使用膨胀床色谱从植物中捕获病毒样颗粒的方法技术

本发明专利技术涉及用于从混合物中捕获目的病毒样颗粒的方法，包括使用吸附剂的膨胀床，合适地，其中所述方法包括步骤：(a)提供吸附剂膨胀床；(b)将混合物与吸附剂相接触，使得混合物中的成分结合于吸附剂；(c)可选地，洗涤吸附剂；以及(d)可选地，从吸附剂中洗脱病毒样颗粒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及从混合物中对目的颗粒——如病毒样颗粒(例如,重组表达的自装配VLP)的捕获。本专利技术能够对目的颗粒进行有效捕获，并可扩大规模到商业规模用途的大体积。前言基因工程革命已扩展到开发可进行多种应用的重组蛋白质，包括人类及动物治疗齐U。美国FDA批准了大约超过100种生物技术来源的治疗剂及疫苗用于医疗用途，此外，有超过1000种其他药物和疫苗正进行不同阶段的临床试验。目前，细菌、酵母、昆虫、植物和哺乳动物细胞表达系统用于生产重组蛋白质有不同的成功程度。尽管技术上的此项发展掀起了一场药物和治疗产品的生产和传递上的革命，但在对可获得的分子的纯化方面还存在问题。例如，纯化来自细菌的蛋白质要求裂解细胞，这可能需要数个步骤以及溶液澄清。这样，纯化过程中使用的色谱树脂会容易结块，于是细胞提取物可能需要通过其他过程进行进一步澄清一如通过离心或过滤。还可能需要多阶段的纯化过程，这会花费时间且还会导致样品的丢失及降低产出。目的蛋白质的纯化过程可能很昂贵，而且面临技术挑战。下游的加工可占据整个成本的高达80%。在蛋白质的纯化中广泛采用填充床吸附色谱。使用填充床需要移除整个细胞或胶质碎片。碎片的移除在实验室规模过程的开发中常常受到忽视，但其却是达到高效率的最挑战的操作之一。膨胀床吸附是近期发展的方法，可用于纯化可溶性蛋白质，对加工流的澄清过程要求不高。其使液体流穿起始的填充床结构以接触高的流体空隙。病毒样颗粒(VLP)是用于生产重组蛋白质，尤其是免疫原性重组蛋白质如免疫原性病毒重组蛋白质的一个手段。许多病毒具有的衣壳可由单独表达的结构蛋白质组装而成，组装过程可以在体内在形成VL`P的过程中表达结构蛋白质和重组蛋白质的细胞内进行，也可在分离和纯化后在细胞外部进行。然而，在含有高含量悬浮固体和不同大小的颗粒的混合物中要捕获这些VLP在技术上非常具有挑战性，这通常是在涉及植物来源材料的情况下。当将VLP注射入动物以诱导产生阻断感染的抗病毒抗体时，VLP可能是免疫原性的。因此，例如以用来自H5N1禽流感菌株的蛋白质产生的病毒样颗粒免疫的小鼠可在以致死性H5N1病毒攻击时得到保护。在工业上仍然需要一种方法用于以提高的效率和产率捕获目的颗粒。还需要一种可规模化用于商业水平的方法用于以成本有效的形式捕获颗粒。专利技术概述本专利技术至少部分地基于此项发现:膨胀床吸附(EBA)色谱对从混合物中捕获目的颗粒尤其有效。特定实施方式中，此方法可有利地用于在一步结合及洗脱过程中捕获目的颗粒，这可规模化到商业水平。在一个一般方面，提供了用于从混合物中捕获目的颗粒的方法，其包括使用吸附剂膨胀床。在一个实施方式中，所述方法包括步骤:(a)提供吸附剂的膨胀床；(b)将混合物与吸附剂相接触，使混合物的成分与吸附剂的膨胀床接触并相互作用；(C)可选地，洗涤吸附剂；以及(d)可选地，从吸附剂中洗脱目的颗粒。在一个实施方式或上述实施方式的组合中，目的颗粒是目的生物学颗粒。在一个实施方式或上述实施方式的组合中，目的颗粒包含至少一种蛋白质。在一个实施方式或上述实施方式的组合中，目的颗粒包含至少两种蛋白质，其中至少一种是目的蛋白质。在一个实施方式或上述实施方式的组合中，目的颗粒是病毒样颗粒。在本专利技术的第一个方面，提供了用于从混合物中捕获病毒样颗粒的方法，其包括使用吸附剂膨胀床，合适地，其中所述方法包括步骤:(a)提供吸附剂的膨胀床；(b)将混合物与吸附剂相接触，使混合物中的病毒样颗粒与吸附剂结合；(C)可选地，洗涤吸附剂；以及(d)可选地，从吸附剂中洗脱目的颗粒。