，和/或在动物饲料中改善的性能(例如，改善的肌醇六磷酸盐的释放和/或降解)。
技术实现思路
本专利技术涉及从由:(a)具有与(i)SEQ ID NO:2的氨基酸1-409、(ii)SEQ ID NO:2的成熟多肽部分、(iii) SEQ ID N0:4的氨基酸1-410、(iv) SEQ ID N0:4的成熟多肽部分、(V)SEQ ID NO: 6的氨基酸1-414、和/或(Vi)SEQ ID NO: 6的成熟多肽部分有至少75%同一性的氨基酸序列的多肽；(b)至少在中等严谨条件下与(i)SEQ ID NO:1的核苷酸67-1293、(ii)SEQ ID NO:1 的成熟多肽编码部分、(iii) SEQ ID NO: 3 的核苷酸 67-1296、(iv) SEQ IDNO:3的成熟多肽编码部分、(V)SEQ ID NO:5的核苷酸67-1308、(vi)SEQ ID N0:5的成熟多肽编码部分、和/或(vii) (i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)任何一项的互补链杂交的多核苷酸编码的多肽；(C)包含一个或多个氨基酸保守取代、缺失和/或插入的(a) (i)-(a)(vi)的任何一个多肽的变体；和(d)(a) (i)-(a) (vi)的任何一个多肽的片段组成的组中选择出来的具有肌醇六磷酸酶活性的多肽。本专利技术也涉及编码具有肌醇六磷酸酶活性的多肽的分离的多核苷酸，其选自:(a)编码具有与(i)SEQ ID NO:2的氨基酸1-409、(ii)SEQ ID NO:4的氨基酸1-410、和/或(iii)SEQ ID NO: 6的氨基酸1-414中的任何一个有至少75%同一性的氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与(i)SEQ ID NO:1 的核苷酸 67-1293、(ii) SEQ ID NO: 3 的核苷酸 67-1296、和/或(iii)SEQ ID NO:5的氨基酸67-1308中的任何一个有至少75%同一性的多核苷酸；(c)至少在中等严谨条件下与(i)SEQ ID NO:1的核苷酸67-1293、(ii)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码部分、(iii) SEQ ID NO:3的核苷酸67-1296、(iv) SEQ ID N0:3的成熟多肽编码部分、(V)SEQ ID NO:5的核苷酸67-1308、(vi)SEQ ID NO:5的成熟多肽编码部分、和/或(vii)(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)任何一项的互补链杂交的多核苷酸。本专利技术也涉及包含该多核苷酸的核酸构建体、重组表达载体和重组宿主细胞。本专利技术也涉及生产这种具有肌醇六磷酸酶活性的多肽的方法，包括(a)在有助于生产这种多肽的条件下培养包含含有编码该多肽的多核苷酸的核酸构建体的重组宿主细胞；和(b)回收多肽。本专利技术也涉及在动物饲料，以及包含该多肽的动物饲料和动物饲料添加剂组合物中使用本专利技术的多肽的方法。 本专利技术更进一步地涉及包含操作性地与编码信号肽的核苷酸序列相连的编码蛋白质的基因的核酸构建体，其中信号肽由(i)SEQ ID NO:1的核苷酸1-66，(ii) SEQ ID NO:3的核苷酸1-66，或(iii)SEQ ID NO:5的核苷酸1_66组成，基因与核苷酸序列异源。具体地，本专利技术涉及如下各项:1.具有肌醇六磷酸酶活性的分离的多肽，选自下组:(a)具有氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与(i)SEQ ID NO:2的氨基酸1_409、(ii)SEQ ID N0:2 的成熟多肽部分、(iii) SEQ ID NO:4 的氨基酸 1-410、(iv) SEQ ID NO:4的成熟多肽部分、(V) SEQ ID N0:6的氨基酸1-414、和/或(vi)SEQ ID N0:6的成熟多肽部分有至少75%同一性；(b)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸在至少中等严谨条件下与(i)SEQ IDNO:1的核苷酸67-1293、(ii) SEQ ID NO:1的成熟多肽编码部分、(iii) SEQ ID NO: 3的核苷酸67-1296、(iv) SEQ ID NO: 3的成熟多肽编码部分、(v) SEQ ID NO: 5的核苷酸67-1308、(vi)SEQ ID NO: 5 的成熟多肽编码部分、和 / 或(vii) (i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)任何一项的互补链杂交；(c) (a) (i)-(a) (vi)任何一个多肽的变体，其包含一个或多个氨基酸缺失、插入和/或保守取代；和(d) (a) (i)-(a) (vi)的任何一个多肽的片段。2.分离的多核苷酸，其包含编码项I的多肽的核苷酸序列。3.编码具有肌醇六磷酸酶活性的多肽的分离的多核苷酸，选自:(a)编码多肽的多核苷酸，所述多肽具有的氨基酸序列与(i)SEQ ID NO:2的氨基酸 1-409、(ii)SEQ ID NO: 4 的氨基酸 1-410 和 / 或(iii) SEQ ID NO: 6 的氨基酸 1-414 中的任何一个有至少75%的同一性；(b)与(i)SEQ ID NO:1 的核苷酸 67-1293、(ii)SEQ ID NO: 3 的核苷酸 67-1296、和/或(iii) SEQ ID NO: 5的核苷酸67-1308中的任何一个有至少75%同一性的多核苷酸；(c)多核苷酸，其在至少中等严谨条件下与(本文档来自技高网...
【技术保护点】
具有肌醇六磷酸酶活性的分离的多肽，选自下组：(a)具有氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与(i)SEQ?ID?NO:2的氨基酸1?409、(ii)SEQ?ID?NO:2的成熟多肽部分、(iii)SEQ?ID?NO:4的氨基酸1?410、(iv)SEQ?ID?NO:4的成熟多肽部分、(v)SEQ?ID?NO:6的氨基酸1?414、和/或(vi)SEQ?ID?NO:6的成熟多肽部分有至少75%同一性；(b)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸在至少中等严谨条件下与(i)SEQ?ID?NO:1的核苷酸67?1293、(ii)SEQ?ID?NO:1的成熟多肽编码部分、(iii)SEQ?ID?NO:3的核苷酸67?1296、(iv)SEQ?ID?NO:3的成熟多肽编码部分、(v)SEQ?ID?NO:5的核苷酸67?1308、(vi)SEQ?ID?NO:5的成熟多肽编码部分、和/或(vii)(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)任何一项的互补链杂交；(c)(a)(i)?(a)(vi)任何一个多肽的变体，其包含一个或多个氨基酸缺失、插入和/或保守取代；和(d)(a)(i)?(a)(vi)的任何一个多肽的片段。...
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：莫尼卡塔卡米娅，卡斯滕肖霍尔姆，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：
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