在本文中报道了用于将具有非生理性pH值的进料溶液加入到细胞培养容器的进料混合装置及其用途，所述装置包含在将进料溶液加入到所述细胞培养容器之前用于混合进料溶液的小室。使用如在本文中所报道的进料混合装置，可以在进料组分具有好的溶解度和/或好的稳定性的pH的溶液中提供进料组分，由此可以使该pH值明显不同于培养基的pH值，即不同于生理性pH值。与进料溶液的pH值被限制在培养的pH值附近很小范围的培养相比，这允许更灵活地进行培养。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】进料混合装置及其用途在本文中报道了一种进料混合装置，其允许将具有非生理性PH值的两种或两种以上进料溶液同时进料给培养基，借此在加入培养基之前，在进料混合装置内将总进料溶液的PH值调整至例如，生理性pH值。专利技术背景为了在哺乳动物细胞的培养中增加产物产量或者培养时间，将进料溶液加入到培养基，以使必需的培养基组分的浓度维持在临界水平或者临界水平之上。具有与培养基不同物理性质的水溶液的进料将影响培养基的物理参数，如渗透性或PH值。由于不同组分差的溶解度或者所需的稳定性，所以有时不得不将进料溶液的pH值改变成非生理性值。Luan, Y.T.，等人报·道了在培养中延长杂交瘤的寿命，并提高单克隆抗体的产量的策略(Biotechnol.Lett.9 (1987) 691-696)。Dempsey, J.，等人报道了用于表达人抗体和谷氨酰胺合成酶的NSO细胞系的改进的发酵工艺(Biotechnol.Prog.19 (2003)175-178)。Bibila, T.A.,等人报道了使用培养基浓缩物进行的单克隆抗体方法的研发(Biotechnol.Prog.10 (1994) 87-96)。在W02008/013809中报道了细胞培养方法。在US2006/0003448中报道了干粉细胞和细胞培养试剂以及其产生的方法。在US5，081，036中报道了用于细胞培养的方法和设备。在US5，681，748中报道了培养基浓缩技术。在US6，924，124中报道了用于细胞培养的进料策略。在W02009/132616中报道了供应系统。在W02010/045168中报道了使用商业规模的生物反应器生产乙醇和糖的方法和设备。在US2003/0092652中报道了用于核酸分子的保护性单瓶制剂(protected one-vial formulation)、通过线内混合制备用于核酸分子的保护性单瓶制剂的方法，以及相关的产品和方法。专利技术概述使用如在本文中所报道的进料混合装置，可以例如在具有使组分具有好溶解度和/或好稳定性的PH值的溶液中提供进料组分，从而pH值可以不同于培养基的pH值，即溶液具有小于PH6.5或者大于pH7.5的彼此相互独立的pH值。与在例如进料溶液的pH值被限制在培养基的PH值附近很小范围的培养相比较，这允许更灵活地进行培养。如在本文中所报道的一方面是用于将各自具有非生理性pH值的至少两种溶液加入细胞培养容器的装置，所述装置包含在将溶液加入到细胞培养容器之前，用于混合溶液的小室。在一个实施方案中，用于混合溶液的小室的体积与培养容器中培养基的体积的比例为0.8ml/l至L2ml/1。在一个实施方案中，该比例为0.9ml/l至1.lml/1。在一个实施方案中，该比例为约lml/1。在一个实施方案中，该比例为0.95ml/l。在一个实施方案中，培养基的体积是在起始培养时，培养容器中液体的体积。在一个实施方案中，各自具有非生理性pH值的至少两种溶液，至少一种是酸性溶液并且至少一种是碱性溶液。在一个实施方案中，各自具有非生理性pH值的至少两种溶液具有相互独立的小于pH6.5或者大于pH7.5的pH值。在一个实施方案中，各自具有非生理性pH的至少两种溶液具有相互独立的pHO至pH6.49或者pH7.51至pH14的pH值。在一个实施方案中，酸性和碱性溶液的pH值与培养基的pH值相差至少0.5个pH单位。在一个实施方案中，酸性溶液具有PH6.5或更低的pH值。在一个实施方案中，酸性溶液具有PH4.0或更低的pH值。在一个实施方案中，碱性溶液具有pH8.0或更高的pH值。在一个实施方案中，碱性溶液具有10.0或更高的pH值。在一个实施方案中，将该装置用于加入具有非生理性pH值的两种至四种单独的溶液，其中任选地至少一种是酸性溶液，并且至少一种是碱性溶液。在一个实施方案中，每种溶液都是包含选自氨基酸、糖、维生素、微量元素、乳酸和生长因子的至少一种化合物的进料溶液。在一个实施方案中，用于混合溶液的小室与培养容器是分离的，并且所述小室包含进入到培养容器的内部的出口。在一个实施方案中，小室在培养容器的外部或者在培养容器的内部。在一个实施方案中，小室具有0.1ml至50，OOOml的体积。在一个实施方案中，小室具有0.25ml至30，OOOml 的体积。在一个实施方案中，小室具有0.5ml至1，OOOml的体积。