在所述第一方面的一个实施方式中，本专利技术进一步涉及根据前述实施方式或上述实施方式的组合的方法，其中所述病毒样颗粒包含流感病毒的蛋白质，特别是血凝素；合适地，其为选自 H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、Hll、H12、H13、H14、H15 或 H16 的血凝素亚型或其中两种或 更多种的组合。在包括所述第一方面的实施方式的一个实施方式或上述更实施方式的组合中，吸附剂包含在柱子当中。在包括所述第一方面的实施方式的一个实施方式或上述实施方式的组合中，混合物为植物，或来源于植物。在包括所述第一方面的实施方式的一个实施方式或上述实施方式的组合中，所述植物是天然发生的植物、突变体植物、非天然发生的植物或转基因植物。在一个实施方式或上述实施方式的组合中，混合物为植物叶子，或来源于植物叶子。在包括所述第一方面的实施方式的一个实施方式或上述实施方式的组合中，在与吸附剂接触之前通过对植物材料均质化而产生所述混合物。因此，根据所述实施方式，混合物为均质化的植物材料。在包括所述第一方面的实施方式的一个实施方式或上述实施方式的组合中，所述植物为植物细胞——如生长于培养物中或在植物之外生长的植物细胞，如体外生长的植物细胞或细胞团块——如胡萝卜细胞。在本专利技术第一个方面的一个实施方式中，本专利技术提供了根据前述任何实施方式或前述实施方式组合的方法，其中混合物包含破裂的植物细胞；合适地，其中植物为浸润了在植物中瞬时表达特定蛋白质的核酸分子的烟草植物，所述蛋白质存在于病毒样颗粒中；更合适地，其中混合物为植物的地上部分，或来源于植物的地上部分。在包括所述第一方面的实施方式的一个实施方式或上述实施方式的组合中，吸附剂包含多个的珠子。在包括所述第一方面的实施方式的一个实施方式或上述实施方式的组合中，珠子为包含惰性内核材料的复合珠子。在包括所述第一方面的实施方式的一个实施方式或上述实施方式的组合中，珠子包含选自塑料、甲基丙烯酸酯、阴离子交换剂、二乙氨基乙基、阳离子交换剂、多糖、硅石、聚(苯乙烯-二乙烯)苯、聚丙烯酰胺、陶瓷及其衍生物的材料或其中两种或更多种的组合，或由其构成，或基本上由其构成。在包括所述第一方面的实施方式的一个实施方式或上述实施方式的组合中，珠子包含多糖；合适地为纤维素、琼脂糖、右旋糖或其衍生物，或前述的两种或更多种的组合，或由其构成，或基本上由其构成。在包括所述第一方面的实施方式的一个实施方式或上述实施方式的组合中，惰性内核材料包含选自以下的材料，或由所述材料构成，或基本上由所述材料构成:石英，娃石，Nd-Fe-B合金，不锈钢，锆氧化物，氧化锆，金属硅酸盐，金属硼硅酸盐，陶瓷包括二硼化钛，碳化钛，二硼化锆，碳化锆，碳化钨，碳化硅，氮化铝，氮化硅，氮化钛，氧化钇，硅的金属粉末，以及二娃化钥；金属氧化物和硫化物，包括镁，招，钛，银，铬，错，铪，猛，铁，钴，镍，铜和银的氧化物；非金属氧化物；金属盐，包括硫酸钡；金属元素，包括钨，锆，钛，铪，钒，铬，锰，铁，钴，镍，铟，铜，银，金，钯，钼，钌，锇，铑和铱，以及金属元素的合金，如所述金属元素之间形成的合金及其衍生物的材料，或其中两种或更多种的组合。在包括所述第一方面的实施方式的一个实施方式或上述实施方式的组合中，珠子的大小为大约5 μ m-500 μ m或更大。在包括所述第一方面的实施方式的一个实施方式或上述实施方式的组合中，结合目的颗粒的珠子大小为大约25 μ m-100 μ m,合适地,为大约50 μ m。在包括所述第一方面的实施方式的一个实施方式或上述实施方式的组合中，结合目的颗粒之外的材料例如植物材料的珠子大小为大约125 μ m-250 μ m,合适本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·利姆，K·奥伊什，I·瓦斯特，R·卡布雷拉，
申请(专利权)人：菲利普莫里斯生产公司，
类型：
国别省市：