【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及大肠杆菌生物膜检测方法-96孔半定量法。
技术介绍
细菌生物膜(Bacterial biofilm, BF)是相对于单个分散的浮游状态的细菌(planktonic cells)生存形式而言的一种独特的细菌生存形式。Costerton等将其定义为:附着于有生命或无生命物体的表面，被细菌分泌的胞外黏质包裹的，具有高度组织化的细胞群体结构。BF是细菌在表面生活时采取的一种生长方式，它是细菌的一种本能，某一菌株能否形成BF，是与其所处的环境密切相关的，如环境中的营养成分、温度、渗透压、pH、铁离子浓度和氧化还原电位等因素，其中，营养成分对BF的形成具有重要作用。生物膜是附着在固体表面的微生物群体，这些细胞镶嵌在多聚物的外表面，展现出许多表型的改变，当细菌受到各种压力，如极端的营养缺乏或过剩，低PH值，高渗透压，氧化，抗菌剂和抗生素等，大量的细菌为了对抗不利的环境，通过自身合成的水合多聚物粘附在固体表面，以同着的方式生长从而形成生物膜，这是细菌所具有的一种非常重要的环境适应机制。生物膜的形成涉及到几个明显的阶段，包括:起始的附着、细胞与细胞之间的吸附与增殖、...
【技术保护点】
一种针对大肠杆菌生物膜检测方法?96孔半定量法，其特征在于，包括以下步骤：(1)从?70℃冰箱中取出甘油保存菌株，待菌液在冰浴下溶解后，取100μL菌液接种于5mL?LB液体培养基中，于37℃过夜震荡培养；(2)将菌液接种于麦康凯固体培养基中，置于37℃恒温培养箱内培养24h；(3)从麦康凯培养基中挑取红色单菌落，接种到新鲜的LB液体培养基，37℃恒温振荡培养16h；(4)按1∶100倍稀释：取培养的菌液50μL于新鲜的5mL?LB试管液体培养基上，于37℃缓慢震荡4.5h，保证细菌处于对数生长期；(5)测OD600nm(6)用灭菌的M9培养基将所测OD600nm值稀释至0...
【技术特征摘要】
1.一种针对大肠杆菌生物膜检测方法-96孔半定量法，其特征在于，包括以下步骤: (1)从_70°C冰箱中取出甘油保存菌株，待菌液在冰浴下溶解后，取100μ L菌液接种于5mL LB液体培养基中，于37°C过夜震荡培养； (2)将菌液接种于麦康凯固体培养基中，置于37°C恒温培养箱内培养24h； (3)从麦康凯培养基中挑取红色单菌落，接种到新鲜的LB液体培养基，37°C恒温振荡培养16h ； (4)按I: 100倍稀释:取培养的菌液50 μ L于新鲜的5mL LB试管液体培养基上，于37°C缓慢震荡4.5h，保证细菌处于对数生长期； (5)测OD6tltlnm(6)用灭菌的M9培养基将所测OD6tltlnm值稀释至0.01 ; (6)取200μ L稀释至0.01菌液加入96孔U型平底板中，用Μ9液体培养基作为空白对照，于37°C恒温箱中分别培养24-48h ； (7)将培养好的96孔U型平底板从恒温箱中取出，弃菌液； (8)用I% PBS缓 冲液洗96孔U型平底板，重复三次，弃洗液，拍干； (9)将甲醇放入96孔U型平底板中固定15min，倒出并晾干； (10))将I%结晶紫溶液加入96孔U型平底板中，染色5min，自来水缓慢冲洗多次，晾干，观察板底部有无生物膜形成； (11)用33%的冰醋酸加于96孔U型平底板中，待细菌生物膜完全溶解后，用全波长酶标仪中测定OD6tltlnm，测定OD6tltlnm值减去空白对...
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