在一个实施方案中，小室具有约1.15ml、或者约8ml、或者约80ml、或者约200ml、或者约400ml、或者约800ml、或者约1.61、或者约41、或者约81、或者约161、或者约401的体积。在一个实施方案中，在加入到培养容器之前立即混合。在一个实施方案中，用于混合溶液的小室包含用于每种溶液的各个连接器的入□。在一个实施方案中，该装置是可灭菌的。如在本文中所报道的另一方面是如在本文中所报道的装置在细胞的补料分批或者连续培养中的用途。如在本文中所报道的又一方面是包含如在本文中所报道的装置的培养容器。如在本文中所报道的一个方面是用于产生多肽的方法，其包括以下步骤:-在包含如在本文中所报道的装置的培养容器中以补料分批或连续培养的方式培养包含编码多肽的核酸的细胞，由此在培养期间加入至少一种酸性进料溶液和至少一种碱性进料溶液，和-从培养基或细胞中回收多肽，从而产生多肽。在一个实施方案中，当加入到培养容器中时，混合的进料溶液具有pH4.5至pH9.5的pH值。在一个实施方案中，当加入到培养容器中时，混合的进料溶液具有pH6.5至pH7.5的pH值。在一个实施方案中，培养容器具有约21、或者101、或者201、或者1001、或者2501、或者 5001、或者 I, 0001、或者 2，0001、或者 5，0001、或者 10，0001、或者 20，0001、或者50，0001的体积。在一个实施方案中，培养基的体积为约1.21、或者约81、或者约161、或者约801、或者约2001、或者约4001、或者约8001、或者约1，6001、或者约4，0001、或者约8，0001、或者约 16，0001、或者约 40，0001。在一个实施方案中，如在本文中所报道的装置在室温运行。如在本文中所报道的又一方面是用于获得具有减少的G(O)糖形和/或增加的Gd)糖形的多肽的方法，其包括以下步骤:-在包含如在本文中所报道的装置的培养容器中以补料分批或连续培养的方式培养包含编码多肽的核酸的细胞，由此在培养期间加入至少一种酸性进料溶液和至少一种碱性进料溶液，和-从培养基或细胞中回收多肽，从而获得具有减少的G(O)糖形和/或增加的G(I)糖形的多肽。其中当加入到培养容器中时，混合的进料溶液具有pH4.0至pH6.0的pH值。在一个实施方案中，多肽是抗体或者Fe-融合的多肽。专利技术详述广泛地用于生产治疗性多肽或生物质的方式是补料分批发酵。在补料分批发酵中，哺乳动物细胞培养物的细胞密度通常超过100*105个细胞/ml，由于某些物质或者物质种类的低溶解度和/或受损的稳定性，导致了在提供足够量的所需培养物质中的挑战。因此，通常的方法是使用具有非生理性pH值的进料溶液，来溶解或者稳定所需量的这些物质。例如，由于酪氨酸的低溶解度，所以通过液体进料溶液很难在PH7左右的pH值足够本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.12.07 EP 10194025.21.用于将各自具有非生理性PH值的至少两种进料溶液加入到细胞培养容器中的装置，所述装置包含用于进料溶液的单独的入口、用于混合进料溶液的小室和用于将混合的进料溶液加入到细胞培养容器中的单个出口，由此用于混合进料溶液的小室的体积与培养容器中培养基的体积的比例为0.8ml/l至1.2ml/l。2.根据权利要求1的装置，其特征在于所述比例为约lml/1。3.根据前述权利要求任一项的装置，其特征在于所述装置与所述培养容器分离，并且所述出口通往所述培养容器的内部。4.根据前述权利要求任一项的装置，其特征在于所述进料混合装置在所述培养容器的外部或者在所述培养容器的内部。5.根据前述权利要求任一项的装置，其特征在于用于混合所述进料溶液的所述小室具有0.5ml至1，OOOml的体积。6.根据前述权利要求任一项的装置，其特征在于所述装置由可灭菌材料制成。7.细胞培养设备，其包含 a)细胞培养容器， b)气体供应， c)用于各自具有非生理性pH值的进料溶液的至少两个液体储存器， d)用于测定细胞培养容器中的pH值的至少一个传感器，和 e)根据权利要求1至6任一项的装置。8.根据权利要求1至6任一项的装置或者根据权利要求7的设备在细胞的补料分批或连续培养中的用途。9.用于产生多肽的方法，其包括以下步骤 -使用包含根据权利要求1至6任一项的装置的培养容器或权利要求7的设备以补料分批或连续培养的方式培养...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·鲍曼，J·霍夫曼，A·约克尔，C·克灵格尔，T·特洛布斯，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：
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